非酒精性脂肪性肝病患者血清淀粉样蛋白A、血浆血红素氧合酶1和骨形成蛋白9水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清淀粉样蛋白A(SAA)、血浆血红素氧合酶1(HO-1)和骨形成蛋白9(BMP-9)水平变化及其意义。方法 2018年7月~2022年3月我院诊治的87例NAFLD患者,行肝活检,根据病理学表现的不同将NAFLD组分为单纯性脂肪肝(SFL)28例、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)48例和肝硬化11例,并根据病理学表现,将NASH分为早期10例和伴有肝纤维化的NASH 38例。另选择56例健康人作为对照。采用免疫比浊法检测血清SAA水平,采用双抗体夹心ELISA法检测血浆HO-1和BMP-9水平。结果 NAFLD组血清SAA和血浆HO-1水平分别为(8.2±1.5)mg/L和(14.9±2.3)ng/ml,显著高于健康人【分别为(3.3±0.6) mg/L和(10.1±2.1)ng/ml,P<0.05】,而血浆BMP-9水平为(95.1±6.1)pg/ml,显著低于健康人【(153.7±10.8)pg/ml,P<0.05】;肝硬化组血清SAA和血浆HO-1水平分别为(9.9±1.5)mg/L和(17.2±2.6)ng/ml,显著高于NASH组【分别为(8.3±1.1)mg/L和(15.2±2.4)ng/ml,P<0.05】或SFL组【分别为(7.5±0.9)mg/L和(13.7±2.1)ng/ml,P<0.05】,而血浆BMP-9水平为(81.8±6.9)pg/ml,显著低于NASH组【(93.6±7.3)pg/ml,P<0.05】或SFL组【(101.7±5.1)pg/ml,P<0.05】;伴有肝纤维化的NASH组血清SAA和血浆HO-1水平分别为(9.0±1.8)mg/L和(16.4±2.5)ng/ml,显著高于早期NASH组【分别为(6.6±1.9)mg/L和(12.0±2.8)ng/ml,P<0.05】,而血浆BMP-9水平为(87.5±4.7)pg/ml,显著低于早期NASH组【(98.8±5.1)pg/ml,P<0.05】。结论 NAFLD患者血清SAA、血浆HO-1和BMP-9水平变化可能与肝组织脂肪变和纤维化程度有关,值得进一步研究。

Smad信号通路在骨形成蛋白9促进牙囊干细胞成骨向分化中的研究

目的探索骨形成蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)在诱导大鼠牙囊干细胞(rat dental follicle stem cells,r DFCs)成骨向分化过程中的Smad信号通路调控机制。方法重组腺病毒骨形成蛋白9(recombinant adenoviruses expressing BMP9,Ad-BMP9)转染纯化的第3代r DFCs后,Realtime q PCR、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性检测观察BMP9调节r DFCs早期及中晚期成骨能力,茜素红S染色检测钙盐沉积,Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平。结果 BMP9促进r DFCs成骨因子表达:成骨转录因子Runx2、成骨细胞特异性转录因子Osterix、ALP及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在BMP9刺激组较空白组均明显升高(P<0.05),钙盐沉积及钙结节形成也明显多于空白组,且BMP9促进了Smad1/5/8蛋白磷酸化水平升高。结论 BMP9通过激活Smad信号通路,提高Smad1/5/8蛋白磷酸化水平从而促进早中晚期成骨因子及碱性磷酸酶表达,促进了r DFCs成骨向分化。

β联蛋白参与骨形成蛋白9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化

目的探讨骨形成蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化过程β联蛋白(β-catenin)的作用。方法利用重组腺病毒BMP9(Ad-BMP9)诱导C3H10T1/2细胞分化,通过Western blot法检测Ad-BMP9及不同剂量XAV-939处理后β-catenin的激活情况;在完全抑制β-catenin的情况下,Ad-BMP9诱导1周,通过实时定量PCR法检测心肌细胞增强因子2C(MEF2C)、心肌组织特异性转录因子GATA结合蛋白4(GATA4);Ad-BMP9处理3周后,通过Western blot法及免疫荧光技术检测心肌连接子蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)的表达。结果在感染效率约50%的情况下,BMP9可过度激活β-catenin,使其磷酸化水平增高;在XAV-939抑制β-catenin后,Ad-BMP9诱导的C3H10T1/2细胞表达的c Tn T、GATA4、Cx43和MEF2C均受到抑制。结论β-catenin能被BMP9激活并参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。

