骨硬化蛋白单克隆抗体治疗骨质疏松

背景:骨硬化蛋白可负向调节骨代谢,其单克隆抗体可拮抗负向调节作用,在促进骨形成的同时抑制骨吸收。目的:旨在探讨骨硬化蛋白单克隆抗体在治疗骨质疏松中的作用机制及最新进展。方法:由第一作者应用计算机检索 PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库和万方数据库(2005年 5 月至 2013 年 5 月)相关文献。在标题、摘要、关键词中以"osteoporosis,antibody,sclerostin,Wnt,SOST"或"骨质疏松,单克隆抗体,骨硬化蛋白,Wnt 通路"为检索词进行检索。选择文章内容与骨硬化蛋白单克隆抗体有关者,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章。结果与结论:初检得到 170 篇文献,根据纳入标准选择关于骨硬化蛋白单克隆抗体的 54 篇文献进行综述。骨硬化蛋白通过与 Wnt 经典信号通路共受体低密度脂蛋白受体相关蛋白 5/6 结合以阻断 Wnt 通路,从而抑制成骨细胞分化及矿化。其单克隆抗体通过与骨硬化蛋白特异性结合而间接促进骨形成、抑制骨吸收,在骨质疏松的治疗中有重大意义。同时,与其他治疗方法相比,骨硬化蛋白作用靶点的组织特异性及骨硬化蛋白单克隆抗体的结合特异性为其增加了应用优势。

骨硬化蛋白单克隆抗体对于有去卵巢大鼠骨折愈合影响的实验研究

目的探索骨硬化蛋白单克隆抗体(Scl-Ab)对去势大鼠股骨干骨折愈合影响的实验研究。方法 30只健康雌性SD大鼠随机行假手术(Sham,n=5)和切除双侧卵巢(OVX,n=25)手术12w后每组各取5只大鼠处死取股骨行双能X线仪检测确保骨质疏松的建立,随后OVX组大鼠建立左侧股骨干中段骨折模型随机的分成2组:OVX组及骨硬化蛋白单克隆抗体治疗(Scl-Ab)组。术后第1天Scl-Ab组开始给予药物治疗:Scl-Ab皮下注射(剂量25 mg/kg,每周2次)直至8 w,8 w时所有大鼠处死取股骨行Micro-CT、硬组织切片检测及HE组织切片检测。结果 Micro-CT结果显示:Scl-Ab组和OVX组相比,骨折端有较多的新生骨形成,且有较高BV/TV、Tb.Th、Tb.N和较低的Tb.Sp值,比较有明显的统计学意义。HE结果表明Scl-Ab组骨折端有更多的骨痂形成,且骨痂更加成熟。硬组织切片观察结果表明:Scl-Ab组骨折端骨痂矿化速度更快,和OVX组表明有统计学意义。结论 Scl-Ab通过增加骨折端骨量及促进骨组织矿化来治疗去卵巢大鼠股骨中段骨折的愈合。

骨硬化蛋白单克隆抗体单用与联合黄芪对去卵巢诱导的骨质疏松疗效比较

目的:探讨骨硬化蛋白单克隆抗体(Scl-Ab)单用与联合黄芪对去卵巢诱导的骨质疏松治疗效果的比较。方法:随机将30只雌性健康SD大鼠行切除双侧卵巢手术(OVX组,n=25)和假手术(Sham组,n=5),手术12周后各取5只大鼠处死并取股骨行Micro-CT检测骨质疏松动物模型是否建立。建模成功后将OVX组大鼠随机分成2组:Scl-Ab组和Scl-Ab+黄芪组。术后第1天Scl-Ab+黄芪组给予药物治疗:Scl-Ab皮下注射(12.5 mg/kg,每周2次);同时每天给于200 mg/kg黄芪液灌胃,直至12周。Scl-Ab组则给予Scl-Ab皮下注射(25 mg/kg,每周2次),并且每天给予200 mg/kg 0.9%氯化钠溶液灌胃,直至12周。用药12周时处死所有大鼠并取股骨行Micro-CT、硬组织切片检测。结果:与Scl-Ab组比,Scl-Ab+黄芪组大鼠股骨远端有较高的股骨BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N、Conn.D、MAR和较低的Tb.Sp,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Scl-Ab联合黄芪对去卵巢诱导的大鼠骨质疏松治疗效果要优于单用Scl-Ab。

