续断壮骨方对胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路的影响

目的旨在探讨续断壮骨方对胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路的影响。方法将60只健康雄性3月龄无特定病原(Sprague dawley,SD)大鼠采用随机数字表法将其分为空白组、模型组、低剂量续断壮骨方组、高剂量续断壮骨方组,每组各15只,除空白组外其余各组均制备成胫骨干骨折模型,术后24 h,对照组及模型组灌服3 ml/d生理盐水;低剂量续断壮骨方组灌服40 mg/(kg·d),高剂量续断壮骨方组灌服80 mg/(kg·d),观察比较骨折术后各组第14、28、42天骨矿物质密度值(Bone mineral density,BMD)及骨痂体积,各组末次给药后观察各组大鼠生物力学性能、血管新生情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组大鼠胫骨切片Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA表达及Westem blot法检测各组骨痂组织Ihh、Smo、Ptch、GliL蛋白相对表达量。结果与空白组比较,模型组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量续断壮骨方组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量续断壮骨方组比较,高剂量续断壮骨方组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论续断壮骨方能够通过上调胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路发挥促进骨折愈合的作用。

芹菜素调节OPG/RANKL/RANK信号通路对创伤性骨折大鼠骨折愈合的影响

目的 探讨芹菜素对骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)信号通路的调控作用及对创伤性骨折大鼠骨折愈合的影响。方法 采用闭合式股骨干骨折术构建创伤性骨折大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,芹菜素低、中、高剂量组和阳性对照组,每组10只,另取10只健康大鼠作为对照组。各组给予相应干预30 d。采用计算机断层扫描测定大鼠骨小梁密度和厚度,番红O-固绿染色观察大鼠软骨组织病理学变化,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测大鼠股骨组织OPG、RANKL、RANK mRNA和蛋白水平。结果 对照组大鼠软骨组织正常,结构完整;与对照组比较,模型组大鼠软骨组织出现严重损伤,骨小梁密度和厚度、血清BGP、ALP及股骨组织OPG mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),血清iNOS、TNF-α、IL-6及股骨组织RANKL、RANK mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组大鼠软骨组织病理损伤改善,骨小梁密度和厚度、血清BGP、ALP及股骨组织OPG mRNA和蛋白水平依次升高(P<0.05),血清iNOS、TNF-α、IL-6及股骨组织RANKL、RANK mRNA和蛋白水平依次降低(P<0.05);芹菜素高剂量组与阳性对照组各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 芹菜素可以减轻创伤性骨折大鼠炎症反应,促进骨折愈合,其机制可能与上调OPG表达,抑制RANKL/RANK信号通路有关。

接骨丸对SD骨折大鼠血清钙、ALP、CD3、CD44表达的影响

目的:探讨接骨丸对SD骨折大鼠血清钙、ALP、CD3、CD44表达的影响。方法:SD大鼠40只按照数字随机表法将其分为4个组(对照组、模型组、低剂量组、高剂量组),每组10只。模型组、低剂量组和高剂量组给予造模。对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃;低剂量组灌胃浓度为0.4 g/kg浓度的接骨丸溶液、高剂量组灌胃浓度为1.6 g/kg的接骨丸溶液。结果:模型组、低剂量组、高剂量组治疗1周和2周血清钙、ALP、CD3、CD44水平低于对照组,模型组、低剂量组治疗3周血清钙、ALP、CD3、CD44水平低于对照组,而高剂量组治疗3周血清钙、ALP、CD3、CD44水平高于对照组(P<0.05);低剂量组和高剂量组治疗4周血清钙、ALP、CD3、CD44水平高于对照组和模型组,且高剂量组治疗4周血清钙、ALP、CD3、CD44水平高于低剂量组(P<0.05)。结论:接骨丸可能通过增加血清钙、ALP、CD3、CD44表达水平,促进骨折愈合。

