骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在人乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌微钙化的关系

目的观察骨转录因子Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在人乳腺癌组织中的表达,并进一步探讨其与乳腺癌微钙化形成间的关系。方法利用免疫组化方法观察骨转录因子Runx2和骨桥蛋白OPN在62例乳腺癌组织中的表达。根据乳腺癌患者钼靶X线片中微钙化的有无与数量多少,将62例乳腺癌分为3组,即无钙化组、少量钙化组以及大量钙化组,观察Runx2和OPN蛋白表达与不同乳腺癌微钙化之间的关系。结果 Runx2蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为72.6%(45/62)。OPN蛋白在人类乳腺癌组织中表达阳性率为79.0%(49/62)。Runx2和OPN蛋白的阳性表达与乳腺癌钼靶X线片中微钙化的出现和数量密切相关,随着微钙化从无到有以及由少至多,Runx2(χ2=15.686,P<0.05)和OPN(χ2=16.161,P<0.05)蛋白的阳性表达率呈逐步增高的趋势。但Runx2和OPN阳性表达与乳腺癌钼靶片中微钙化形态无关。结论 Runx2和OPN蛋白在人类乳腺癌组织中高表达,其可能参与了乳腺癌微钙化的形成过程。

骨桥蛋白(OPN)与结肠肿瘤关系的研究进展

近年来,大量研究发现骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在结肠肿瘤的发展及转移过程中起到重要作用,因此OPN有望为结肠肿瘤早期诊断、复发和预后判断提供新的指标,亦有望成为防治肿瘤及肿瘤转移的潜在靶点。本文结合近几年文献,对OPN在结肠肿瘤发生发展中所起的作用及其在结肠癌诊断治疗方面潜在的临床价值作一综述。

小鼠骨桥蛋白(OPN)基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体内抑制效果鉴定

目的构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果。方法参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA重组体。经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液。经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Western blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果。结果成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109 TU/mL病毒原液。与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别。结论利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型。为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具。

口腔鳞癌患者血清中骨桥蛋白(OPN)表达水平的研究

ELISA试剂盒检测口腔鳞状细胞癌患者(58例)、颌面良性肿瘤患者(45例)及健康对照者(60例)血清中OPN的浓度(ng/ml)分别为161.8±12.6、52.3±8.6和48.6±12.8(P<0.05),在淋巴结转移、临床分期晚的患者血清中表达水平要显著高于未转移、临床分期早的患者(P<0.05),口腔鳞癌患者血清OPN与肿瘤的进展有关。

米非司酮对人早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白和绒毛膜促性腺激素-β表达的影响

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白(OPN)和绒毛膜促性腺激素-β(β-hCG)表达的影响。方法:采用免疫组化半定量法检测米非司酮药物流产(n=20)和人工流产(n=20)的早孕绒毛及蜕膜中的OPN(骨桥蛋白)和β-hCG的表达。结果:OPN和β-hCG在早孕妇女绒毛组织和蜕膜组织中的表达米非司酮组均显著低于手术流产组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:米非司酮可能抑制了早孕绒毛及蜕膜中OPN和β-hCG的合成,进而影响胚泡着床和胎盘的形成,使妊娠难以维持,最终流产。

血清骨桥蛋白和CA_(125)联合检测在卵巢上皮癌诊疗中的应用价值

目的探讨血清骨桥蛋白(osteopontin OPN)和CA125在卵巢上皮癌诊疗中的应用价值。方法对卵巢上皮癌患者64例、卵巢良性肿瘤患者68例治疗前血清样品及48例健康妇女血清样品,分别用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及微粒子化学发光法测定其OPN和CA125水平,并对卵巢上皮癌64例患者术后3个月内连续测定,观察疗效和OPN、CA125变化间的相关性。结果卵巢上皮癌患者血清OPN、CA125水平明显高于卵巢良性肿瘤组及健康妇女组。OPN检测敏感度为82.8%;CA125检测敏感度为71.9%;联合检测敏感度93.8%。原发性卵巢上皮癌64例患者中,疗效为完全缓解(CR)的19例术后OPN、CA125水平较术前明显下降(P<0.01);疗效为部分缓解(PR)的30例术后OPN、CA125值较术前下降(P<0.05);疗效为进展(PD)的10例术后OPN、CA125值较术前升高(P<0.05);疗效为无改变(SD)的5例手术前后OPN、CA125值差异无显著性(P>0.05)。结论OPN测定是卵巢上皮癌诊断和监测疗效的有效检查方法,联合检测CA125可提高其临床应用价值。

