中药增骨Ⅰ～Ⅲ号序贯疗法防治骨质疏松症骨组织形态计量学研究

为探讨增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法治疗骨质疏松症的机理 ,进行了骨组织形态计量学分析。采用 6 0只 10月龄Wistar大鼠 ,随机分成 6组 (正常、西药、预防、序贯疗法、验方及模型组 )。除正常组外 ,全部大鼠进行双侧卵巢切除 ,在去势后 6个月全部处死 ,制成不脱钙骨切片进行骨组织形态计量学分析。结果显示预防组大鼠的骨量最多 ,与正常组比无差异 (P >0 0 5 ) ;序贯疗法组大鼠的骨量与验方组比较有明显增加 (P <0 0 5 ) ,与西药组比较有明显增加 (P <0 0 5 ) ,但后者并发症多。本实验研究证明增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法能建立骨重建正性平衡 。

成骨细胞培养上清液对大鼠糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用

目的:研究成骨细胞培养上清液对糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用。方法:36只糖皮质激素性骨质疏松症大鼠随机分为成骨细胞培养上清液组(A组)、原始培养液组(B组)和对照组(C组),每组12只。A组每周2次肌肉注射成骨细胞培养上清液,每次0.5ml/kg;B组每周2次肌肉注射原始培养液0.5ml/kg;C组每周2次肌肉注射生理盐水,每次0.5ml/kg。8周后对各组大鼠的第3腰椎行骨密度测量及左股骨组织形态计量学分析。结果:A组第3腰椎骨密度值明显高于B组(P<0.01)和C组(P<0.01),B组和C组之间无显著性差异(P>0.05)。左股骨组织形态计量学分析结果显示:A组的骨体积、类骨质表面、类骨质宽度和成骨表面均比B组(P<0.01)和C组显著增高(P<0.01)。骨吸收表面三者之间无显著性差异(P>0.05)。结论:成骨细胞培养上清液可有效治疗糖皮质激素性骨质疏松症。

去势法兔骨质疏松模型建立的探讨

目的探讨采用去势法建立免骨质疏松症模型的可行性。方法将20只5月龄新西兰雌兔随机分成手术组(OVX)与假手术组(SHAM),手术组行双侧卵巢切除。两组分别于术前、术后 4、8、12、24 w进行全身骨密度(BMD)检测;术前、术后12 w和术后24 w行骨代谢指标检测: 骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b);于术后 12w和24w各处死10只兔,取其右侧股骨行生物力学测定及取腰椎,制成不脱钙的骨切片,行骨组织形态计量学分析。结果去势6 m后,OVX组全身BMD明显低于SHAM(P<0．01):在骨代谢指标TRAP-5b、BALP及BGP,OVX组均明显高于SHAM组(P<0．01):生物力学检测中的弯曲强度、比例载荷、最大挠度和弯曲破坏载荷OVX组均较SHAM组明显下降(P<0．01)。骨组织形态计量学显示,OVX组的骨质丢失明显增加(BV／TV％下降,Tb．N减少,Tb．Sp变宽),骨小梁形成明显减少(OS／BS及MAR均增多),骨吸收明显升高(ES／BS、Oc．No／Tb．Pm 升高),这些指标与SHAM组比较有明显性差异(P<0．01)。结论去势法建立兔骨质疏松症模型切实可行,5月龄雌兔,造模6月。本模型为探明原发性骨质疏松发病机理、评价药物疗效及临床骨质疏松性假体松动研究提供重要的基础。

兔下颌骨放射性骨坏死模型的建立及评估

目的 :建立兔下颌骨放射性骨坏死动物模型,并通过大体观察、单光子发射计算机体层摄影(SPECT)、显微CT及组织病理学方法对该模型进行评估。方法:将24只新西兰兔随机分为对照组和低、中、高3个剂量组,根据生物学等效公式,以低分割多次照射法,使用直线加速器对各组动物的左侧下颌区分别进行0、8.0、8.9和9.7 Gy照射,共5次。45 d后,拔除所有动物左侧下颌磨牙,3个月后,进行大体观察、SPECT、显微CT及组织病理学检查,采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 :高剂量组动物死亡率较高。高、中剂量组出现照射区皮肤脱毛及照射侧拔牙创不愈合、下颌骨死骨形成并暴露;低剂量组脱毛不明显、拔牙创形成完整黏膜覆盖。组织学观察显示,高、中剂量组下颌骨有死骨形成及骨髓腔纤维化改变,低剂量组主要表现为髓腔炎症。SPECT显示,高、中剂量组代谢率较对照组显著降低。Micro-CT显示,高、中剂量组有死骨分离及骨皮质破坏,BV/TV、Tb.Th、Tb.N值下降,Tb.Sp值增加。结论:以8.9 Gy剂量对兔下颌区进行分割照射并在照射后拔牙,可成功建立下颌骨放射性骨坏死模型,在各项指标中均有明显放射性骨坏死表现,可重复性好,是研究下颌骨放射性骨坏死较为理想的动物模型。

