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骨碎补UPLC指纹图谱与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶活性的谱效关系研究
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作者 陈香丽 张慧敏 张紫佳 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期293-302,共10页
建立骨碎补生品和砂烫品提取物的UPLC指纹图谱,并研究骨碎补提取物与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶(ALP)活性之间的谱效关系。采用UPLC法建立骨碎补生品和烫品的指纹图谱并通过UPLC-Q-TOF MS法对其化学成分进行鉴别;通过测定MG63细胞中... 建立骨碎补生品和砂烫品提取物的UPLC指纹图谱,并研究骨碎补提取物与人骨肉瘤细胞MG63中碱性磷酸酶(ALP)活性之间的谱效关系。采用UPLC法建立骨碎补生品和烫品的指纹图谱并通过UPLC-Q-TOF MS法对其化学成分进行鉴别;通过测定MG63细胞中ALP活性检测骨碎补提取物对MG63细胞成骨分化的影响;采用灰色关联度分析、双变量相关性分析以及偏最小二乘回归分析法分析骨碎补生品和烫品的UPLC特征指纹峰与其促ALP活性之间的谱效关系。在标定的12个共有峰中,确定了4、5、12号峰与ALP活性呈正相关,其对应的物质依次是咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、儿茶素7-葡糖苷、柚皮苷,为深入研究骨碎补的促成骨分化活性物质基础提供依据。 展开更多
关键词 骨碎补 UPLC指纹图谱 碱性磷酸酶活性 谱效关系 骨肉瘤细胞mg63
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甘草次酸抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的NF-κB信号通路机制 被引量:3
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作者 董嵩 刘培敏 +4 位作者 杜向阳 李凤岩 曹营 林大勇 白剑 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期399-401,共3页
目的:探讨甘草次酸抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的机制。方法:实验应用骨肉瘤细胞MG63作为研究对象,分5组。空白组、甘草次数组(50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)、阳性对照组。每组6个复孔。空白组为不含有甘草次酸的DMEM的培养基,甘草... 目的:探讨甘草次酸抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的机制。方法:实验应用骨肉瘤细胞MG63作为研究对象,分5组。空白组、甘草次数组(50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)、阳性对照组。每组6个复孔。空白组为不含有甘草次酸的DMEM的培养基,甘草次酸组分别加入50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L的甘草次酸,阳性对照组加入白藜芦醇(40μmol/L)。将细胞接种于培养瓶内,当细胞进入生长平台期后使用0.1%的胰酶消化并按1×106 cells/ml的密度接种于96孔板中,继续培养24 h。采用甲基四氮唑蓝检测细胞的增长率,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测骨肉瘤细胞MG63的凋亡,蛋白质印迹法检测NF-κB蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,甘草次酸孵育24 h后,各组的骨肉瘤细胞G63增殖率明显降低(P<0.05)、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05);甘草次酸孵育48 h后,骨肉瘤细胞G63增殖率和NF-κB蛋白的相对表达量均明显降低(P<0.05)、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05)。与阳性对照组比较,甘草次酸孵育24 h后,50μmol/L甘草次酸组的细胞增殖率显著增高、100μmol/L和200μmol/L甘草次酸组的骨肉瘤细胞的增殖率显著降低(P<0.05),甘草次酸孵育48 h后,50μmol/L组和100μmol/L组骨肉瘤细胞的增殖率显著升高,而200μmol/组显著降低(P<0.05);甘草次酸孵育24 h后,50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组的骨肉瘤细胞的凋亡率均显著降低(P<0.05);而甘草次酸孵育48 h后,50μmol/L、100μmol/L组的骨肉瘤细胞的凋亡率也显著降低,而200μmol/L组的凋亡率则显著升高。各剂量组间比较,200μmol/L甘草次酸组的效果最佳,差异有显著性(P<0.05);孵育48 h后,200μmol/L甘草次酸组的效果无论在骨肉瘤细胞的增殖率还是凋亡比例其效果均优于阳性对照组(P<0.05)。结论:甘草次酸对骨肉瘤细胞G63增殖有抑制作用,其机制可能通过影响NF-κB信号通路,达到抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的作用。 展开更多