骨硬化蛋白单克隆抗体治疗骨质疏松新进展

骨硬化蛋白,是一种由SOST基因编码表达的分泌型蛋白,目前已成为抗骨质疏松药物治疗的热门靶点,并已有大量的相关基础与临床研究。在不同的研究中均证实了骨硬化蛋白单克隆抗体有效地改善了骨质疏松患者的骨密度与骨转换情况。本文就骨硬化蛋白单克隆抗体治疗骨质疏松的最新基础研究与临床前期研究进展进行综述。

脉冲电磁场磁疗与骨硬化蛋白单克隆抗体联合干预绝经后新西兰大白兔骨代谢和骨微结构的变化

背景:脉冲电磁场与骨硬化蛋白单克隆抗体皆能对绝经后新西兰大白兔骨代谢产生良好影响,但关于两者联合干预的效果至今少有报道。目的:探讨脉冲电磁场联合骨硬化蛋白单克隆抗体对绝经后新西兰大白兔骨代谢的影响,探索其对骨质疏松症的治疗价值。方法:采用卵巢切除法建立新西兰大白兔绝经后骨质疏松动物模型。将实验动物随机分为4组:卵巢切除组、脉冲电磁场组、骨硬化蛋白单克隆抗体组和脉冲电磁场+骨硬化蛋白单克隆抗体组,每组10只。术后第1天起,脉冲电磁场组给予脉冲电磁场磁疗每天1次;骨硬化蛋白单克隆抗体组给予骨硬化蛋白单克隆抗体皮下注射每周2次;脉冲电磁场+骨硬化蛋白单克隆抗体组接受脉冲电磁场磁疗每天1次、每周5次,骨硬化蛋白单克隆抗体皮下注射每周2次;卵巢切除组皮下注射相同剂量的生理盐水每周2次,干预共8周。8周后行骨代谢指标检查、骨密度测定、MicroCT骨微结构参数检测。动物研究中的所有程序经复旦大学实验动物科学部批准(20171263A193)。结果与结论:①卵巢切除6个月新西兰大白兔骨密度显著下降,提示骨质疏松模型建立成功;②与卵巢切除组相比,3个治疗组L3椎体的骨密度均显著增加(P<0.05);③3个治疗组血清骨特异性碱性磷酸酶水平均显著高于卵巢切除组,血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平均显著低于卵巢切除组;脉冲电磁场+骨硬化蛋白单克隆抗体组血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b的水平明显低于脉冲电磁场组、骨硬化蛋白单克隆抗体组;④脉冲电磁场+骨硬化蛋白单克隆抗体组骨微结构参数(骨体积分数骨小梁厚度骨小梁数量骨小梁分离度)均优于脉冲电磁场组、骨硬化蛋白单克隆抗体组(均P<0.05);⑤骨硬化蛋白单克隆抗体和脉冲电磁场联合治疗可以增强去势新西兰大白兔骨密度,改善骨代谢和骨微结构。

抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。

骨涎蛋白单克隆抗体对亲骨转移乳腺癌细胞与骨基质黏附的抑制

目的:探讨骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)单克隆抗体对亲骨转移乳腺癌细胞(MDA-MB-231-BO)与骨基质黏附的抑制作用。方法:免疫组化方法检测MDA-MB-231-BO、肺癌细胞SPC-1、大肠癌细胞LOVO、乳腺癌细胞BSP的表达;体外骨基质黏附实验检测肿瘤细胞与骨基质的黏附,以及BSP单克隆抗体对MDA-MB-231-BO细胞与骨基质黏附的抑制;以ELISA法检测肿瘤细胞中生长因子TGF-β1分泌的变化。结果:免疫组化结果表明,MDA-MB-231-F10细胞表达BSP,SPCA-1和LOVO细胞不表达BSP;MDA-MB-231-BO细胞黏附骨基质数明显大于SPCA-1细胞和LOVO细胞(P<0.01);BSP抗体对MDA-MB-231-BO细胞和骨基质黏附具有特异抑制作用,随着抗体质量浓度升高(25、50、100、200μg/ml),其抑制率分别为22.1%、35.0%、39.2%、41.9%,抑制率与抗体浓度呈正相关;同时BSP抗体能特异性抑制MDA-MB-231-BO细胞与骨基质黏附所介导TGF-β1的释放。结论:BSP单克隆抗体对MDA-MB-231-BO细胞和骨基质黏附具有特异抑制作用,提示BSP抗体可抑制乳腺癌特异性骨转移。

