α_(1A)-肾上腺素受体与骨形成蛋白-1片段在人胚肾293细胞中的结合

用酵母双杂交方法发现骨形成蛋白-1(bone morphogenetic protein-1,BMP-1)的片段可以与α1A-肾上腺素受体(adrenergic receptor,AR)的细胞内游离C末端结合。进一步探讨了二者在哺乳动物表达系统人胚肾293细胞(human embryonic cell 293,HEK293)中的相互作用。采用PCR方法构建含BMP-1片段eDNA的真核表达质粒PCP3HA,将其与含全长人α1A-AR eDNA的质粒PDT-α1A分别或共同转染HEK293细胞,用免疫印迹法检测到α1A-AR和BMP-1在HEK293细胞有相应的蛋白表达。用酶联免疫吸附实验对免疫印迹鉴定过的细胞裂解液进行检测,观察到空白对照组,单独转染PDTα1A-和单独转染PCP3HA的细胞,OD490值分别为0.034±0.027、0.042±0.019、0.030±0.0096,三者之间无显著性差异。共转染PDT-α1A和PCP3HA的细胞,OD490值为0.57±0.12,较其它三组具有显著性差异(均P<0.001)。免疫共沉淀结果显示,单独转染PDT-α1A或PCP3HA的细胞,免疫沉淀产物中均不能检测到BMP-1片段,只有共转染PDT-α1A和PCP3HA的细胞,在其免疫沉淀产物中能检测到BMP-1片段。ELISA和免疫沉淀结果均表明α1A-AR与BMP-1的片段在HEK293细胞中存在蛋白水平的相互作用。

骨形成蛋白7及骨形成蛋白受体IA在脑胶质瘤中的表达

目的探讨骨形成蛋白7(BMP-7)及骨形成蛋白受体IA(BMPR-IA)在胶质瘤中的表达及其与预后的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测60例脑胶质瘤标本(Ⅰ型8例、Ⅱ型24例、Ⅲ型16例、Ⅳ型12例)和5例正常脑组织标本BMP-7和BMPR-IA表达情况,对表达丰度进行半定量差异分析。结果BMP-7和BMPR-IA在脑胶质瘤中表达丰度均随肿瘤恶性程度增加而增加。肿瘤1年生存率与BMP-7和BMPR-IA表达呈负相关。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型组的1年生存率分别为100.0%、66.6%、43.7%和25.0%。结论BMP-7和BMPR-IA在脑胶质瘤中表达丰度随着恶性程度增加而增加,且与预后呈负相关,提示BMP-7和BMPR-IA与脑胶质瘤的形成、生物学行为相关。

EXPRESSION OF BONE MORPHOGENETIC PROTEIN-1 IN FETAL HUMAN CARTILAGE AND BONE DURING ENDOCHONDRAL OSSIFICATION

The expression of mRNA for bone morphogenetic protein-1 (BMP-1) was investigated in fetal human cartilage and bone during the developing endochondral ossification by using in situ hybridization. BMP-1 mRNA was localized in the hypertrophic chondrocytes, the cells of perichondrium, osteoblasts and marrow cells. The results suggest that BMP-1 may involve in cartilage and bone formation, and in regulation of calcification of growth plate.As a comparative study, the expression of TGF-β1 protein was investigated in cartilage and bone using immunohistochemical staining, correlated expression of TGF-β1 and BMP-1 was found. The results suggest that BMP-1 and TGF-β1 act synergistically to influence endochrondral ossification.

BMP-7、BMPR-Ι在大鼠面神经再生中面神经核内的分布及表达分析

目的 :通过检测面神经损伤后BMP - 7、BMPR -Ι在面神经核团内的定位及表达变化规律 ,探讨面神经损伤后再生过程中它们可能的作用机制。方法 :采用免疫组化ABC检测方法及计算机图像分析系统 ,观察大鼠面神经切断再吻合后 ,不同时间点面神经核内BMP - 7、BMPR -Ι的表达变化。结果 :①术后BMP- 7阳性表达出现下降 ,12h后降至最低值 ;随后上升 ,于 48h、2周分别出现两个高于正常对照组的峰值表达 ;以上三个时间点的表达水平同正常对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。②BMPR -Ι表达术后即上升 ,于 2周时出现峰值 ,并维持至术后 4周 ,与正常对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :本实验首次确证BMP -7、BMPR -Ι在面神经核神经元胞体内的表达 ,BMP - 7可能参与面神经损伤后的早期应激活动 ,而BMPR -Ι可能参与面神经再生过程的早期阶段。

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的：探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1（TGF-β1）/骨形成蛋白-4（BMP-4）诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法：应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组（10%正常大鼠血清）,诱导增殖组（含7.5μg·L^-1TGF-β1与5.0μg·L^-1BMP-4的10%正常大鼠血清）,4%补肺益肾方含药血清（含7.5μg·L^-1TGF-β1与5.0μg·L^-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清）,6%补肺益肾方含药血清（含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L^-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清）及8%补肺益肾方含药血清组（含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L^-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清）。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U）法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）,结缔组织生长因子（CTGF）,分化抑制因子-1（ID-1）和ID-2 mRNA的表达。结果：TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加（P〈0.05）,补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖（P〈0.01）。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达（P〈0.05）,8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达（P〈0.05）。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加（P〈0.01）,8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达（P〈0.05）。结论：补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。