关键词 甘草次酸 核转录因子ΚB 凋亡 骨肉瘤细胞mg63 增殖
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抗骨肉瘤细胞系MG63特异性单链抗体的制备及功能鉴定 被引量:2
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作者 谢柏臻 姚琴 +1 位作者 华强 赵慧毅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期759-763,共5页
目的从全人源噬菌体抗体库中筛选与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的单链抗体(scFv)并进行表达、纯化及鉴定。方法采用噬菌体表面展示技术,以正常人成骨细胞系hFOBl.19为阴性筛选细胞,人骨肉瘤细胞系MG63为阳性筛选细胞,经过"吸附-洗脱... 目的从全人源噬菌体抗体库中筛选与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的单链抗体(scFv)并进行表达、纯化及鉴定。方法采用噬菌体表面展示技术,以正常人成骨细胞系hFOBl.19为阴性筛选细胞,人骨肉瘤细胞系MG63为阳性筛选细胞,经过"吸附-洗脱-扩增"过程筛选并富集特异性抗体,ELISA检测并进行PCR扩增及测序鉴定。获得的阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导后经镍亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定表达、纯化效果,ELISA检测可溶性特异性单链抗体的亲和力、特异性及稳定性。MTT法检测纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。结果通过筛选、PCR扩增和序列分析确定scFv4的片段包含免疫球蛋白序列,其表达产物可与抗原结合;纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖有明显的抑制作用,且其抑瘤作用与质量浓度成正相关。未加蛋白保护剂的纯化抗体4℃下其抗体活性可保持约5周,添加蛋白保护剂的纯化抗体则可在4℃下保持6-7周。结论利用噬菌体表面展示技术成功筛选出能与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的scFv,在大肠杆菌中成功表达并获得基因序列,抗体能抑制MG63细胞的增殖且稳定性良好。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 可溶性表达 骨肉瘤细胞mg63
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BMP2对骨肉瘤细胞株MG63的作用机制 被引量:1
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作者 陈英华 李星星 周兰 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期64-67,共4页
为探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)在体外抑制人骨肉瘤细胞株MG63的增殖和迁移并促使其凋亡的作用机制,分别用绿色荧光蛋白重组腺病毒(AdGFP)、骨形态发生蛋白2重组腺病毒(AdBMP2)感染人骨肉瘤细胞MG63,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测核录因子... 为探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)在体外抑制人骨肉瘤细胞株MG63的增殖和迁移并促使其凋亡的作用机制,分别用绿色荧光蛋白重组腺病毒(AdGFP)、骨形态发生蛋白2重组腺病毒(AdBMP2)感染人骨肉瘤细胞MG63,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测核录因子κB(NF-κB)、有丝分裂素激活蛋白激酶激酶4(MKK-4)的mRNA和蛋白水平变化。结果发现,AdBMP2降低MG63中NF-κB的mRNA水平和蛋白表达,分别为对照组的38.2%和42.5%(P<0.05);但未能检测到对MKK-4表达的影响。研究表明,BMP2可以显著降低细胞中NF-κB的mRNA水平和蛋白水平,这可能是其抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白2 骨肉瘤细胞mg63 有丝分裂素激活蛋白激酶激酶4 核录因子κB
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虫草素对人骨肉瘤细胞株MG63增殖及凋亡的影响 被引量:6
5
作者 孔俊超 陈祝明 +4 位作者 吕贵何 黄帅 王朝军 赵名艳 楚佳奇 《广东医学》 CAS 2018年第4期506-510,共5页
