骨形成蛋白9腺病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建骨形态发生蛋白9(BMP9)基因腺病毒表达载体及稳定产毒细胞系,为观察其对T2DM糖、脂代谢异常的干预效应奠定基础。方法质粒pCMV/BMP9双酶切克隆至腺病毒载体Ad5.F,构建重组腺病毒表达载体Ad5.BMP9.F,酶切测序鉴定;转包装细胞,经抗性筛选检测病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞克隆进行逆转录PCR(RT-PCR)鉴定。结果建立BMP9基因腺病毒表达载体Ad5.BMP9.F经酶切及测序证实目的基因插入位点及读码框架正确;建立稳定产毒细胞克隆最高病毒滴度达7.4×105 CFU/mL,RT-PCR证实BMP9基因整合其中并稳定表达。结论成功构建含BMP9基因的腺病毒表达载体及其稳定产毒细胞系。

骨形成蛋白7重组腺病毒的构建及对TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞α-SMA表达的影响

目的构建骨形成蛋白7重组腺病毒（adenovirus bone morphogenetic protein7，Adeno-BMP-7）及观察其对转化因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠肾系膜细胞（MC）a—SMA表达的影响。方法构建Adeno—BMP7并转染（M．O．I=100）大鼠肾系膜细胞，48h后用Western印迹法检测BMP-7蛋白的表达；分空白组，TGF-β1处理组（TGF-β1刺激24h，5ng／m1），Adeno-BMP7转染组（TGF-β1刺激24h，5ng/ml；Adeno—BMP7转染M．O．I=100），48h后用RT—PCR方法分别检测各组α-SMA的表达。结果Western-blot检测示转染骨形成蛋白7重组腺病毒后的大鼠肾系膜细胞可表达BMP-7蛋白；RT-PCR示Adeno-BMP7转染组α-SMA表达较TGF-β1处理组明显降低（Adeno—BMP7转染组α-SMA／GAPDH值0．108，TGF-β1处理组α-SMA／GAPDH值0．112，P〈0．05）。结论成功构建Adeno—BMP7，其转染能降低由TGF-β1诱导的大鼠肾系膜细胞α-SMA的表达。

DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达

目的检测DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达,为大鼠牙髓干细胞的生物学功能研究提供基础。方法采用免疫组织化学染色的方法,对DSP、DMP1、CBFA1、BMP2在大鼠牙髓干细胞中的表达进行检测,然后采用矿化液对大鼠牙髓干细胞进行诱导,并对诱导后细胞进行DSP、DMP1表达的检测。结果大鼠牙髓干细胞DMP1仅个别细胞阳性表达,DSP少量细胞阳性表达,CBFA1、BMP2为阳性染色。经矿化液诱导后,大鼠牙髓干细胞DSP染色出现部分细胞强阳性,DMP1出现阳性结果。结论CBFA1、BMP2阳性表达表明大鼠牙髓干细胞具有一定的未成熟性,而经过诱导后出现牙本质特异性DSP的表达,表明大鼠牙髓干细胞可以被诱导向成牙本质细胞方向分化。

BMP-7在糖尿病肾病发生发展中表达的变化

目的:探讨BMP-7在糖尿病(DM)肾病发病机制中的作用。方法:以免疫组织化学、Westernblot及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病肾病发生过程中大鼠肾脏BMP-7蛋白及mRNA表达。结果:在正常大鼠及DM大鼠肾小管均有BMP-7蛋白表达,以胞浆表达为主,DM大鼠肾小管和集合管BMP-7蛋白表达较正常对照组明显增多(P<0·05),BMP-7mRNA的表达呈现先增加后降低的趋势。结论:作为TGF-β超家族的一员,BMP-7信号通路在糖尿病肾病发生早期可能起到重要的反馈性抑制作用。