活血散干预大鼠骨折模型早期骨愈合的实验研究

目的探讨活血散对大鼠骨折模型早期骨愈合的影响及其作用机制。方法选择36只SD大鼠,随机分为实验组与对照组,各18只。采用闭合骨折模型造模,自由落体钝器打击大鼠股骨中段,剔除粉碎性骨折和软组织破损。造模成功后,实验组骨折处外用活血散,分别在10、20、30d的时间窗,任取大鼠6只,麻醉后采集股动脉血,进行血液流变学、血浆黏度和血清碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)、磷(P)含量的检测。再将大鼠脱颈处死后,收集不同时间窗大鼠骨折段标本,做组织病理学检测和X线扫描成像。结果实验组在20、30d时,可显著降低骨折模型大鼠全血1s^(-1)、5s^(-1)、30s^(-1)的切变率和血浆黏度;血清ALP、Ca、P含量升高;软骨性骨痂、小梁状骨的产生增多,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论活血散局部外用对大鼠骨折模型早期骨愈合有明显促进作用,其作用机理可能与改善血循环和促进成骨代谢相关。

密骨方对去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨痂BMP-3mRNA表达的研究

目的应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测密骨方在去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨折愈合过程中的骨形态发生蛋白(BMP)-3mRNA水平。方法建立Wistar大鼠去势后骨质疏松性骨折的动物模型和BMP-3mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,分别于术后第2、4、6周取断端组织,通过荧光定量RT-PCR检测标本中BMP-3mRNA水平。结果大鼠骨组织BMP-3mRNA表达水平:在时间上的总体比较呈递减的趋势并有显著性差异(F=153.19,P<0.05);组别的总体比较是模型组<实验组<对照组,并有显著性差异(F=262.23,P<0.05);在时间与组别的交互比较也存在显著性差异(F=81.50,P<0.05);任两组间都有统计学差异(P<0.05)。结论中药密骨方对去势后骨质疏松性骨折大鼠模型的骨折愈合有促进作用。

补肾活血法对大鼠骨折愈合影响的X线影像学研究

目的:从X线影像学的改变来探讨补肾活血法对SD大鼠骨折模型愈合的影响及机制。方法:手术造成SD大鼠胫骨中下段骨缺损模型32只,随机分成治疗组(n=16)和对照组(n=16),治疗组以补肾活血法进行治疗,给予淫羊藿、当归中药煎液灌胃,对照组给予等量0.9%生理盐水灌胃。在造模的第7、15、21、30、42d分别取两组大鼠于骨折处行影响学观察并评分。结果:治疗组(n=16)与对照组(n=16)相比较,在造模第7天时X线影像学无明显差异(P>0.05),在造模第21天以后治疗组影像学改变和对照组差异明显,骨痂明显多于对照组(P<0.05)。结论:补肾活血法可促进骨痂生长,提高了骨的强度,对骨折愈合有修复作用。

雌激素对骨质疏松大鼠骨折愈合过程成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响分析

目的:探讨雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)的影响,就骨质疏松大鼠骨折愈合进行试验。方法:选择40只雌性Wistar大鼠,随机分为观察组和对照组,每组各20例,取左股骨骨折模型,观察组每隔1d注射雌激素,就各项指标进行分析。结果:观察组优于对照组骨痂密度(P<0.05)。结论:观察组优于对照组的成骨细胞血管生长因子的表达量,其成骨细胞数量优于对照组,故其可促进骨组织的钙化及骨细胞的增殖分化,使骨密度提高。

从X线影像学观测布依药鹿角壮骨煎液对大鼠骨折模型的作用

目的从X线影像学的改变来观察布依药"鹿角壮骨煎液"对大鼠骨折模型修复的作用。方法手术造成SD大鼠胫骨中下段骨折模型60只,随机分成治疗组30和对照组30,治疗组以布依药鹿角壮骨煎液灌胃,对照组给予等量0.9%生理盐水灌胃。在造模后的第15、21、30、42d分别取两组大鼠行骨折处X线摄片并评分。结果治疗组与对照组相比较,在造模第15天及以后治疗组X线影像学与对照组有明显差异(P<0.05)。结论布依药鹿角壮骨煎液可促进骨痂生长,提高影像学评分,对骨折愈合有修复作用。