目的研究不同浓度虫草素对人骨肉瘤细胞株MG63增殖与凋亡的影响。方法不同浓度虫草素作用于MG63细胞48 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTS法检测虫草素对MG63细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测虫草素对MG63细胞周期和凋亡的作用,Hoec... 目的研究不同浓度虫草素对人骨肉瘤细胞株MG63增殖与凋亡的影响。方法不同浓度虫草素作用于MG63细胞48 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTS法检测虫草素对MG63细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测虫草素对MG63细胞周期和凋亡的作用,Hoechst 33342染色和Western blot检测虫草素对骨肉瘤细胞凋亡的影响。结果虫草素对人骨肉瘤细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示该细胞被阻滞在S期和G_2/M期(P<0.05),同时虫草素可引起MG63细胞早期凋亡(P<0.05)。Western blot结果显示,随虫草素浓度增加,Bcl-2蛋白表达下调,而Bax蛋白表达上调,且各实验组均出现蛋白分子量为89 k D的PARP裂解条带。结论虫草素通过下调MG63细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2并上调促凋亡蛋白Bax表达,同时阻滞细胞周期进展,促进早期凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞mg63 虫草素 凋亡 BCL-2
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巴戟天含药血清对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及JNK信号通路的影响 被引量:2
6
作者 王亚非 邢姝琴 +4 位作者 尉志强 黄江海 刘洁 胡岳 李运海 《遵义医学院学报》 2018年第5期579-583,共5页
目的观察巴戟天含药血清对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响,并探讨其潜在机制。方法取4周龄SD大鼠12只,随机分4组,分别给予低、中、高三种浓度巴戟天溶液(0. 54、1. 08、2. 16 g/kg)及蒸馏水灌胃,分离血清。体外培养人骨肉瘤MG63细胞,采用... 目的观察巴戟天含药血清对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响,并探讨其潜在机制。方法取4周龄SD大鼠12只,随机分4组,分别给予低、中、高三种浓度巴戟天溶液(0. 54、1. 08、2. 16 g/kg)及蒸馏水灌胃,分离血清。体外培养人骨肉瘤MG63细胞,采用不同浓度的巴戟天含药血清干预,以空白血清为对照。采用MTT法检测巴戟天含药血清干预MG63细胞24、48 h的增殖率,流式细胞术检测凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态,Western-blotting法检测JNK信号通路相关蛋白JNK、p-JNK、Bad、p-Bad、Cleaved caspase-3的表达情况。结果中、高浓度的巴戟天含药血清能有效抑制MG63细胞增殖(P <0. 01或P <0. 05),但干预48 h对比24 h并无显著差异;同时,高浓度组MG63细胞较对照组凋亡率显著增加(P <0. 01),细胞分布散乱,胞核固缩,细胞透亮,呈现典型的凋亡形态学特征;高浓度的巴戟天含药血清能显著增加MG63细胞JNK总蛋白及磷酸化p-JNK蛋白的表达(P <0. 01或P <0. 05),上调p-Bad和Cleaved caspase-3蛋白表达(P <0. 01),但对Bad总蛋白表达无明显影响。结论巴戟天含药血清能促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡,其作用机制与激活JNK信号通路有关。 展开更多
关键词 巴戟天 骨肉瘤mg63细胞 JNK信号通路 含药血清 细胞凋亡
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不同浓度葡萄糖对人成骨肉瘤细胞株MG63活性的影响 被引量:6
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作者 程萌 陈德才 卢春燕 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期239-242,共4页
