针药并用治疗肝肾阴虚型类风湿关节炎临床研究及对骨细胞因子的影响

目的观察针药并用治疗肝肾阴虚型类风湿关节炎(RA)的临床疗效及对骨细胞因子的影响。方法将107例肝肾阴虚型RA患者按照随机数字表法分为2组,对照组53例予甲氨蝶呤片联合美洛昔康片治疗,观察组54例在对照组治疗基础上加针刺联合六味地黄丸加减治疗,2组均治疗2个月。比较2组临床疗效及治疗前后中医证候评分、RA 3项血清学指标[类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、C反应蛋白(CRP)]水平和骨细胞因子[骨保护素(OPG)、核转录因子-κB受体活性因子配体(RANKL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)]水平。结果观察组总有效率92.59%(50/54),对照组总有效率81.13%(43/53),观察组临床疗效优于对照组(P<0.05)。治疗后2组中医证候各项评分及总分均较本组治疗前降低(P<0.05),且观察组关节肿胀疼痛或痠痛、关节屈伸不利、晨僵、腰膝痠软、头晕目眩评分及总分均低于对照组(P<0.05)。治疗后2组血清RF、抗CCP抗体及CRP水平均较本组治疗前降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05)。治疗后2组血清OPG水平均较本组治疗前升高(P<0.05),PANKL、M-CSF水平均较本组治疗前降低(P<0.05),且观察组OPG水平高于对照组(P<0.05),PANKL、M-CSF水平低于对照组(P<0.05)。结论针药并用治疗能够改善肝肾阴虚型RA患者临床症状,提高治疗效果,可能与抑制破骨细胞的生成和分化有关。

甲氨蝶呤联合来氟米特对类风湿关节炎患者免疫功能及骨细胞因子的影响

目的分析甲氨蝶呤联合来氟米特对类风湿关节炎患者免疫功能及骨细胞因子的影响。方法选取进行类风湿关节炎治疗的74例患者随机分为对照组、研究组各37例。对照组给予来氟米特治疗;研究组给予甲氨蝶呤联合来氟米特治疗。采用视觉模拟评分(VAS)和疾病活动性(DAS)28评分评估患者疼痛程度和关节活动度;电化学发光免疫法检测血清抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体水平;双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测嗜酸性粒细胞(EOS)、白细胞介素(IL)-33、IL-1、核转录因子-κB受体活性因子配体(RANKL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、骨保护素(OPG)水平;流式细胞仪检测CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平,对比两组治疗效果。结果治疗后,与对照组相比,研究组VAS、DAS28评分、抗MCV抗体、抗CCP抗体、EOS、IL-33、IL-1、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、RANKL、M-CSF水平均明显降低,CD8^(+)、OPG水平均明显升高(P<0.05)。研究组总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论采用甲氨蝶呤联合来氟米特对类风湿关节炎患者进行治疗,能够显著改善患者疼痛程度,恢复关节活动度,减轻炎症反应,提升免疫功能、改善骨细胞因子水平,降低抗MCV抗体、抗CCP抗体,治疗效果显著。

破骨细胞分化因子诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞的实验研究

目的:探讨破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用进行体外诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞(OC)的能力。方法:收集5～6周小鼠骨髓细胞,在含M-CSF(10 ng/ml)的α-MEM全培养液中培养24h,然后将悬浮生长的细胞接种到24孔培养板,并加入不同浓度的ODF和M-CSF。,通过观察抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色的阳性细胞和能否在骨磨片上形成吸收陷窝来鉴定OC形成情况。结果:在只加入ODF或M-CSF一种细胞因子时,未见有TRAP阳性或CTR阳性细胞形成,同时加入ODF和M-CSF,可形成典型的OC。TRAP阳性多核细胞的数目和培养液中钙离子浓度的增加与ODF的浓度呈正相关。结论:小鼠骨髓来源的单核细胞在ODF和M-CSF共同作用下可形成具有骨吸收功能的OC,为体外研究OC的分化发育和功能调节提供了一种新的方法。

雌激素对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素、破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的影响

目的观察雌激素对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子 (M-CSF)mRNA表达的影响,探讨雌激素预防和治疗绝经后骨质疏松(PMO)的可能细胞因子途径。方法健康3月龄雌性SD大鼠30只,随机等分为假手术组,去卵巢组和雌激素组(已烯雌酚片,0．0225 mg·kg-1·d-1,灌胃)。假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行卵巢切除术。12周后取第3-6腰椎做骨密度检查。取股骨提总RNA。实时定量PCR法检测上述因子mRNA的表达情况。结果 (1)相对于去卵巢组,雌激素组大鼠腰椎骨密度增高,差异有统计学意义。(2)相对于去卵巢组,雌激素组大鼠骨组织OPG的mRNA表达增高,M-CSF的mRNA表达下降,ODF／OPG值下降。结论雌激素治疗绝经后骨质疏松的效应可能与其调控OPG,M-CSF的表达和ODF／OPG值有关。