补肾活血法对大鼠骨折愈合影响的病理学研究

目的:通过观察组织形态学的改变来探讨补肾活血法对SD大鼠骨折模型愈合的影响及机制。方法:手术造成SD大鼠胫骨中下段骨缺损模型32只,随机分成治疗组和对照组各16只,治疗组以补肾活血法进行治疗,给予淫羊藿、当归中药煎液灌胃,对照组给予等量0.9%生理盐水灌胃。在造模后的第21、42天分别选两组大鼠处死后在原骨折部位取材,制片,HE染色,进行病理学观察分析。结果:2组相比较,在造模后第21、42天治疗组和对照组在织形态学方面差异明显。结论:补肾活血法可改善骨折断端局部血运状态,有利于成骨细胞和骨痂的生成,对骨折愈合有促进作用。

复方伤痛胶囊对大鼠桡骨骨折愈合的作用

目的:研究复方伤痛胶囊对大鼠桡骨骨折愈合的影响。方法:SD大鼠40只,随机取8只作为空白组,剩余32只大鼠戊巴比妥钠腹腔麻醉,用骨剪剪断桡骨,造成双侧标准骨折动物模型。随机将骨折模型大鼠分为模型组、伤科接骨片组(阳性药组,0.45 g·kg^(-1))、复方伤痛胶囊低、高剂量组(0.25 g·kg^(-1),0.5 g·kg^(-1));连续给药30 d后腹主动脉取血,置于肝素钠抗凝的试管内,用以检测全血粘度、血浆粘度及红细胞聚集数;另留出血样,测定碱性磷酸酶(BALP)、血管内皮生长因子(VEGF)、D-二聚体含量;脱颈椎处死后取骨折处标本,一侧先取一半拍X片,其余用石蜡包埋,HE染色,另一侧用于骨矿含量和骨密度检测。结果:复方伤痛胶囊能有效的降低血液粘度和红细胞聚集数(P<0.01或P<0.05),可使BALP水平得到改善(P<0.05),能降低血液中VEGF及D-二聚体的含量(P<0.05),同时也能促进肉芽细胞、骨小梁、骨组织的增长,进而促进骨愈合。结论:复方伤痛胶囊具有调节骨组织修复及再生作用,能改善病变组织血液循环,促进肉芽细胞、骨小梁、骨组织的增长,加快骨折的愈合。

正骨制剂对大鼠骨痂生长指数及耳廓微循环影响的实验研究

目的观察正骨1号水剂、正骨2号散剂及正骨3号胶囊制剂治疗骨折的药效作用。方法采用SD大鼠,分别折断其右后胫骨造成闭合性骨折模型。取造模成功的骨折大鼠40只,随机分为模型组,正骨制剂高、低剂量组和阳性对照组,每组10只。在手术次日开始给药,连续30 d。正骨制剂高、低剂量组分别灌胃给予3.45 g/kg正骨3号胶囊水溶液、0.86 g/kg正骨3号胶囊水溶液,剂量0.1 ml/100 g,在大鼠右后肢骨折处涂抹正骨1号水剂和正骨2号散剂;阳性组灌胃给予0.37 g/kg云南白药水溶液,剂量0.1 ml/100 g,在大鼠右后肢骨折处涂抹伤科灵喷雾剂和云南白药;模型组灌胃给予蒸馏水,剂量0.1 ml/100 g。用骨折模型大鼠耳廓微循环检测评价药物的活血作用,用X线评价骨痂生长指数。结果正骨制剂系列药品能明显提高大鼠骨折动物模型的骨痂生长指数,促进骨折愈合;有增强骨折模型大鼠耳廓微动脉血流速度的趋势,可促进小鼠耳廓微循环。结论正骨系列制剂药品具有良好的治疗骨折的作用。