目的观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人成骨肉瘤细胞株MG63的影响,探讨糖尿病导致骨质疏松症可能的发病机制。方法采用4种不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L),培养基连续培养人成骨肉瘤细胞株MG63,观察葡萄... 目的观察不同浓度葡萄糖对体外培养的人成骨肉瘤细胞株MG63的影响,探讨糖尿病导致骨质疏松症可能的发病机制。方法采用4种不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L),培养基连续培养人成骨肉瘤细胞株MG63,观察葡萄糖对细胞增殖、分泌活性产物的能力、凋亡以及矿化能力等各个方面的影响。结果升高的葡萄糖浓度对细胞的增殖具有一定的促进作用,但增多的细胞数量并没有带来相应细胞活性的增加。相反,细胞分泌碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的能力以及矿化能力不同程度的出现了下降,且在不考虑渗透压因素情况下,细胞凋亡比率增加。结论本实验证实了高糖环境对细胞活性,特别是矿化能力的抑制作用,为临床工作中严格控制血糖防止骨质疏松症的发生提供了理论依据。 展开更多
关键词 葡萄糖 糖尿病 骨质疏松症 人成骨肉瘤细胞mg63
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siRNA下调THBS4对人骨肉瘤MG63增殖的影响 被引量:2
8
作者 谢冰颖 李生强 +2 位作者 谢丽华 陈娟 葛继荣 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1171-1174,1190,共5页
目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血小板反应蛋白4(thrombospondin 4,THBS4)基因的表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其分子机制。方法将合成的THBS4 siRNA转染到人成骨细胞株MG63,CCK-8法观察对细胞增殖的影响,荧... 目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血小板反应蛋白4(thrombospondin 4,THBS4)基因的表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其分子机制。方法将合成的THBS4 siRNA转染到人成骨细胞株MG63,CCK-8法观察对细胞增殖的影响,荧光定量PCR检测THBS4及TGF-beta1的mRNA表达,Western-blotting检测THBS4及TGF-beta1的蛋白表达。结果 Thbs4 siRNA转染后实验组48 h,72 h OD值高于阴性对照组(P<0.05),差异具有显著性;Thbs4 mRNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);Thbs4 siRNA转染后MG63细胞中TGF-beta1 mRNA及蛋白的表达水平提高(P<0.01)。结论 THBS4 siRNA转染MG63后能够促进细胞增殖,其机制可能是激活TGF-beta1信号通路。 展开更多
关键词 SIRNA 血小板反应蛋白4 骨肉瘤细胞mg63
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Bak1腺病毒表达载体的构建及对人成骨肉瘤细胞的影响 被引量:1
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作者 柴爽 黄红 +3 位作者 万雷 王吉利 王伟 黄宏兴 《广东医学》 CAS 2018年第9期1332-1336,共5页
目的构建人Bcl2拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响。方法利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER-Bak1,通... 目的构建人Bcl2拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响。方法利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER-Bak1,通过基因测序鉴定载体序列。将重组载体PmeⅠ线性化、脱磷酸化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAd-Amp的感受态BJ5183细胞中进行基因同源重组。将重组腺病毒质粒pAD-Bak1经PacⅠ酶切线性化后,用Lipofectamine 2000脂质体转染到HEK-293细胞中进行包装扩繁,荧光定量PCR法测定病毒滴度。感染MG63细胞,qPCR和Western blot检测Bak1的表达,MTT检测细胞活性。结果测序及酶切验证pENTER-Bak1构建成功。pAD-Bak1感染MG63细胞,qPCR检测到细胞中Bak1基因过表达(与NC对照组和空白对照组相比P<0.01、P<0.01),Western blot检测到细胞中Bak1蛋白过表达。MTT检测显示与NC对照组相比,细胞活性减弱(P<0.05)。结论成功构建了Bak1重组表达腺病毒,验证了其能够感染MG63细胞表达Bak1蛋白,证明了过表达Bak1可以减弱细胞的活性。为进一步研究Bak1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 人Bcl2拮抗1(Bak1)蛋白 重组腺病毒载体 人成骨肉瘤细胞mg63
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miR-490-5p靶向SP1抑制骨肉瘤的发生发展 被引量:3