人牙周膜细胞骨保护因子和破骨细胞分化因子蛋白的表达及1α,25(OH)_2维生素D_3的调节

目的：研究人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerm，OPG)和破骨细胞分化因子(receptor activator nucle-ar factor kappa B ligand，RANKL)蛋白的表达，以及骨吸收促进因子1α，25(OH)_2维生素 D_3对 OPG 蛋白表达的影响。方法：用系列酶消化法体外培养人牙周膜细胞，用免疫细胞化学检测细胞上表达的 RANKL 蛋白，以酶联免疫吸附实验检测无外源性刺激以及1α，25(OH)_2维生素 D_3诱导2、4、6 d 时细胞分泌到培养基中的 OPG 蛋白。结果：人牙周膜细胞胞膜和胞浆上表达 RANKL 蛋白，分泌 OPG 蛋白到培养基中。1α，25(OH)_2维生素 D_3降低 OPG蛋白的分泌。结论：人牙周膜细胞表达 OPG 和 RANKL，1α，25(OH)_2维生素 D_3影响 OPG 的表达，推测其通过OPG/RANKL 通路参与骨改建。这一结论为进一步研究牙周膜细胞参与骨改建的机制打下基础。

血清破骨细胞分化因子和抑制因子检测对肺癌骨转移的诊断价值

目的探讨血清破骨细胞分化因子(ODF)和破骨细胞生成抑制因子(OCIF)水平对肺癌骨转移的诊断价值。方法入选的研究对象为经细胞学和病理学确诊为原发性肺癌的患者(186例):分为骨转移组(104例)和无骨转移组(82例);该院健康体检者(30例)作为对照组;肺部其他疾病组(66例)。采用ELISA测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果骨转移组患者血清ODF和OCIF水平分别为(32.22±6.22)ng/L、(41.23±8.13)ng/L明显高于无骨转移组的(8.35±5.42)ng/L、(10.15±4.42)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);骨转移组ODF和OCIF检测的诊断灵敏度为90.38%和86.54%,特异度为86.59%和84.15%;不同肺癌病理类型的骨转移组患者血清ODF和OCIF水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清ODF和OCIF是诊断肺癌骨转移的重要参考指标,其水平的增高可用于诊断肺癌骨转移的发生。

帕米膦酸钠对大鼠正畸牙移动过程中破牙骨质细胞及破骨细胞分化因子表达的影响

目的:研究帕米膦酸钠对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织压力侧破牙骨质细胞及破骨细胞分化因子(ODF)表达的影响。方法:选择24只6周龄SPF级健康雌性Wistar大鼠,建立正畸牙移动动物模型,每只大鼠上颌分实验侧和对照侧,于安装矫治器前3 d,于实验侧大鼠第一磨牙近中腭侧黏骨膜下注射帕米膦酸钠50μL,对照侧注射0.9%生理盐水50μL,每3 d注射1次。于正畸加力3、7、14 d时分批处死8只大鼠,制作牙周组织切片,观察破牙骨质细胞数量,免疫组化观察ODF的表达情况。采用PASW Statistics 18软件包对实验数据进行统计学处理。结果:实验侧在3、7、14 d时,第一磨牙压力侧破牙骨质细胞的数目均少于对照侧,其中,7、14 d时两侧差异显著(P<0.05);实验侧在3、7、14 d时,第一磨牙压力侧ODF阳性表达均低于对照侧,其中,7、14 d时两侧差异显著(P<0.05)。结论:局部注射二膦酸盐帕米膦酸钠能够减少大鼠正畸牙移动过程中牙周组织压力侧破牙骨质细胞的数量及ODF的阳性表达。

1,25-二羟维生素D_3对骨髓破骨细胞形成和破骨细胞分化因子mRNA表达的影响

目的 :观察不同浓度的 1,2 5 - (OH) 2 D3 对骨髓单个核细胞诱导形成破骨细胞和对单个核细胞ODFmRNA表达的影响。进一步阐明骨吸收刺激因子在破骨细胞性骨吸收中的作用机制。方法 :应用不同浓度的 1,2 5 - (OH) 2 D3 ( 0、10 -10 、10 -8、10 -6mol/L)诱导大鼠破骨细胞的形成 ,观察形成破骨细胞的数目 ,并采用原位杂交技术检测骨髓细胞ODFmRNA的表达。结果 :随着 1,2 5 - (OH) 2 D3 浓度的增加 ,多核细胞计数增多 ;ODFmRNA表达的阳性信号显著增强。结论 :1,2 5 - (OH) 2 D3 通过调节骨髓细胞ODFmRNA的表达 ,影响破骨细胞的形成和功能 ,进而调节局部骨微环境内骨吸收与骨形成平衡的变化 ,影响骨组织改建。

