高效液相色谱法同时测定骨炎消方中8种有效成分的含量

目的建立HPLC法同时测定骨炎消方中原儿茶酸、绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、表儿茶素、柚皮苷、淫羊藿苷、茴芹内酯的含量。方法采用AgilentSB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;进样量10 μL;流速0.8 mL·min^(-1);检测波长270 nm;柱温28℃。结果 原儿茶酸、绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、表儿茶素、柚皮苷、淫羊藿苷和茴芹内酯在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9993);平均加样回收率在97.4%~100.4%,RSD在0.72%~2.9%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于骨炎消方的质量控制。

骨炎消方对膝骨关节炎模型家兔软骨组织的改善作用及机制研究

目的研究骨炎消方对膝骨关节炎模型家兔软骨组织的改善作用及其可能机制。方法采用碘乙酸钠法建立KOA模型。采用生化检测法筛选骨炎消给药浓度与时间,用不同浓度骨炎消提取液处理KOA家兔软骨组织,MASSON染色观察软骨形态学改变评估软骨基质中胶原蛋白沉积程度;ELISA测定培养上清液MMP-3、MMP-9、MMP-13含量;RT-PCR检测软骨组织COL-ⅡmRNA表达;Western blot检测软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达量。结果经生化检测法筛选,360、720、1440 mg/ml分别为骨炎消低、中、高的实验剂量;48h、96h为给药时间。与正常组比较,模型组培养上清液中MMP-3、MMP-9、MMP-13含量显著上升(P<0.05);软骨组织中COL-ⅡmRNA表达显著降低(P<0.05),IL-1β、TNF-α蛋白表达显著上升(P<0.05)。与模型组比较,各给药组能够显著降低KOA模型培养上清液中MMP-3、MMP-9、MMP-13含量;能显著上调KOA模型组织中COL-ⅡmRNA表达、下调IL-1β、TNF-α蛋白表达(P<0.05);能够缓解KOA模型软骨组织蓝色软骨胶原减少失染改善组织畸变的情况,且骨炎消方各组效果呈一定剂量依赖性。相同组培养组48h与96h组别比较,除模型组外其余基本无统计学差异(P>0.05)。结论骨炎消方对骨性关节炎家兔软骨组织具有治疗作用,其机制可能是通过抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13的释放、促进COL-Ⅱ的合成、减少IL-1β、TNF-α的表达,从而起到修复受损关节软骨的作用,达到延缓软骨退变的疗效。

基于SDF-1/CXCR4途径的骨炎消方体外干预对兔膝骨关节炎软骨组织的保护机制研究

目的:研究骨炎消方体外干预对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织的保护作用。方法:采用生化检测法筛选骨炎消给药浓度,分为骨炎消方360 mg/mL、720 mg/mL、1440 mg/mL组及盐酸氨基葡萄糖10 mmol/L组,分别处理培养KOA家兔软骨组织,观察软骨形态学改变,评估关节软骨蛋白聚糖丢失程度;检测上清液及软骨组织中关于基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路上相关细胞因子的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组培养上清液中CXCR4含量显著升高,COL-Ⅱ含量显著下降(P<0.01);软骨组织中CXCR4蛋白及mRNA、IL-1β mRNA、MMP-13蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型对照组比较,骨炎消方各浓度组均能够明显降低KOA模型培养上清液中CXCR4含量,提高COL-Ⅱ含量(P<0.05或P<0.01);能明显下调KOA软骨组织中CXCR4蛋白及mRNA、IL-1β mRNA、MMP-13蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01);能够缓解KOA模型软骨组织番红失染,改善组织畸变的情况。结论:骨炎消方可以通过调节SDF-1/CXCR4信号通路,降低CXCR4水平、促进COL-Ⅱ及蛋白聚糖的合成,减少MMP-13及IL-1β的释放,从而改善KOA引起的软骨组织退化。