^(125)Ⅰ和^(131)Ⅰ标记的骨形成蛋白单克隆抗体在有新骨形成的小鼠体内分布

骨形成蛋白单克隆抗体(BMP McAb)的研制成功为BMP的基础研究和临床应用提供了新的手段和方法。关于BMPMcAb在体内的分布及代谢研究还未见报道。本文先利用BMP在肌肉中诱导出一个新骨生长区,然后研究BMPMcAb在该区及其他脏器中的分布情况。

抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子单克隆抗体在冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染诊断中的初步应用

目的制备抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的单克隆抗体,检测冠状动脉硬化患者的外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块中肺炎衣原体特异性抗原。方法以肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白免疫小鼠,与SP2/0细胞融合后,采用间接ELISA和Western blot筛选阳性杂交瘤细胞,经亚克隆建株;小鼠体内诱生腹水法制备单克隆抗体,用硫酸铵沉淀法对腹水中的单克隆抗体进行纯化,测定其亚类和效价;检测肺炎衣原体标准株以鉴定其特异性。建立间接ELISA方法检测冠状动脉硬化患者外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块标本中的肺炎衣原体抗原。结果获得4株稳定分泌抗蛋白酶样活性因子重组蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为3F8、7B9、8C4和11B5,其效价分别为1∶28000、1∶16000、1∶38000和1∶12000;经亚类鉴定,3F8和7B9杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体为IgG2b,其它2株均为IgG1。以制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测肺炎衣原体抗原,与经典PCR方法的检测结果比较,检出率具有较高的一致性。结论成功获得了抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的特异性单克隆抗体,能特异地识别天然肺炎衣原体蛋白酶样活性因子抗原,有望应用于冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染的抗原诊断。

应用骨形成蛋白单克隆抗体观察骨内种植体骨修复过程

种植材料植入宿主骨内，局部骨组织受其影响所产生的反应以及种植材料与宿主骨之间的良好相容性，是种植成功的关键。本文采用的抗牛骨形成蛋白单克隆抗体（ｂＢＭＰ－ＭｃＡｂ）免疫组化方法，通过显示骨形成蛋白（ＢＭＰ）在种植区局部组织及细胞中的分布及含量，对观察...

重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备

目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP-2m经稀释复性,获得具有生物学活性的rhBMP-2m。并以此作为抗原,免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。结果获得还原SDS-PAGE下95%以上纯度的rhBMP-2m。细胞活性结果分析显示,所获得的rhBMP-2m具有较强的生物学活性。免疫小鼠最终获得两株稳定分泌抗rhBMP-2m抗体的杂交瘤细胞株。结论成功制备了具有生物学活性的rhBMP-2m及其单克隆抗体,为rhBMP-2未来的研究和制备奠定良好的基础。

用抗BMP单克隆抗体分析骨形成蛋白在骨和牙胚中的分布

作者用杂交瘤技术获得了纯系细胞株,能稳定分泌抗BMP单克隆抗体。该抗体能与人的骨和牙胚发生反应,具有很高的特异性。免疫组化染色结果表明,BMP存在于骨基质的胶原纤维、新生的骨基质、骨母细胞和骨髓中的未分化间充质细胞中;在人的牙胚中,BMP主要分布在前期牙木质、外釉细胞和造釉细胞以及形成牙槽骨的牙囊细胞中,表明骨的生长和形成以及牙齿的发育都与BMR密切相关。bBMP-McAb能与人的骨和牙胚发生反应,证实人和牛骨的BMP的抗原决定簇是相同的。BMP活性阻断实验证明,新研制的单克隆抗体能有效地封闭BMP活性基因。利用bBMP McAb这一特点,不仅可以纯化BMP,而且可以用来抑制骨的生长,为临床治疗骨肉瘤和其它骨疾病开拓了广阔的前景。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的临床研究进展