巨噬细胞集落刺激因子对体外培养人牙囊细胞破骨细胞分化因子表达的影响

目的：研究巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞破骨细胞分化因子（RANKL）mRNA表达的影响。方法：原代培养人牙囊细胞，传至第3代，制备细胞爬片，进行RANKL免疫组化染色；选取生长状态良好的第3-6代人牙囊细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，培养基中分别加入25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子，共同孵育0．5、1、3、6、12h，提取总RNA进行RT-PCR，灰度值半定量分析RANKL mRNA的变化。结果：正常人牙囊细胞RANKL蛋白表达阳性；25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子可升高人牙囊细胞RANKL的表达；共同孵育3h，RANKL表达最高。结论：巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞表达RANKL，具有正向调节作用。

破骨细胞分化因子可诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞

研究了鸡破骨细胞分化因子(Chicken osteoclast differentiation factor,chODF)体外诱导鸡骨髓细胞形成破骨样细胞的能力。在无菌条件下取鸡股骨和胫骨,收集骨髓细胞。试验分设A、B、C、D、E、F、G 7组。A组为对照组,不加细胞因子,其他各组为试验组,其中B组仅加chODF,C组只加巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage-colony-stimulating factor,M-CSF),D、E和F组同时加不同浓度的chODF和M-CSF,G组同时加chODF、M-CSF和鸡护骨素(Chicken osteoprotegerin,chOPG)。通过抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tratrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、HE、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色和显微、超微检查,观察和鉴定破骨样细胞(Osteoclast like cell,OLC)的形成。结果表明,chODF可诱导形成典型的OLC,骨吸收陷窝清晰可见,其陷窝面积大,数量多,且TRAP阳性多核细胞的数目与ODF的浓度呈正相关,多组比较其差异显著(P<0.05),但若加入chOPG,则阻断了OLC的形成和骨吸收。本试验建立了一种鸡骨髓细胞诱导破骨样细胞方法,既为体外研究鸡破骨细胞的分化发育和功能调节创造了条件,也为进一步研究OPG/ODF/RANK(NF-κB受体,Receptor activator of NF-κB)在蛋鸡骨质疏松症等骨骼疾病的作用机制提供理论基础。

不同浓度破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子体外诱导大鼠破骨样细胞形成的研究

目的探讨破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子在大鼠破骨样细胞形成、分化中的作用,为进一步研究正畸牙齿移动的生物力学机制奠定基础。方法应用不同浓度的破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子对提取的SD大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,分别于培养1、3、5、7 d利用TRAP染色、骨吸收陷窝检测等对单核及多核破骨样细胞的生成进行鉴定,对TRAP(+)的细胞进行计数和统计学分析。结果巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子对TRAP(+)的单核及多核破骨样细胞的诱导分化作用与时间有关:第3 d时逐渐增多,以第5 d和第7 d为最多;缺乏巨噬细胞集落刺激因子时,骨髓单个核细胞不能有效地分化为TRAP(+)的细胞;在破骨细胞分化因子浓度一定的条件下(50 ng/ml),TRAP(+)的细胞数与巨噬细胞集落刺激因子的浓度有关,当其浓度超过30 ng/ml时,TRAP(+)细胞数不再显著增加,曲线趋于平缓;当巨噬细胞集落刺激因子浓度一定的条件(50 ng/ml)下,TRAP(+)的细胞数与破骨细胞分化因子的浓度无关。结论以巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养,可获得TRAP(+)吸收陷窝(+)的破骨样细胞,且巨噬细胞集落刺激因子30 ng/ml、破骨细胞分化因子50 ng/ml时具有最强的生物学效应。

1,25-(OH)_2D_3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。

人破骨细胞分化因子(ODF)的克隆和序列分析

目的克隆人破骨细胞分化因子(ODF)基因并进行序列分析。方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人ODF的编码区cDNA,克隆至载体pUC19中,酶切鉴定后进行序列分析。结果获得人ODF编码区基因和重组质粒pUC19-ODF,DNA序列分析证实获得了ODF基因,其序列和文献报道一致。结论采用基因克隆的方法得到人OPG基因,为进一步进行其结构和功能研究打下了基础。