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作者 余孟英 王金莲 +1 位作者 陈路 蒲劲松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期1745-1750,1755,共7页
目的:研究miR-490-5p对骨肉瘤细胞生长和运动的作用。方法:体外实验设置control组、mimic-NC组、miR-490-5p mimic组、SP1组、mimic+SP1组,通过Lipofectamine 2000将质粒分别或联合转染进入各组骨肉瘤MG63细胞,运用基因预测软件预测靶基... 目的:研究miR-490-5p对骨肉瘤细胞生长和运动的作用。方法:体外实验设置control组、mimic-NC组、miR-490-5p mimic组、SP1组、mimic+SP1组,通过Lipofectamine 2000将质粒分别或联合转染进入各组骨肉瘤MG63细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-qPCR检测miR-490-5p和SP1的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、PCNA、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移;体内实验设置Control组和miR-490-5p mimic组,分别在裸鼠右后肢腹侧皮下注射0.2 ml骨肉瘤MG63细胞和转染miR-490-5p mimic的骨肉瘤MG63细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,电子天平称肿瘤重量,Western blot检测Ki67、Bax、caspase-3、E-cadherin蛋白表达情况。结果:miR-490-5p在骨肉瘤细胞MG63中低表达,miR-490-5p与SP1在3′UTR区存在结合位点,miR-490-5p直接靶向作用于SP1,且miR-490-5p过表达抑制SP1表达;在体外,miR-490-5p过表达明显降低骨肉瘤MG63细胞生长速度,下调Ki67、PCNA和Bcl-2表达,上调Bax、caspase-3和caspase-9表达,减少侵袭细胞数目,增宽划痕,降低愈合率,上调E-cadherin表达,下调N-cadherin表达;在体内,miR-490-5p过表达减轻肿瘤重量,降低Ki67、Bax和caspase-3的表达,升高E-cadherin表达。结论:miR-490-5p靶向SP1抑制骨肉瘤细胞MG63生长和运动。 展开更多
关键词 miR-490-5p SP1 骨肉瘤细胞mg63
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β-catenin基因在人骨肉瘤MG63细胞系的表达变化
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作者 赵小军 于军 +2 位作者 赵海康 张兵 陶绍辉 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第31期6031-6034,共4页
目的:观察分析β-catenin基因在人骨肉瘤MG63细胞系的表达变化。方法:培养MG63细胞株,用不同浓度的Wnt3a蛋白或相同浓度、不同时间段的Wnt3a蛋白刺激液MG63细胞生长,用FQ-PCR在m RNA水平检测β-catenin在MG63细胞系的表达变化。培养MG6... 目的:观察分析β-catenin基因在人骨肉瘤MG63细胞系的表达变化。方法:培养MG63细胞株,用不同浓度的Wnt3a蛋白或相同浓度、不同时间段的Wnt3a蛋白刺激液MG63细胞生长,用FQ-PCR在m RNA水平检测β-catenin在MG63细胞系的表达变化。培养MG63细胞株,用相同浓度的Wnt3a蛋白刺激,比较刺激组与空白对照组的细胞数目的差别。结果:在细胞生长的第0,1天两组的MG63细胞数量对比没有统计学差异(P>0.05);而在第2,3,4天对照组细胞增殖速度较刺激组缓缓,经比较(t=4.109,3.892,5.215,均P<0.05)。β-catenin基因表达不会因为Wnt3a的浓度增加而增加。100 ng/m L的Wnt3a蛋白刺激β-catenin基因表达最高,其他几个浓度的β-catenin基因表达对比没有统计学差异(P>0.05)。在100 ng/m L的Wnt3a蛋白刺激下,β-catenin基因表达会随时间延长而增加,6 h时β-catenin基因表达最高(P<0.05),随后β-catenin基因表达则没有统计学差异(P>0.005)。结论:Wnt蛋白对MG63细胞有正向增加增殖作用。激活Wnt/β-catenin信号通路能促进MG63的细胞增殖。 展开更多
关键词 FQ-PCR 骨肉瘤mg63细胞 β-catenin基因表达 WNT3A
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汉防己碱对成骨肉瘤MG63细胞生长的作用
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作者 蒋心惠 何百成 周岐新 《光谱实验室》 CAS 2013年第5期2099-2103,共5页