骨形成蛋白-9于2型糖尿病时在肝组织中的表达

目的研究2型糖尿病鼠肝组织骨形成蛋白-9(bone morphogenetic proteins-9,BMP-9)基因转录及蛋白表达的变化。方法将大鼠随机分为2型糖尿病模型组与正常对照组,分别于造模后5、10、20 d处死,以RT-PCR及Western-blot对肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平进行检测与分析。结果2型糖尿病模型组BMP-9基因转录及蛋白表达水平与正常组相比均显著性降低(P<0.05);并且2型糖尿病大鼠5、10、20 d处死组BMP-9基因转录及蛋白表达水平呈逐步下降趋势。结论2型糖尿病大鼠肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平较正常显著降低,这一变化可能与2型糖尿病的发生发展相关。

血清CYR61、BMP-9、PINP在胫腓骨骨折术后延迟愈合预测中的作用

目的 研究血清富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)、骨形成蛋白-9(BMP-9)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)在胫腓骨骨折术后延迟愈合预测中的作用。方法 回顾性分析2022年1月至2023年10月于本院接受胫腓骨骨折术治疗的82例患者临床资料。将其按照术后是否发生延迟愈合分作延迟愈合组(n=25)与正常愈合组(n=57)。对比两组临床资料,血清CYR61、BMP-9、PINP水平。以多因素Logistic回归分析明确胫腓骨骨折术后延迟愈合的影响因素。借助受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、BMP-9、PINP预测胫腓骨骨折术后延迟愈合的效能。结果 延迟愈合组年龄≥60岁及骨质疏松人数占比均高于正常愈合组(均P<0.05)。延迟愈合组血清CYR61、BMP-9、PINP水平均低于正常愈合组(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现,骨质疏松与血清CYR61、BMP-9、PINP水平降低均是胫腓骨骨折术后延迟愈合的危险因素(均P<0.05)。血清CYR61、BMP-9、PINP水平联合检测预测胫腓骨骨折术后延迟愈合的效果优于上述三项指标单独预测。结论 血清CYR61、BMP-9、PINP联合检测可为胫腓骨骨折术后延迟愈合预测提供可靠依据。

骨形成蛋白9对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响

目的：人骨形成蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响。方法：使用过表达BMP9基因的腺病毒（Ad BMP9）感染BIU-87细胞,采用定量PCR检测BMP9 mRNA的表达,Western blot检测BMP9蛋白及BMP9下游相关信号通路蛋白的表达;MTT及集落形成实验检测BIU-87细胞增殖能力;划痕愈合实验及TranswellTM小室迁移实验检测BIU-87细胞迁移能力。结果：感染Ad BMP9后,BIU-87细胞中BMP9的mRNA水平和蛋白质水平均显著增加;过表达BMP9后,BIU-87细胞的体外增殖和迁移能力明显增加;Western blot结果显示BMP9可明显激活AKT信号通路。结论：高表达BMP9可能通过激活AKT信号通路促进人膀胱癌BIU-87细胞的增殖和迁移。

结缔组织生长因子与骨形成蛋白-9在骨代谢中的研究进展

结缔组织生长因子(CTGF)是一种细胞外基质分泌蛋白,生理状态下,在心、脑、肝、肾等组织器官中呈基础量表达,病理状态下,如在某些增生性或纤维性疾病中,CTGF过度表达与疾病的发生发展紧密相关。CTGF调节细胞功能多样化,参与体内多种病理生理过程,如胚胎发育、雌性生殖系统、恶性肿瘤、纤维化疾病等。CTGF是骨形态发生蛋白(BMPs)信号通路的靶基因,可作用于BMPs信号通路〔1〕,