密骨方对去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨痂中OPGmRNA表达的影响

目的:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测密骨方在去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨折愈合的过程中骨保护素(OPG)mRNA水平。方法:建立Wistar大鼠去势后骨质疏松性骨折的动物模型,通过SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,分别于术后第2、4、6周取断端组织,检测标本中OPG mRNA水平。结果:大鼠骨组织OPG mRNA表达水平:在时间上的总体比较呈递减的趋势,并有显著性差异(F=124.51、P<0.05);在组别的总体比较是模型组<实验组<正常组并有显著性差异(F=118.42、P<0.05);在时间与组别的相互比较也存在显著性差异(F=16.23、P<0.05);任两组间都有统计学差异(P<0.05)。结论:中药密骨方对去势后骨质疏松性骨折大鼠模型的骨折愈合有促进作用。

水飞蓟素对大鼠骨折愈合中FGF-2表达的影响

目的:探讨水飞蓟素在大鼠骨折早期愈合过程中对成纤维细胞生长因子2(FGF-2)表达的影响,为水飞蓟素促进骨折愈合提供实验参考。方法:选取雌性SD大鼠120只,随机分为正常对照组20只,骨折组100只。将骨折组100只大鼠用10%水合氯醛以3ml/kg腹腔麻醉,右侧胫骨常规备皮,络合碘消毒2次,自胫骨结节向下切开约1.5cm切口,向外分离胫前肌肉,切开骨膜自胫骨结节下0.5cm线锯截断胫骨,0.8mm克氏针髓内固定,逐层关闭切口。造模成功后将成模大鼠随机分5组:骨折模型组,金天格组(120mg/kg),以及水飞蓟素不同剂量组(40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg)灌胃,2、4、6周各组分别随机选取8只大鼠行尾静脉采血,用ELISA法检测血清FGF-2的表达,骨组织采用免疫组织化学染色检测软骨中FGF-2的表达水平,通过X线对骨折愈合情况进行评分。结果:(1)血清FGF-2结果:在第2、4、6周,各组间有显著性差异,但在第4、6周骨折模型组、空白对照组与水飞蓟素40mg/kg、水飞蓟素80mg/kg、水飞蓟素120mg/kg、金天格80mg/kg组间无统计学差异;(2)免疫组化结果:术后第2周、第4周,除金天格组与水飞蓟素120mg/kg外,其余各组间均有统计学差异。第6周时,除金天格组、水飞蓟素120mg/kg与水飞蓟素80mg/kg外,其余各组间均有统计学差异。(3)X线对骨折愈合情况评分结果:术后2周时,水飞蓟素3组给药组大鼠骨折处均可见明显骨痂生长;术后4周时,3组大鼠骨折线均开始模糊,骨痂体积明显减少;6周时,三组均有部分大鼠已达到骨性愈合,髓腔部分再通。骨折愈合评分术后2、4周可见水飞蓟素80mg/kg/d、水飞蓟素120mg/kg组骨痂生成量均比骨折模型组明显增多,但水飞蓟素各剂量组间无明显差异。术后6周,3组间均无统计学差异。结论:水飞蓟素对大鼠骨折早期愈合具有积极的促进作用。其促进大鼠胫骨骨折早期愈合作用可能与FGF-2的表达有关。