采用体外细胞培养,结合流式细胞术和M T T方法研究汉防己碱对M G63细胞生长的作用特点。汉防己碱(0.33Lg/mL)对M G 63细胞仅有轻度抑制作用,细胞存活率保持在88%—97%。汉防己碱浓度依赖性轻度降低cDDP对MG63细胞的IC50;低浓度T et(0.33... 采用体外细胞培养,结合流式细胞术和M T T方法研究汉防己碱对M G63细胞生长的作用特点。汉防己碱(0.33Lg/mL)对M G 63细胞仅有轻度抑制作用,细胞存活率保持在88%—97%。汉防己碱浓度依赖性轻度降低cDDP对MG63细胞的IC50;低浓度T et(0.33Lg/mL)明显提升cDD P对M G63/cDDP细胞I C50,但0.5和1.0Lg/mL显著降低cD DP对M G 63/cDDP细胞的I C50。汉防己碱对M G 63/cDDP细胞则既可增加细胞耐药发展(0.33Lg/mL),也可逆转肿瘤细胞对cDDP的耐药性(1.0Lg/mL)。 展开更多
关键词 汉防己碱 人成骨肉瘤mg63细胞 逆转耐药性 细胞存活率
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丹参酮ⅡA与阿霉素联合应用对人骨肉瘤MG63细胞增殖体外抑制作用 被引量:3
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作者 董视师 周逸驰 +1 位作者 查圆瑜 金伟 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2015年第3期374-377,共4页
目的:研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)与阿霉素(ADM)联合应用对人骨肉瘤MG63细胞增殖的抑制作用及机理。方法:不同浓度的TanⅡA与ADM联合处理MG63细胞后,MTT比色分析法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞的凋亡率,蛋白质印记法(Western bl... 目的:研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)与阿霉素(ADM)联合应用对人骨肉瘤MG63细胞增殖的抑制作用及机理。方法:不同浓度的TanⅡA与ADM联合处理MG63细胞后,MTT比色分析法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞的凋亡率,蛋白质印记法(Western blot)检测细胞Bcl-2,Bax和Caspase-3的蛋白表达水平改变。结果:处理48hADM+低浓度TanⅡA组与ADM+高浓度TanⅡA组的抑制率分别为62.35%±1.58%、76.38%±2.01%,明显高于ADM组(32.67%±1.65%)、低浓度TanⅡA组(18.55%±0.77%)和高浓度TanⅡA组(44.25%±1.01%);流式结果显示空白对照组、ADM组、低浓度TanⅡA组、高浓度TanⅡA组、ADM+低浓度TanⅡA组、ADM+高浓度TanⅡA组48h细胞凋亡率分别为0.03%,10.24%,4.47%,13.06%,13.23%,21.36%;联合用药组Bcl-2蛋白表达明显较单一用药组下调,而Bax和Caspase-3的蛋白表达较单一用药组明显上调。结论:TanⅡA与ADM联合应用对人骨肉瘤MG63细胞有显著的抑制作用,其作用可能与干预Bcl-2,Bax和Caspase-3等癌基因表达从而诱导细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 阿霉素 骨肉瘤mg63细胞 增殖抑制
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黄芩苷对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及MMPs表达的影响 被引量:4
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作者 沈志华 郭菁菁 《中国药房》 CAS 北大核心 2016年第4期488-490,共3页
目的:研究黄芩苷对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法:以0(空白对照)、5、10、20、40、80、160、320μg/ml黄芩苷处理MG63细胞24 h后,检测细胞存活率和细胞中MMP-2、MMP-9的表达量,计算半数抑制浓度(IC50),... 目的:研究黄芩苷对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法:以0(空白对照)、5、10、20、40、80、160、320μg/ml黄芩苷处理MG63细胞24 h后,检测细胞存活率和细胞中MMP-2、MMP-9的表达量,计算半数抑制浓度(IC50),观察细胞凋亡情况。结果:与空白对照比较,黄芩苷处理MG63细胞后细胞存活率降低,凋亡细胞数量增加,细胞中MMP-2和MMP-9表达量降低,并以320μg/ml黄芩苷处理时细胞中MMP-2和MMP-9表达量下降具有统计学意义(P<0.05);IC50为(40.21±9.20)μg/ml,各作用效应均呈浓度依赖性。结论:黄芩苷可抑制MG63细胞增殖,诱导其凋亡,较高质量浓度时可抑制细胞中MMP-2、MMP-9的表达。 展开更多
关键词 黄芩苷 骨肉瘤mg63细胞 基质金属蛋白酶 细胞凋亡
