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骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析
被引量:
2
1
作者
李文军
郑雄飞
+1 位作者
龚笑海
金坚
《生物技术通讯》
CAS
2016年第4期488-491,共4页
目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性。方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-m BMP10,构建p ET28a/m BMP10表达载体;热击转染...
目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性。方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-m BMP10,构建p ET28a/m BMP10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/p ET28a-6×His-m BMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性。结果:纯化得到纯度90%以上的m BMP10,复性后二聚体得率约为40%;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右。结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础。
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关键词
骨形成蛋白10
包涵体
亲和层析
透析复性
活性检测
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职称材料
题名
骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析
被引量:
2
1
作者
李文军
郑雄飞
龚笑海
金坚
机构
江南大学药学院
出处
《生物技术通讯》
CAS
2016年第4期488-491,共4页
文摘
目的:以生物制备骨形成蛋白10(BMP10)为目标,研究BMP10成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性。方法:以人源BMP10成熟肽基因为模板,PCR获得N端带有组氨酸标签(6×His)的融合基因6×His-m BMP10,构建p ET28a/m BMP10表达载体;热击转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,卡那霉素抗性筛选获得重组表达菌株BL21/p ET28a-6×His-m BMP10,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳、Western印迹对蛋白进行分析;超声波破碎菌体,收集包涵体,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯目的蛋白;透析复性后,非还原SDS-PAGE检验目标蛋白的二聚体形成;通过体外细胞实验检测蛋白活性。结果:纯化得到纯度90%以上的m BMP10,复性后二聚体得率约为40%;活性实验测得P19细胞的Smad6蛋白表达上调3倍左右。结论:通过大肠杆菌表达体系获得具有生物活性的BMP10,为后续作用机理研究奠定了实验基础。
关键词
骨形成蛋白10
包涵体
亲和层析
透析复性
活性检测
Keywords
bone morphogenetic protein
10
inclusion body
affinity chromatography
dialysis renaturation
activity detection
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
骨形成蛋白10成熟肽在大肠杆菌中的表达纯化及活性分析
李文军
郑雄飞
龚笑海
金坚
《生物技术通讯》
CAS
2016
2
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参考文献
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