红景天苷对髋部骨折术后肺部感染大鼠的干预效果

目的分析红景天苷对髋部骨折术后肺部感染大鼠的干预效果。方法选取SD大鼠50只,10只为对照组(生理盐水灌胃),其余40只大鼠建立髋部骨折模型术后肺部感染模型,后将建模成功的30只大鼠随机分为感染组(0.9%氯化钠注射液灌胃)、感染+低剂量组(0.9%氯化钠注射液+0.1 g/kg红景天苷灌服)、感染+高剂量组(0.9%氯化钠注射液+0.3 g/kg红景天苷灌服)各10只。观察各组大鼠变化情况。结果与对照组相比,其他各组大鼠体、肺质量、静息通气量、气道阻力改变、肺容积变换降低,肺实质量指数、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、死亡关联蛋白激酶1(DAPK1)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)mRNA表达量、TLR4、NF-κB表达量升高(P<0.05);与感染组相比,感染+低、高剂量组体、肺质量、静息通气量、气道阻力改变、肺容积变换升高,肺实质量指数、IFN-γ、IL-6、DAPK1、TLR4、NF-κB mRNA表达量、TLR4、NF-κB表达量降低(P<0.05);与感染+低剂量组相比,感染+高剂量组体、肺质量、静息通气量、气道阻力改变、肺容积变换升高,肺实质量指数、IFN-γ、IL-6、DAPK1水平、TLR4、NF-κB mRNA表达量、TLR4、NF-κB表达量降低(P<0.05)。结论红景天苷可降低大鼠炎症因子,使肺质量得到改善,其主要作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

Effect of leptin on bone metabolism in rat model of traumatic brain injury and femoral fracture

Objective： To observe serum and callus leptin expression within the setting of fracture and traumatic brain injury （TBI）.Methods： Atotal of 64 male SD rats were randomized equally into 4 groups： nonoperated group, TBI group, fraeture group, and fracture＋TBI group. Rats were sacrificed at 2, 4, 8 and 12 weeks after fracture＋TBI. Serum leptin was detected using radioimmunoassay, and callus formation was measured radiologically. Callus leptin was analyzed by immunohistochemistry.Results： Serum ieptin levels in the fracture group, TBI group and combined fracture＋TBI group were all significantly increased compared with control group at the 2 week time-point （P〈0.05）. Serum leptin in the combined fracture ＋TBI group was significantly higher than that in the fracture and TBI groups at 4 and 8 weeks after injury （P〈0. 05）.The percentage of leptin-positive cells in the fracture＋TBI callus and callus volume were significantly higher than those in the fracture-only group （P〈0.01）.Conclusions： We demonstrated elevated leptin expression within healing bone especially in the first 8 weeks in a rat model of fracture and TBI. A close association exists between leptin levels and the degree of callus formation in fractures.

Early period of fracture healing in ovariectomized rats

Objective: To evaluate the effect of osteoporosis on fracture healing through observing the histomorphological changes, bone mineral density of callus and expression and distribution of transforming growth factor beta 1 (TGF β1),basic fibroblast growth factor (bFGF) and bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) in ovariectomized rats. Methods: Sixty female Sprague Dawley rats (aged 12 weeks and weighing 235 g on average) were randomly divided into an ovariectomized (OVX) group (n=30) and a sham operated (SO) group (n=30). Ovariectomy was performed in the OVX rats and same incision was made in the SO rats. Three months later, fracture of femoral shaft was made on all the rats. Then they were killed at different time points. Callus formation was observed with histological and immunohistochemical methods. Results: A reduction in callus and bone mineral density in the healing femur and a decrease of osteoblasts expressing TGF β1 near the bone trabecula were observed in the OVX rats 3 4 weeks after fracture. Histomorphological analysis revealed a higher content of soft callus in the OVX rats than that in the SO rats. Immunohistochemistry results showed that no remarkable difference in expression and distribution of BMP 2 and bFGF between the OVX and SO groups was found. Conclusions: Osteoporosis influences the quantity and quality of callus during the early period of fracture healing. The effect of osteoporosis on fracture healing has no relationship with the expression of BMP 2 or bFGF. The decreased expression of TGF β1 in osteoblasts may cause a decrease in quality of facture healing after osteoporosis.