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)的发病率及病死率居全球首位,而低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)的升高是CHD的主要危险因素,因此降低LDL-C水平可有效减少CHD的发病风险。临床上降脂药物如他汀类虽能够有效降低LDL-C水平,但仍有部分患者无法达到降脂目标或者无法耐受。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)抑制剂作为新一代的降脂药物,越来越受到重视。其通过对PCSK9的抑制作用,增加低密度脂蛋白受体的循环利用,能够显著降低血清中LDL-C水平。目前PCSK9抑制剂已进入Ⅲ期临床试验,试验结果显示其具有良好的降脂效果和耐受性。该文就PCSK9抑制剂最新进展和面临的问题作一综述。

Sclerostin单克隆抗体治疗骨质疏松的研究进展

硬骨素(Sclerostin)是由硬化性骨病(sclerosteosis,SOST)基因编码的蛋白质,可以通过与低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(low density lipoprotein receptor-related protein,LRP5/6)结合达到拮抗Wnt蛋白并抑制成骨的作用,已经作为新的药物靶点用于抗骨质疏松药物研发。目前,围绕Sclerostin单克隆抗体已经进行了许多基础研究和临床研究,结果提示该类药物可以提高骨量、促进骨形成、抑制骨吸收,对于骨质疏松有一定治疗效果。但该类药物应用后的副反应,对骨折的影响等方面的研究数据尚不足,有待完善进一步研究。

抗骨形成蛋白单克隆抗体抑制骨肉瘤细胞生长的体外、体内实验

应用单克隆抗体治疗恶性肿瘤是近年来一个新的研究课题，并且在许多方面取得了一定的成绩．本实验成功的制备了抗骨肉瘤形成蛋白的单克隆抗体(BMP-McAb)，以此单抗检测人骨肉瘤、人成骨肉瘤OS-732细胞及其裸鼠移植瘤中BMP的分布情况，观察BMP-McAb对BMP的括性阻断作用，用于探讨BMP-McAb治疗骨肉瘤的可行性并为临床应用提供实验依据。结果发现：

抗胆固醇酯转运蛋白单克隆抗体的制备及其应用

目的 自行制备胆固醇酯转运蛋白 (CETP)单克隆抗体 (McAb) ,建立人血清CETP的酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,并调查中国人群CETP参考值。方法 应用杂交瘤技术制备CETPMcAb。用棋盘试验确定ELISA法的反应条件 ;进行灵敏度、精密度、回收率、特异性试验。结果 制备出一株特异性好、反应性强的CETPMcAb。筛选出ELISA法最佳反应条件 ,样品稀释2 0 0 0倍 ,可检测 0 2 8～ 4 5 2mg/L的血清CETP水平 ;平均批内CV 4 9% ,平均批间CV 10 2 % ;平均回收率为 92 5 %～ 97 2 % ;特异性高。检测结果同国外试验室ELISA法高度相关。 112 8例参考人群血清CETP浓度为 1 84± 1 5 5mg/L ,女性高于男性 ,随着年龄增高 ,CETP浓度降低。冠心病患者CETP浓度为 2 66± 2 0 8mg/L ,较相应对照组显著升高 (P <0 0 1)。结论 该法具有方便、快速、准确、特异等优点 ,对了解CETP在动脉粥样硬化发生中的作用有着十分重要的意义。