转化生长因子-β1促进骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化

目的:探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)成骨分化过程中的作用。方法:应用鼠MSC C3H10T1/2,以重组腺病毒法将BMP9导入,施加TGF-β1处理,建立BMP9联合TGF-β1诱导MSC成骨分化模型。改良SEAP化学发光法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;茜素红S染色进行钙盐沉积检测;实时荧光定量PCR检测成骨相关基因Ⅰa2型胶原(collagenⅠa2,COLⅠa2)、骨桥素(osteopotin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA转录表达水平,免疫细胞化学法检测细胞内OPN、OCN表达变化。荧光素酶报告基因法检测信号通路的Smad水平。结果:TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理能更早更多地提高ALP活性和引起钙盐沉积(F处理=18 782.10,P=0.000),持续处理达17 d后不再显示明显差异,TGF-β1单独处理与对照组间无明显差异(F=1.03,P=0.318)。TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理可使COLⅠa2、OPN、OCN mRNA转录水平明显增高(COLⅠa2的F处理=250.30,P=0.000;OPN的F处理=795.64,P=0.000;OCN的F处理=206.55,P=0.000),COLⅠa2增高发生较早和显著(F=250.30,P=0.000);细胞内OPN、OCN蛋白阳性表达显著增强。TGF-β1联合BMP9处理能刺激信号通路相应的Smad荧光素报告活性(χ2=32.84,P=0.000)。结论:在BMP9诱导MSC成骨分化中,联合应用TGF-β1具有促进成骨作用,BMP9与TGF-β1在成骨分化中可能存在互补效应。

不同剂量TGF-β1在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用

目的分析联合应用不同剂量TGF-β1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化过程的影响,寻找最佳的促进BMP9成骨的TGF-β1剂量,为联合不同细胞因子促进组织工程骨再生寻找有效途径。方法应用鼠间充质干细胞株C3H10T1/2,以重组腺病毒法将其导入BMP9,再分别施加0、5、10、20 ng/mL TGF-β1蛋白处理,建立BMP9联合TGF-β1诱导间充质干细胞成骨分化模型。条件培养基法获取含活性良好的TGF-β1蛋白上清液;改良SEAP化学发光法和组织化学染色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达及活性;茜素红S染色检测钙盐沉积;实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)、骨桥素(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA转录表达水平和蛋白表达水平改变;流式细胞仪检测细胞周期;台盼蓝拒染法计数活细胞监测细胞增殖。结果 5 ng/mL TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理能更早、更多地提高ALP活性和引起钙盐沉积,持续处理17 d后钙盐沉积结果不再显示明显差异,TGF-β1单独处理与对照组间无明显差异。随TGF-β1剂量增加,ALP活性和钙盐沉积效应受到抑制。5 ng/mL TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理使COLⅠ、OPN、OCN的mRNA转录水平和蛋白表达水平明显增高,COLⅠ增高变化发生较早和显著;TGF-β1应用剂量达到20 ng/mL出现基因转录和蛋白表达受到抑制,但COLⅠ升高趋势仍能维持。BMP9促进细胞增殖,TGF-β1对该效应起抑制作用,细胞周期转化表现G0/G1期阻滞。结论在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中,适量的TGF-β1联合应用具有促进作用;BMP9与TGF-β1在诱导成骨分化中可能存在协同作用关系。

过表达miR-30a抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化

目的探讨miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C2C12成骨分化中的作用。方法 BMP9条件培养基处理间充质干细胞C2C12诱导成骨分化,用real-time PCR连续检测miR-30家族成员的mRNA。用BMP9条件培养基作用Ad-mmu-miR-30a预处理的C2C12细胞,通过ALP染色和活性检测来反映早期成骨指标ALP的表达、分别在mRNA水平和蛋白水平检测中期成骨指标(OCN)的表达、用钙盐沉积来检测晚期成骨分化,用流式细胞术和MTT检测C2C12细胞的周期与增殖。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中的作用机制。结果 miR-30家族中,只有miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中表达下调,miR-30a过表达后,通过靶基因Runx2使BMP9诱导成骨分化能力减弱,ALP的表达下降(P<0.05),OCN蛋白水平和mRNA水平也都表达下调(P<0.05),钙盐沉积受到抑制。结论 miR-30a可以抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化。

