骨碎补水提液对大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究

目的:通过观察骨碎补水提液对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向分化能力及转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响,阐释其可能的诱导机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;运用MTT法检测不同浓度的骨碎补水提液对SD大鼠MSCs增殖活力的影响;以ALP活性及ALP染色阳性率确定骨碎补水提液最佳促MSCs骨向分化浓度,并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预,按是否添加经典成骨诱导液将实验分为:空白对照组、经典成骨诱导液组、骨碎补水提液组、骨碎补水提液+经典成骨诱导液组,通过检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(BGP)和钙化结节的表达,评价各组骨向分化能力;通过检测转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)的表达,探讨药物促MSCs骨向分化的作用机制。结果:骨碎补水提液最佳促MSCs增殖浓度为5μg/mL;最佳促MSCs骨向分化浓度为50μg/mL;经典成骨诱导液、骨碎补水提液及联合用药均能促进MSCs骨向分化及TGF-β1和BMP-2的表达。结论:补肾中药骨碎补能有效的促进MSCs增殖和骨向分化。在MSCs骨向分化过程中,上调TGF-β1、BMP-2的表达量可能是诱导各组促进MSCs骨向分化的作用机制之一。

骨碎补水提液对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

通过探讨骨碎补水提液对大鼠成骨细胞中OPG mRNA水平表达的影响,来研究骨碎补对成骨细胞产生作用的分子机制。细胞培养48h后,应用荧光定量RT-PCR方法检测不同浓度骨碎补水提液及雌激素受体抑制剂ICI 182780作用后,细胞中OPG mRNA水平表达的变化。结果显示,骨碎补水提液作用于大鼠成骨细胞48h后,与对照组相比,高浓度骨碎补水提液显著上调OPG mRNA的比值,而低浓度组与对照组无显著差异。加入雌激素受体抑制剂ICI 182780后,骨碎补对OPG mRNA水平的促进作用消失。表明骨碎补水提液能上调OPG mRNA水平的表达,且呈剂量依赖性。上述促进作用能被雌激素受体抑制剂阻断,因而可以推测这个过程与雌激素受体通路有关。