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miR-499-5p调控AKT2基因对骨肉瘤MG63细胞凋亡和迁移的影响 被引量:1
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作者 宋文金 沈喜玉 +1 位作者 李季 毕岩 《大连医科大学学报》 CAS 2016年第4期326-329,333,共5页
目的探讨miR-499-5p在骨肉瘤MG63细胞中的表达及其对MG63细胞凋亡和迁移的影响。方法运用生物信息学软件Target Scan和miRanda对miR-499-5p和AKT2基因的靶向配对关系进行预测。未转染细胞设为空白对照组(control组),脂质体2000转染miR-4... 目的探讨miR-499-5p在骨肉瘤MG63细胞中的表达及其对MG63细胞凋亡和迁移的影响。方法运用生物信息学软件Target Scan和miRanda对miR-499-5p和AKT2基因的靶向配对关系进行预测。未转染细胞设为空白对照组(control组),脂质体2000转染miR-499-5p模拟物为mimics组,转染干扰AKT2基因的siRNA为siRNA组。Real-time PCR检测3组细胞中miR-499-5p和AKT2 mRNA的表达情况,western blot检测AKT2蛋白的表达情况,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测体外的迁移情况。结果Target Scan和miRanda显示miR-499-5p和AKT2基因二者靶向配对良好。Real-time PCR检测结果表明转染mimics后,AKT2 mRNA的表达量降至(45.06±8.12)%,与control组(100%)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。Western blot检测结果表明mimics组AKT2蛋白相对表达量为(0.32±0.05),与comtrol组(0.69±0.11)比较,明显降低,P<0.05。流式细胞术和细胞划痕实验结果显示mimics组MG63细胞凋亡率(18.97±2.41)%及细胞划痕愈合率(63.54±5.43)%,与control组(10.35±2.56)%和(90.35±6.81)%相比差异均有显著性意义(P<0.05)。结论 miR-499-5p能够下调骨肉瘤MG63细胞中AKT2基因的表达,促进癌细胞的凋亡以及抑制细胞的迁移。 展开更多
关键词 微小RNA 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2 骨肉瘤mg63细胞
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Establishment of nude mice model of human osteosarcoma cell MG63 with different potential of metastasis 被引量:1
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作者 Wentao Zhu Fengjin Guo +1 位作者 Tao Xu Anming Chen 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2007年第5期484-486,共3页
Objective: To establish a nude mice model of human osteosarcoma lung metastasis. Methods: The growth of human osteosarcoma cell sublines M8 and M6 was determined by MTT assay. 2 × 107 cells were injected into the... Objective: To establish a nude mice model of human osteosarcoma lung metastasis. Methods: The growth of human osteosarcoma cell sublines M8 and M6 was determined by MTT assay. 2 × 107 cells were injected into the tail vein of nude mice. Mice were sacrificed started on week 4 after injection, and lung metastases were evaluated under both mac-roscopic and microscopic observation with HE staining. Results: The growth of low-metastatic subline M6 was lower than high-metastatic sublines M8. Seventeen mice after injected M8 had occurred lung metastases while only one mice had oc-curred in M6 group. Moreover, M8 cells within metastases were arrangement disorder with variable nuclear hyperchromasia. Conclusion: A mouse model for human osteosarcoma cancer lung metastasis can be established by injection different ability of metastasis MG63 cells into tail vein. 展开更多
