重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA对骨肉瘤小鼠肿瘤的影响

目的探讨重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA对骨肉瘤小鼠的肿瘤增殖、生长、表达和血管生成的影响。方法选取30只雌性BLAB/c小鼠随机分为3组(A、B、C组各10只),分别进行Ad5-Eag1-shRNA感染骨肉瘤MG-63移植、Ad5-Control-shRNA感染MG-63移植以及单纯感染MG-63移植;利用裸鼠成瘤实验和CCK-8法、蛋白印迹技术(Western blot)和免疫组化技术对不同分组骨肉瘤小鼠的肿瘤增殖和体积、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和微血管密度(microvascular density,MVD)进行观察并比较。结果Ad5-Eag1-shRNA感染组小鼠骨肉瘤感染24 h、36 h、48 h和72 h的MG-63细胞存活率在各时间段均显著低于Ad5-Control-shRNA感染组(P<0.05),且细胞存活率呈现降低趋势(P<0.05);Ad5-Eag1-shRNA感染组小鼠的肿瘤体积、单个高倍视野下MVD数均显著低于Ad5-Control-shRNA感染组和对照组,WB结果显示Ad5-Eag1-shRNA感染组的VEGF水平表达也显著低于Ad5-Control-shRNA感染组和对照组,上述差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA对骨肉瘤小鼠的肿瘤增殖、生长、表达和血管生成能够起到抑制和阻碍效果。

人骨肉瘤细胞致瘤性与临床预后关系的实验研究

目的通过建立稳定的骨肉瘤体内模型,初步筛选出骨肉瘤的高致瘤性细胞群,分析骨肉瘤的致瘤性与临床患者预后的相关性。方法利用骨肉瘤患者的原代活组织检查标本及化疗后行保肢术或截肢术时所取的标本,接种裸鼠或非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,致瘤后分离移植瘤,体内接种连续传代建立的骨肉瘤体内模型;应用流式细胞仪分析高致瘤骨肉瘤细胞表型,并对患者进行随访,统计其生存情况,了解骨肉瘤细胞的致瘤性与患者临床预后的关系。结果成功建立可稳定传代的人骨肉瘤小鼠体内模型,致瘤组预后差者占9/12,显著高于非致瘤组的3/18(P<0.01);致瘤性与患者复发、转移及死亡呈正相关(r=0.773,P=0.01)。移植瘤细胞中间充质干细胞标志CD44、CD90、CD166均呈高表达,分别为(56.1±2.0)%、(60.3±2.1)%、(61.4±4.1)%。结论高致瘤骨肉瘤患者的预后较非致瘤者差;CD44、CD90、CD166可作为临床判断骨肉瘤患者预后的指标。