硬化蛋白抗体和跑台运动对大鼠骨代谢的影响

目的通过对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠模型进行硬化蛋白和跑台运动的干预,研究硬化蛋白抗体和跑台运动对大鼠骨代谢的影响。方法雄性Wistar大鼠饲养到19周后,分为5组:C组(正常对照组)、M组(甲强龙对照组)、M+E组(甲强龙+运动组)、M+S组(甲强龙+硬化蛋白抗体组)、M+E+S组(甲强龙+运动+硬化蛋白抗体组)。结果 (1)注射甲强龙可以提高脂肪体重和骨细胞凋亡水平,降低全身和股骨骨矿物质含量,降低股骨骨密度和骨陷窝率,且伴随着股骨远端的骨小梁骨量的下降。(2)单纯性的运动可以提高骨量、骨陷窝率,同时可以降低脂肪体重、骨吸收标志物NTx和骨细胞凋亡水平,但运动不会影响骨矿物质含量和皮层骨参数结构。(3)单纯性的注射硬化蛋白抗体能增加骨形成标志物骨钙素(osteocalcin,OC),防止甲强龙对骨质量的不良影响,进而提高骨含量、骨密度以及骨体积百分比。硬化蛋白抗体可以增加远端和中段部分的皮质骨参数,防止骨陷窝率下降和因甲强龙诱导产生的骨细胞凋亡水平上升。(4)运动和硬化蛋白交互作用时,可以提高骨密度、皮质骨参数,促进骨形成抑制细胞凋亡的发生。结论单纯性的Scl-Ab注射方案可以预防糖皮质激素治疗对骨量的不良影响,显著提高皮质骨骨量和骨强度。单纯性的跑台运动方案可以降低脂肪含量,并在不影响皮质骨的情况下防止骨小梁丢失。运动与硬化蛋白之间表现出良好的协同作用,对治疗糖皮质激素诱导骨质疏松症具有积极作用。

单克隆抗体免疫透射比浊法测定血清脂蛋白(a)

血清脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]是一种独立的运载胆固醇的脂蛋白颗粒,Lp(a)与动脉粥样硬化(AS)的心脏疾患有关,是促进AS的独立危险因子1.Lp(a)也是一种敏感的急性时相蛋白,与急性感染,冠心病等诸多疾病的发生、发展有着密切的关系2,3.以往测定Lp(a)多采用ELISA法,缺点是操作繁琐,步骤多,不能用于自动化检测.近年来,作者应用单克隆抗体(McAb)免疫透射比浊法测定血清Lp(a), 对来本院体检的196名健康成人进行了正常参考值的调查,现报道如下.

硬化蛋白抗体和跑台运动对老龄去势大鼠骨重建的影响

目的探讨硬化蛋白抗体和跑台运动对老龄去势大鼠骨重建的影响。方法 8月龄雌性Wistar大鼠,按体质量随机分层分为5组:Sham组(假手术组)、OVX组(去卵巢组)、OVX+E组(去卵巢+运动组)、OVX+S组(去卵巢+硬化蛋白抗体组)、OVX+E+S组(去卵巢+运动+硬化蛋白抗体组)。在14w后取材进行相关指标测试。结果 1单纯性的运动锻炼能降低脂肪量,增加骨小梁数目,减少骨吸收标记物NTx水平,防止老龄去势大鼠全身、股骨骨密度发生下降。2单纯性的硬化蛋白抗体治疗能增加骨形成标志物OC,提高去势大鼠的皮质孔隙率、皮质骨体积和皮质骨厚度,提高骨密度。3运动与硬化蛋白抗体交互作用时,可以降低脂肪量,提高骨密度和皮质骨参数,增加骨量和骨强度,提高OC水平、降低NTx水平。结论适度的跑台运动可以防止老龄去势大鼠骨量丢失,改善去势大鼠骨健康。硬化蛋白抗体疗法可以增加皮质骨骨量和骨强度,预防去势大鼠绝经后对骨代谢的不良影响。硬化蛋白和运动表现出良好的协同作用,对老龄去势大鼠骨重建具有积极的作用。

骨硬化蛋白抗体对去卵巢大鼠骨微结构影响

目的比较大鼠骨微结构差异，探讨骨硬化蛋白抗体对去卵巢大鼠骨微结构的影响。方法雌性SD大鼠随机分为3组，每组10只。基线组，治疗组及对照组，取L5椎体行显微CT扫描测三维骨密度及骨微结构参数。结果对照组微结构相关参数较治疗组和基线均降低（P〈0．05），基线组微结构相关参数高于其他两组。结论骨硬化蛋白抗体对去卵巢大鼠骨微结构具有改善作用。