基于JNK通路研究改良型富血小板纤维蛋白与β-三磷酸钙复合物诱导成骨的机制

目的:基于c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)通路研究改良型富血小板纤维蛋白(A-PRF)与β-三磷酸钙(β-TCP)复合物对兔股骨缺损区域的诱导成骨效果,为临床治疗骨缺损提供实验基础。方法:选取24只雄性新西兰大白兔构建股骨缺损模型,动物分为模型组、1:1复合物组(A-PRF:β-TCP=1:1)、2:1复合物组(A-PRF:β-TCP=2:1)与4:1复合物组(A-PRF:β-TCP=4:1),每组各6只。模型组对骨缺损区域不作填充处理,复合物组填充对应的材料,8周后处死动物收集指标。肉眼观察骨缺损区域的修复情况,经苏木精-伊红(HE)染色观察新生骨组织修复情况,以酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的含量,以蛋白质免疫印迹法(WesternBlot)检测骨组织中骨形成蛋白9(BMP-9)、JNK与p-JNK蛋白的表达情况。结果:与模型组相比,复合物组填充后骨缺损区域新生血管增多,成骨效果明显,炎症反应少,血清中ALP与OCN含量显著升高,骨组织中BMP-9与p-JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:A-PRF与β-TCP复合物能通过激活JNK通路、诱导BNP-9蛋白表达,促进骨缺损后诱导成骨,当复合物比例为2:1时效果最佳。

Wnt/β-catenin通路在FSHβ增强BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的作用研究

目的探讨Wnt/β-catenin通路在促卵泡激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)增强骨形成蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的作用。方法C3H10T1/2细胞为研究对象,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色方法检测Ad-GFP对照组、Ad-FSHβ实验组、Ad-BMP9实验组、Ad-BMP9+Ad-FSHβ实验组或Ad-BMP9+Ad-FSHβ+XAV-939实验组等各研究组ALP表达;茜素红S染色(alizarin red s,ARS)方法检测各研究组钙盐小节沉积;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测各研究组cyclin D1转录。结果单独的Ad-FSHβ实验组骨形成早、晚期标志物(ALP和钙盐小结)与Ad-GFP对照组相比无显著差异;单独的Ad-BMP9实验组中,两者的表达均高于Ad-GFP对照组;Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组的表达量较Ad-BMP9实验组显著增加。检测各研究组Wnt/β-catenin通路的靶基因cyclin D1的转录,与Ad-GFP对照组相比,Ad-FSHβ实验组的表达无显著变化,Ad-BMP9实验组的表达水平显著升高(P<0.01),Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组cyclin D1 mRNA表达量显著高于Ad-BMP9实验组(P<0.01)。Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939处理后,Ad-BMP9与XAV-939联合实验组cyclin D1 mRNA的水平较Ad-BMP9实验组下降(P<0.01),Ad-FSHβ、Ad-BMP9与XAV-939三者联合实验组水平也较Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组下降(P<0.05)。ALP的表达呈现出与cyclin D1转录相似的变化趋势。结论Wnt/β-catenin通路可能在促卵泡激素β亚基增强骨形成蛋白9诱导MSCs成骨分化中起重要作用。

BMP9通过ERK5信号通路调控根尖牙乳头干细胞成骨／成牙本质分化

目的研究骨形成蛋白9(BMP9)是否通过激活ERK5信号通路调控永生化根尖牙乳头干细胞(i SCAP)成骨/成牙本质向分化。方法首先使用ERK5抑制剂BIX02189作用于BMP9的腺病毒转染i SCAP,采用Western blotting检测ERK5蛋白的磷酸化水平变化;然后通过碱性磷酸酶(ALP)染色、RT-PCR及茜素红染色检测成骨/成牙本质相关基因Runx2、OCN、OPN和DMP1的表达,研究BMP9对i SCAP成骨/成牙本质分化的影响。结果 BMP9可以上调ERK5磷酸化水平,BIX02189干预后ERK5磷酸化下降;ALP染色,RT-PCR检测表达及茜素红染色均发现BMP9可以促进Runx2、OCN、OPN、DMP1阳性表达,而BIX02189则抑制成骨/成牙本质分化。结论 BMP9可以通过激活ERK5信号通路促进根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化。