蛋白P27、Survivin和骨桥蛋白在前列腺癌组织中的表达和意义

目的探讨蛋白P27、Survivin和骨桥蛋白(OPN)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化技术对PCa和癌旁组织标本中的蛋白P27、Survivin和OPN进行分析。结果 80例PCa组织中,蛋白P27、Survivin、OPN阳性表达率与癌旁组织,差异显著(P=0.015);P27表达与PCa病理分期(P=0.026)、临床分期(P=0.037)和有无淋巴结转移(P=0.033)有关,;Survivin表达与PCa病理分期(P=0.041)、临床分期(P=0.039)和有无淋巴结转移(P=0.031)有关,OPN表达与PCa病理分期(P=0.023)、临床分期(P=0.034)和有无淋巴结转移(P=0.027)有关;P27和Survivin,P27和OPN在PCa组织中表达呈负相关(P<0.001)。结论临床中联合检测蛋白P27、Survivin和OPN为前列腺癌的防治和治疗提供一种治疗策略。

靶向骨桥蛋白基因的RNA干扰对裸鼠肝癌影响的实验研究

目的检测骨桥蛋白(OPN)的核糖核酸(RNA)干扰技术对裸鼠肝癌的影响作用,探讨RNA干扰对肝癌基因治疗中的有效性和相关机制。方法体外化学合成骨桥蛋白序列特异性的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并导入肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤,尾静脉注射OPNshRNA表达载体,观察其对肝癌生长的影响作用;酶联免疫吸附(ELISA)方法检测OPN在肿瘤组织中的蛋白浓度。结果全身系统性给予OPN shRNA后,空载体组、阴性shRNA组及OPN shRNA转染组肿瘤体积分别为235±5mm3、222±24mm3(P=0.2)、98±24mm3(P<0.05);瘤组织中OPN浓度在空载体组、阴性shRNA组及OPN shRNA转染组分别为498±8pg/mg、382±98pg/mg和122±56pg/mg(P<0.05)。结论OPN的RNA干扰明显抑制了肿瘤的生长,有望通过RNA干扰技术实现肝癌的基因治疗。

骨桥蛋白基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

为探讨骨桥蛋白(OPN)基因多态性对母猪繁殖性状的影响,用直接测序法检测长白、大约克、杜洛克和金华母猪群体OPN基因的多态性,并对母猪的繁殖性能指标进行了关联分析。结果显示,OPN外显子6有一处T→A的突变,存在TT、AT、AA 3种基因型,等位基因T为优势等位基因;OPN基因多态性对初产和经产长白、大约克、杜洛克和金华母猪群体的总产仔数、产活仔数和初生窝重有显著影响(P<0.05)。试验结果表明,OPN基因多态性对母猪的繁殖性能存在影响,可作为潜在的遗传标记。

实时定量PCR检测蛋壳形成时骨桥蛋白表达变化的研究

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种具有多种功能分泌型钙结合磷酸化糖蛋白。为了从基因表达的角度来解析蛋鸡蛋壳形成的分子机理,本研究以产蛋鸡为试验动物,采用实时定量PCR技术对与蛋壳形成有关的骨桥蛋白基因在子宫中不同时间段(蛋进入子宫前2 h、进入子宫前1 h、进入子宫后5 h、进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h)的表达丰度进行了研究。结果表明,在蛋进入子宫前2 h、蛋进入子宫前1 h、蛋进入子宫后5 h OPN的表达量逐渐升高,之后在蛋进入子宫后15 h、产蛋后1 h、产蛋后2 h又逐渐下降,这一规律性的变化与蛋壳的钙化密切相关。

骨桥蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(OPN)在正常子宫内膜、子宫内膜癌前病变及子宫内膜腺癌组织中的表达情况,探讨其与子宫内膜腺癌发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学SP染色法。对15例正常增生期子宫内膜组织(NE)、14例子宫内膜不典型增生组织(AH)及68例子宫内膜腺癌组织(EC)中的OPN表达进行检测。并评价其与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系。结果:OPN在NE、AH、EC中的阳性表达率分别为26.67%、71.43%和80.88%。OPN的表达从正常增生期子宫内膜到子宫内膜腺癌的发展过程中逐渐增高。EC组表达明显高于NE组。OPN的表达随肿瘤的分化降低而增加,在低分化癌中表达明显高于高分化腺癌。分析OPN在随子宫内膜腺癌临床分期、肌层浸润及淋巴结转移等方面的发展,其表达均显著增加。结论:OPN在子宫内膜腺癌中呈明显阳性表达,为子宫内膜腺癌的诊断提供了进一步的依据;并与肿瘤的恶性程度呈明显的正相关,过度表达预示着预后不良。