关键词 OSTEOSARCOMA POTENTIAL lung metastasis
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西黄丸对骨肉瘤细胞生长的抑制作用及其机制研究 被引量:5
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作者 朱新华 黄春兰 +2 位作者 叶慧文 林文平 范军朝 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期433-436,共4页
目的探讨西黄丸通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制人骨肉瘤MG63细胞生长及其可能的作用机制。方法体外培养人骨肉瘤MG63细胞,用不同浓度的西黄丸作用于骨肉瘤MG63细胞,将细胞分为4组:空白对照组(不加药)和低、中、高... 目的探讨西黄丸通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制人骨肉瘤MG63细胞生长及其可能的作用机制。方法体外培养人骨肉瘤MG63细胞,用不同浓度的西黄丸作用于骨肉瘤MG63细胞,将细胞分为4组:空白对照组(不加药)和低、中、高3个剂量(西黄丸:5,15,30μg·m L^-1)实验组,各组分别处理24 h。用噻唑蓝比色法检测MG63细胞的增殖能力(OD值),用黏附实验检测细胞黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移;以免疫印迹法检测磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白表达量。结果在24 h,空白对照组和低、中、高3个剂量实验组的增殖能力分别为0.48±0.04,0.39±0.03,0.31±0.02和0.26±0.02;这4组的细胞黏附率分别为(89.34±6.31)%,(65.40±5.08)%,(44.65±4.65)%和(30.20±3.06);这4组的迁移细胞数分别为230.44±19.36,185.34±18.57,148.62±15.06和91.22±10.25;这4组的细胞凋亡率分别为(1.33±0.21)%,(8.22±0.69)%,(17.64±1.18)%和(28.48±2.73)%;这4组的p-p38MAPK蛋白的相对表达量分别为0.96±0.08,0.70±0.07,0.43±0.04和0.19±0.02,低、中、高剂量3个实验组与空白对照组相比,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05),且呈剂量依赖性。结论西黄丸能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖、黏附和迁移能力,诱导细胞凋亡,该过程可能通过调控p38MAPK信号通路实现的。 展开更多
关键词 西黄丸 P38丝裂原活化蛋白激酶 骨肉瘤mg63细胞 增殖 凋亡
原文传递
Bcl2过表达重组腺病毒的构建及鉴定
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作者 黄红 王吉利 +2 位作者 柴爽 万雷 黄宏兴 《贵州医药》 CAS 2018年第8期909-912,共4页
目的构建人B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)过表达载体p ENTER-Bcl2,检测其在人成骨肉瘤细胞中的表达及对细胞活性的影响。方法利用q PCR扩增Bcl2全长c DNA,构建表达载体p ENTER-Bcl2,经测序证实后将其转染至人成骨肉瘤细胞(MG63)中,利用q PCR和We... 目的构建人B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)过表达载体p ENTER-Bcl2,检测其在人成骨肉瘤细胞中的表达及对细胞活性的影响。方法利用q PCR扩增Bcl2全长c DNA,构建表达载体p ENTER-Bcl2,经测序证实后将其转染至人成骨肉瘤细胞(MG63)中,利用q PCR和Western blot方法检测Bcl2的表达,利用MTT检测细胞活性。结果DNA测序结果显示构建的p ENTER-Bcl2载体表达与实验设计相符;Ad-Bcl2组Bcl2 mRNA表达较NC对照组和空白对照组高(P均<0.01);Ad-Bcl2组Bcl2蛋白表达较NC对照组和空白对照组高(P<0.05,P<0.01);与NC对照组比较,Ad-Bcl2感染细胞活性增强(P<0.05)。结论构建的p ENTER-Bcl2能在MG63细胞中过表达Bcl2;AdBcl2可以提高细胞的活性,这为研究Bcl-2在骨质疏松发生时的分子生物学机制奠定了基础。 展开更多
关键词 过表达人B细胞淋巴瘤-2载体 人成骨肉瘤细胞mg63 构建
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