血清PTEN、BMP-9水平与胫骨平台骨折术后愈合延迟的关系

目的探讨血清第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)、骨形成蛋白-9(BMP-9)水平与胫骨平台骨折术后愈合延迟的关系。方法选择129例行内固定手术治疗的胫骨平台骨折患者,根据术后是否发生愈合延迟分为延迟愈合组(19例)和正常愈合组(110例)。分别于术前、术后1、2、4周采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清PTENmRNA表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清BMP-9水平。收集临床资料,多因素Logistic回归分析影响胫骨平台骨折术后愈合延迟的因素,绘制受试者工作特征曲线,分析PTENmRNA、BMP-9预测胫骨平台骨折术后愈合延迟的价值。结果两组手术前后血清PTENmRNA、BMP-9水平呈逐渐增高趋势(P均<0.05),延迟愈合组术后1、2、4周血清PTENmRNA、BMP-9均低于正常愈合组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,骨质疏松、术后4周PTENmRNA、术后4周BMP-9与胫骨平台骨折患者术后延迟愈合有关(P均<0.05)。术后4周PTENmRNA、BMP-9预测胫骨平台骨折术后愈合延迟的曲线下面积为0.752、0.726,联合预测的曲线下面积为0.923,高于单独指标预测(Z分别为3.105、3.273,P均<0.05)。结论胫骨平台骨折术后延迟愈合患者血清PTEN mRNA、BMP-9水平均降低,术后4周PTENmRNA、BMP-9可作为预测骨折延迟愈合的指标。

骨形成蛋白-6和骨形成蛋白-9在糖尿病合并骨折大鼠中的表达

目的探讨骨形成蛋白(BMP)-6和BMP-9在糖尿病合并骨折时的表达改变及其与骨折愈合的关系。方法将44只6周龄雄性SD大鼠采用Excel简单随机化分法分为糖尿病组(DM,n=22)和非糖尿病组(ND,n=22)。DM组腹腔注射链脲佐菌素枸橼酸溶液(STZ)50 mg/kg,ND组注射等体重比枸橼酸溶液。2周后于两组动物左股骨制造横断骨折。骨折后的第2、4、8周行影像学和组织形态学骨折愈合评估。通过机械负荷评估骨痂的强度。采用免疫印迹法(Western blot)定量分析骨组织中BMP-6和BMP-9的表达变化。影像学结果以Image J软件进行图像分析。实验数据以SPSS 13软件进行t检验分析。结果骨折后4周糖尿病组骨痂显著小于非糖尿病组(DM组1.64±0.14,ND组2.14±0.18,t=5.499,P<0.05,n=8);骨痂内钙化比例显著低于非糖尿病组[DM组(53.40±6.49)%,ND组(60.61±2.13)%,t=1.976,P<0.05,n=8];骨痂机械强度显著低于非糖尿病组[DM组(161.85±38.33) kPa,ND组(217.49±39.63) kPa,t=2.135,P<0.05,n=6]。相对分子质量为35×10^(3)的BMP-6表达在DM组骨折股骨中表达显著低于ND组骨折股骨。分析较大相对分子质量BMP-6条带与35×10^(3) BMP-6的变化关系,结果提示,35×10^(3) BMP-6的显著下调可能与BMP-6的成熟过程受到糖尿病病理因素抑制有关。BMP-9的表达与糖尿病和骨折无关。结论糖尿病骨折愈合过程受损与BMP-6 35×10^(3)片段表达下调相关。而BMP-6的成熟过程障碍可能是导致上述差异的重要原因。

miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。

MiR-21协同BMP9促进间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

目的:探讨miR-21与BMP9之间的关系,明确miR-21在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用。方法:(1)Ad-BMP9感染C3H10T1/2细胞,Real-time-PCR检测miR-21表达。RTPCR检测ALP的表达。(2)MiR-21转染C3H10T1/2细胞,Real-time-PCR检测miR-21和BMP9表达。(3)MiR-21和BMP9-CM处理C3H10 T1/2细胞,ALP活性和染色实验检测C3H10 T1/2细胞早期成骨能力。茜素红S染色实验检测钙盐沉积情况。(4)MiR-21和BMP9-CM处理C3H10T1/2细胞,Real-time-PCR检测成骨分化相关因子ALP,OCN的表达。(5)MiR-21和BMP9-CM处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5蛋白水平的表达。结果:(1)BMP9暂时降低miR-21的表达。MiR-21也可以暂时降低BMP9的表达。(2)MiR-21可以协同BMP9增强ALP和钙盐沉积。(3)MiR-21协同BMP9增加了p-Smad1/5蛋白水平的表达。结论:MiR-21与BMP9存在相互关系,两者可以互相调节表达。MiR-21可以协同BMP9促进间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化,这一过程与增强BMP9/Smad信号的激活程度有关。