血清骨桥蛋白和CA125联合检测鉴别良恶性腹水

目的:探讨联合检测血清骨桥蛋白(OPN)和CA125在良恶性腹水中的诊断价值。方法:取39例恶性腹水患者、48例结核性腹水患者及40例健康妇女血清样品,分别用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及微粒子化学发光法测定其OPN和CA125水平,观察其在诊断良、恶性腹水时的敏感性和特异性。结果:恶性腹水患者血清OPN水平明显高于结核性腹水患者及健康妇女组。OPN检测恶性腹水的敏感度、特异度分别为84.6%、95.0%;CA125检测敏感度、特异度为76.9%、87.5%;联合检测敏感度97.4%、特异度为95.0%。联合检测OPN、CA125较单独检测OPN及CA125其敏感度高(P<0.05);特异度无明显差异。结论:OPN与CA125联合测定是鉴别卵巢癌和结核性腹水的有效方法,联合检测CA125可提高其临床应用价值。

骨桥蛋白基因在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究骨桥蛋白(OPN)基因在前列腺癌中的表达及临床意义。方法收集我院2008年1月至2011年5月行前列腺癌手术后的石蜡包埋标本80例、良性前列腺增生组织石蜡包埋标本35例。应用免疫组化MaxVision法,检测前列腺癌和前列腺增生组织中OPN的表达情况,分析OPN的表达与临床病理参数之间的关系。结果 OPN蛋白在前列腺癌和前列腺增生组织中的阳性表达率分别为72.50%(58/80)和8.57%(3/35),差异具有统计学意义(P<0.05)。OPN蛋白阳性表达率与前列腺癌的T、M分期正相关,差异有统计学意义(P<0.05);OPN蛋白阳性表达率与前列腺癌的年龄、N分期和Gleason评分无相关性,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 OPN蛋白在前列腺癌组织中高表达,提示OPN基因可能与前列腺癌的发生和转移过程有关。

骨桥蛋白在急性肺损伤后肺纤维化大鼠肺组织中的表达及作用

目的：观察骨桥蛋白（ OPN）在脂多糖（ LPS）诱导的急性肺损伤（ ALI）后肺纤维化大鼠肺组织中的表达及作用。方法120只SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组，每组40只。对照组第0、1、2天腹腔注射生理盐水，模型组和干预组注入等量LPS，5 min后干预组再注入抗OPN抗体，而模型组和对照组用生理盐水代替，于24 h、7 d、14 d、28 d处死3组大鼠各10只。行HE及Masson染色观察肺泡炎及肺纤维化改变；免疫组化测定肺组织转化生长因子－β1（ TGF－β1）的表达；检测肺组织匀浆中OPN蛋白水平、羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果模型组第24 h首先出现肺纤维化改变，第28天最明显；同一时间点，模型组肺纤维化评分、TGF－β1的表达、OPN水平、羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均显著高于对照组，而干预组上述指标较模型组均显著降低。结论 OPN在LPS诱导的ALI后肺纤维化大鼠肺组织中高表达，能加重LPS诱导的ALI后肺纤维化，机制可能与OPN促进TGF－β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达有关。

骨桥蛋白促MV4-11白血病细胞uPA表达及信号通路研究

目的初步研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在MV4-11白血病细胞株促尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u PA)表达的信号通路。方法 1)细胞培养:IMDM培养基培养MV4-11白血病细胞。2)分组:1人重组OPN蛋白(0-0.3)μg/m L处理MV4-11白血病细胞24h组;2 PI3-K抑制剂(0-30)μmo L,LY294002处理MV4-11白血病细胞1 h,再用OPN 0.3μg/m L处理细胞24 h组;3NF-ΚB抑制剂(0-15)μmo L处理MV4-11白血病细胞1 h,再用OPN 0.3μg/m L处理细胞24 h组。3)Western blot法分别检测三组细胞u PA表达。结果人重组OPN蛋白单独处理组,随OPN蛋白的浓度增加,u PA表达增加;预先用LY294002及BAY 11-7082处理组,OPN诱导的u PA表达降低。结论 OPN能促进MV4-11白血病细胞u PA表达;LY294002及BAY 11-7082均阻断了OPN促u PA蛋白表达效应,PI3K及NF-KB是这一信号通路中的关键分子。

骨桥蛋白与MMP-9在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶MMP-9在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接染色法(SP法),检测62例宫颈癌I、II期患者癌组织中骨桥蛋白及基质金属蛋白酶MMP-9的表达。结果:骨桥蛋白和基质金属蛋白酶MMP-9在宫颈鳞癌I、II期中均为高表达,表达率分别为77.4%和69.4%,其表达与浸润深度及淋巴结转移相关。OPN与MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.478)。结论:骨桥蛋白和基质金属蛋白酶MMP-9与肿瘤的浸润及侵袭转移有关。