破骨细胞分化因子mRNA在大鼠正畸牙槽骨改建过程中的表达和分布

目的 :观察大鼠正畸牙槽骨改建过程中ODFmRNA表达和分布变化情况 ,探讨ODF与牙槽骨改建和破骨细胞形成的关系。方法 :建立SD大鼠磨牙移动实验模型。于牙齿移动 1、3、5、7d后取材分别进行ODFmRNA原位杂交染色。结果 :在正常牙周组织中 ,ODFmRNA呈弱阳性主要表达于牙槽骨表面的成骨细胞和少量牙周膜成纤维细胞胞浆中 ,分布比较均匀。加力 3d后 ,压力侧牙槽骨表面可见大量多核破骨细胞及骨吸收陷窝 ,此时ODFmRNA的表达显著增强 ,主要分布于牙槽骨表面的成骨细胞、靠近牙槽骨一侧的血管周围的牙周膜成纤维细胞以及牙槽骨骨髓腔内的成骨细胞。 5d后 ,ODFmRNA表达和分布情况与第 3d相似 ;7d后 ,牙槽骨表面成骨细胞仍呈ODFmRNA阳性表达 ,但血管周围阳性细胞数明显减少。结论 :ODFmRNA的表达变化与牙槽骨改建中破骨细胞的生命过程密切相关 ,是破骨细胞来源。

破骨细胞形成抑制因子研究进展

破骨细胞形成抑制因子 (OPG/OCIF)是最近发现的一种参与调节骨密度的糖蛋白 ,是一个肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的新成员 ,其氨基酸序列中具有TNF受体结构类似区 .成熟的OPG/OCIF具有 7个结构域 ,可分为三个功能区 ,即 :TNF受体结构区、致死结构区和肝素结合区 .OPG/OCIF基因定位在 8q2 3～ 2 4上 ,由5个外显子和 4个内含子组成 ,其表达受到与骨的形成和破坏有关因子的调控 :如TGF β1、 1,2 5 (OH) 2 VD3、TNF α等等 .OPG/OCIF抑制骨的破坏和吸收机制主要是抑制破骨细胞的存活 。

人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达

目的克隆人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区基因并在真核 细 胞中表达，为进一步研究OPG/OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR法得到人OPG/OCIF 的 编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OP G/OCIF在真核细胞中表达。结果获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCI F) 编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG/OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致 。成功构建OPG/OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳 定转染OPG/OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG/OCIF在真核细 胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区全长cD NA并证实在真核细胞中表达，为OPG/OCIF进一步的功能研究奠定了基础。

金雀异黄素通过雌激素受体β增加人成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子表达比值

目的探讨植物雌激素———金雀异黄素(genistein)对人成骨细胞(HOB)作用的分子机制。方法采用细胞培养结合Western blot方法,观察不同浓度金雀异黄素对HOB细胞的护骨素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)、雌激素受体(ER-,αER-β)蛋白质的影响。结果①中、大剂量金雀异黄素明显上调HOB细胞OPG蛋白质的表达、下调RANKL蛋白质的表达;雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(10-8mol/L)拮抗金雀异黄素(10-8mol/L)的上述作用。②大剂量金雀异黄素刺激HOB细胞ER-β蛋白质的表达;各组ER-α蛋白质的表达量与对照组比较,差异无显著性意义(均P>0.05)。③OPG/RANKL比值与金雀异黄素剂量成正相关关系(r=0.694,P<0.05)。结论金雀异黄素通过ER-β上调HOB细胞OPG表达、下调RANKL表达,该雌激素样效应可能是其抗骨质疏松作用的分子机制之一。

氟和地塞米松对成骨细胞生长因子表达的影响

目的 观察低浓度氟和地塞米松对成骨细胞生长因子或其受体表达的影响 ,探讨其对成骨细胞发育、分化的可能机制。方法 体外培养MC3T3 E1成骨细胞 ,利用免疫组化方法检测成骨细胞内血小板衍化生长因子 A(PDGF A)和胰岛素样生长因子 Ⅰ的α受体 (IGF Ⅰ Rα)表达 ,并对其结果作图像分析。结果 氟和地塞米松对PDGF A表达在各个时期都没有影响 ,而在细胞培养早期均促进了IGF Ⅰ Rα表达 ,地塞米松的促进作用尤为明显。结论 低浓度氟和地塞米松均促进幼稚成骨细胞中IGF Ⅰ Rα表达 ,IGF Ⅰ Rα表达增高可能与其对成骨细胞增殖、分化影响有关。

护骨素、破骨细胞分化因子系统与牙槽骨改建

护骨素、破骨细胞分化因子系统直接参与骨代谢的调节,在牙槽骨改建过程中起重要作用。破骨细胞分化因子通过与RANK结合诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化、增殖,从而加速骨吸收。护骨素则通过竞争性与破骨细胞分化因子结合抑制RANK的作用。对护骨素—破骨细胞分化因子—RANK环路的进一步研究有利于阐明牙槽骨改建的分子机制,为进一步探索与牙槽骨改建有关的疾病防治提供有益思路。