左归丸对去卵巢致绝经后骨质疏松症大鼠骨组织中Notch1、BMP9表达的影响

目的:通过研究去卵巢骨质疏松症(OP)大鼠股骨中Notch1和骨形态发生蛋白9(BMP9)的蛋白表达,探讨摘除卵巢致肾虚OP的病理机制,并研究左归丸的作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制OP模型,采用左归丸对实验大鼠治疗12周,以福善美片作为阳性对照组,正常组、假手术组作为标准对照组,模型组作为空白对照,用ELISA法检测OP大鼠股骨Notch1和BMP9的蛋白表达。结果:正常大鼠股骨中存在Notch1和BMP9的蛋白表达。与正常组比较,模型组大鼠股骨中Notch1和BMP9的蛋白表达水平有明显的下降。左归丸组、福善美组用药12周后,与模型组相比较,左归丸组可显著上调股骨中Notch1和BMP9的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:股骨中Notch1和BMP9的蛋白表达下降可能是导致OP发生的机制之一;左归丸能够上调Notch1和BMP9的蛋白表达,表明左归丸对OP有一定的防治作用。

BMP9转染的hPDLSCs与HA-TCP支架复合体促进牙槽骨再生的实验研究

目的探索骨形成蛋白9(BMP9)重组腺病毒(Ad-BMP9)转染的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)与羟基磷灰石磷酸三钙(HA-TCP)支架材料复合体在牙周组织再生中的研究。方法实验分3组,Ad-BMP9组(转染Ad-BMP9载体)、对照组(转染携带GFP荧光蛋白的空载体腺病毒Ad-GFP)和空白对照组(加入PBS),实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot检测BMP9 mRNA及蛋白水平;碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性分析、茜素红染色、茜素红半定量分析检测BMP9调节hPDLSCs的早、晚期成骨分化能力。扫描电镜(SEM)观察Ad-BMP9组hPDLSCs在HA-TCP上的黏附增殖情况。Ad-BMP9/hPDLSCs复合HA-TCP支架材料后,检测ALP活性,RT-PCR检测复合体早、晚期成骨能力。将Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体植入裸鼠皮下及大鼠牙周缺损区,组织学分析新骨形成水平。结果Ad-BMP9转染hPDLSCs后,BMP9表达较其他两组明显升高。ALP染色、ALP活性分析、茜素红染色、茜素红半定量分析发现Ad-BMP9组的早期和晚期成骨分化能力均明显高于其他两组(P<0.05)。SEM观察结果显示Ad-BMP9组hPDLSCs能在HA-TCP上正常黏附、生长、增殖。与Ad-GFP/hPDLSCs/HA-TCP组及hPDLSCs/HA-TCP组比较,Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP组的ALP活性明显增高(P<0.05);早期成骨标志物ALP中、中晚期成骨标志物骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)表达均明显提高(P<0.05)。Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体应用于体内实验,组织学分析证明有更多新骨形成。结论Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体能促进新骨形成,修复牙槽骨缺损。

BMP9诱导人脐带间充质干细胞体内外成骨分化的作用研究

目的:探讨人骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)在体内外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)成骨分化的作用研究。方法:设立Ad-BMP9处理组和Ad-GFP对照组感染h UC-MSCs,两组细胞分别于3天、5天、7天进行ALP活性检测,14天后采用免疫组织化学染色检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(Osteopotin,OPN)的表达情况,21天后茜素红染色检测矿化结节的形成;然后收集不同分组h UCMSC用于裸鼠皮下注射成骨模型的建立,4周后取出离体骨进行Micro-CT扫描和分析,并进行H&E、Masson Trichrome、Alcain Blue染色。结果:BMP9处理组的ALP活性和矿化结节形成明显高于对照组,免疫组化染色结果显示BMP9诱导组的OCN、OPG的阳性表达明显高于对照组;裸鼠皮下注射成骨模型的观察结果显示,空白对照组没有形成肉眼可见的皮下包块,仅感染AdBMP9的h UC-MSCs能生成异位骨,且形成的异位骨骨量明显,骨密度平均值为396.05±0.60;H&E染色结果显示BMP9诱导生成的异位骨中形成部分成熟的骨基质和骨小梁,Masson Trichrome染色结果显示BMP9明显诱导h UC-MSCs的基质矿化作用,Alcain Blue染色结果显示BMP9明显诱导h UC-MSCs的软骨内成骨作用。结论:BMP9成功诱导人脐带间充质干细胞的体内外成骨作用,为临床骨组织工程的细胞疗法提供了明确的可行性。