骨桥蛋白对鼠皮肤表皮干细胞的生物学影响

目的:分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞;观察骨桥蛋白重组因子(recombinant rat osteopontin,rrOPN)对表皮干细胞体外增殖作用及促IL-6和IL-1β炎性因子分泌作用的影响。方法:体外分离培养大鼠表皮干细胞,用倒置显微镜及电镜观察其形态,采用β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色鉴定,并进行细胞生长曲线测定,流式细胞仪分析及细胞克隆形成率测定,以角质形成细胞作为对照。实验对不同浓度rrOPN处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞生长率,ELISA法测定IL-6、IL-1炎性因子分泌的变化。结果:倒置显微镜观察所得鼠表皮干细胞呈上皮样生长,电镜观察细胞胞核大,较多处于分裂象。免疫组织化学检测表皮干细胞β1-整合素、CK15、CK19、CK5及CK10染色均呈阳性。细胞周期分析表皮干细胞中48.9%的细胞处于DNA合成期,细胞克隆形成率为34.7%。5～50 ng/mL的rrOPN促进角质形成细胞生长,浓度为15 ng/mL的rrOPN促进细胞生长作用最显著(P<0.05)。rrOPN引起IL-6明显升高(P<0.05),IL-1β未见明显上调。结论:成功建立大鼠表皮干细胞分离、培养方法,rrOPN促进表皮干细胞增殖,并促其炎性因子分泌,影响创口愈合。

血清骨桥蛋白和肝癌的关系可能归因于乙型肝炎病毒慢性感染

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)感染是否增加血清骨桥蛋白(OPN)浓度及OPN与肝癌之间的关系。方法按病例对照研究原理,研究对象分为6个组:HBsAg无症状携带者组(ASC组)、HBsAg阳性慢性肝病组、HBsAg阳性肝癌组、HBsAg阴性其他肿瘤组、HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组、健康对照组。用化学发光微粒子免疫检测法检测血清HBsAg浓度,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清OPN浓度,用Mann-Whitney U检验和线性回归分析法进行统计分析。结果6组研究对象共241名。HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阴性其他肿瘤组、健康对照组血清OPN浓度差异均有统计学意义(P值均=0.0001)。在HBsAg阳性肝癌组与ASC组、HBsAg阳性慢性肝病组间,以及在HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组与健康对照组间,血清OPN浓度差异均无统计学意义(P值分别为0.360、0.588和0.075)。多元线性回归分析结果显示,血清HBsAg浓度是与OPN浓度有关的唯一变量(P=0.0001)。结论血清OPN浓度可能与肝癌本身无关,而与HBV慢性感染有关,在HBV感染者中,可以用血清HBsAg浓度预测血清OPN浓度。

骨桥蛋白在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)在成釉细胞瘤中的表达及临床意义。方法:纳入60例成釉细胞瘤作为实验组,10例正常口腔牙龈黏膜组织作为对照组,运用免疫组织化学SP法技术检测OPN表达情况。结果:滤泡型成釉细胞瘤上皮细胞的细胞核、星网状层细胞和瘤周基质呈OPN阳性;在丛状型成釉细胞瘤中的肿瘤上皮细胞核和肿瘤间的结缔组织呈阳性;单囊型成釉细胞瘤中的瘤体细胞的细胞核和瘤周基质呈阳性。口腔牙龈黏膜中OPN呈弱表达,实验组OPN表达高于对照组(P<0.05)。结论:OPN在成釉细胞瘤中高表达,可能参与成釉细胞瘤的发生发展过程。

骨桥蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义

目的应用免疫组织化学S-P法检测骨桥蛋白(OPN)在子宫腺肌病的腺上皮细胞胞浆中的表达,探讨OPN在子宫腺肌病中的表达意义。方法收集来我院手术治疗的子宫腺肌病患者40例作为观察组,纳入同时期来我院进行手术的子宫肌瘤患者40例作为对照组。比较两组患者间组织中OPN表达水平差异。结果OPN在腺肌病在位内膜分泌期中的高表达,较在位内膜增生期,差异有统计学意义(P<0.05)。OPN在腺肌病在位内膜增生期与分泌期的表达均分别高于在正常内膜增生期与分泌期的表达,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论子宫腺肌病病灶及在位内膜中OPN的表达上调,OPN可能参与了子宫腺肌病的发生与发展过程。