自噬对高胆固醇饮食大鼠下颌骨结构改变的影响研究

目的探讨自噬对高胆固醇饮食大鼠下颌骨结构改变的影响及辛伐他汀的治疗效果。方法将30只SD大鼠随机分为正常饮食组(NC组)10只、高胆固醇组20只;喂养24周后,高胆固醇组再随机分成两组,每组10只,一组继续喂养高胆固醇饲料(HC组),另一组在高胆固醇饲料中加入5 mg/kg辛伐他汀(HC+SIM组)。喂养32周后,取大鼠空腹血进行生化检测;处死大鼠后对下颌骨进行骨组织形态分析;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫组织化学染色检测各组自噬相关基因Lc3及p62的mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)3组总胆固醇和低密度脂蛋白水平总的比较,差异均有统计学意义(F值分别为21.539、16.596,均P <0.05);其中NC组和HC+SIM组总胆固醇和低密度脂蛋白水平均低于HC组(均P <0.05),而NC组和HC+SIM组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与NC组比较,HC组大鼠骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目明显下降,而骨小梁间隔增加,Lc3及p62 mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义(均P <0.05);与HC组比较,HC+SIM组骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目均明显升高,骨小梁间隔减小,p62 m RNA和蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义(均P <0.05);而NC组和HC+SIM组这些指标组间比较,差异均无统计学意义(均P> 0.05)。结论自噬可能参与调控高胆固醇饮食大鼠下颌骨结构的改变,辛伐他汀能够改善高胆固醇饮食导致的大鼠下颌骨微结构的破坏。

大鼠复合型放射性下颌骨骨坏死动物模型建立及观察

目的依据颌骨放射性骨坏死(ORNJ)新的临床诊断标准,探讨建立可模拟ORNJ不同临床分期的复合型动物模型的方法。方法健康SD雄性大鼠36只,随机分为6组:a1、b1、c1为实验组,a0、b0、c0组为对照组;根据生物学等效公式,实验组采用电子直线加速器对大鼠左侧下颌区进行照射,7Gy/次,1次/d,照射5 d;照射后6周,处死a1、a0组大鼠,并拔除b1、b0、c1、c0组大鼠左侧下颌磨牙;照射12、18周后,分别处死b1、b0组大鼠和c1、c0组大鼠并取下颌骨标本。对所有标本进行组织学观察和micro-CT扫描与骨组织形态学分析。使用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果实验组照射区可见a1组门齿生长障碍、b1组死骨暴露、c1组咬合错乱,化脓性感染与病理性骨折等症状;对照组无症状。组织学观察可见,实验组照射区骨髓腔与牙周膜内,炎性细胞浸润、纤维组织增生,b1、c1组还可见游离死骨;实验组门齿牙根与皮质骨渐进性破坏,c1组部分大鼠门齿牙根结构消失,周围皮质骨不连续;实验组空白骨陷窝增多,骨陷窝内骨细胞减少。micro-CT结果显示:相对骨体积(BV/TV):a1(0.401±0.053)、a0(0.615±0.037)、b1(0.309±0.041)、b0(0.717±0.040)、c1(0.200±0.026)、c0(0.724±0.041),实验组相对骨体积(BV/TV)均低于对照组;实验组间BV/TV值相比,a1>b1>c1,Pa1、b1=0.012、Pb1、c1=0.034、Pc1、a1=0.004,差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立了一种能够模拟出轻度无症状(a1)、中度死骨暴露(b1)与重度联合症状(c1)三种不同ORNJ分型的复合型动物模型,为针对性研究ORNJ治疗方法提供了实验平台。