RNA干扰下调MBP-1对骨肉瘤Saos-2细胞生物学的影响

目的探讨c-myc启动子结合蛋白1(MBP-1)基因沉默对人骨肉瘤Saos-2细胞生长的影响。方法实验分为3组:正常对照组(未转染骨肉瘤细胞)、阴性对照组(转染错义序列组)和沉默组(转染MBP-1 sh RNA组)。设计2条MBP-1基因的RNA干扰片段及1条阴性对照si RNA,并与p SIREN-retro Q质粒连接。将重组p SIREN-retro Q质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染骨肉瘤Saos-2细胞。实时PCR和Western blot分别检测MBP-1表达。CCK-8法对MBP-1沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长进行检测。Western blot检测对照组和沉默组cyclin D1和cyclin E的表达。结果通过PCR扩增及测序,说明已成功构建MBP-1沉默及对照重组p SIREN-retro Q质粒。实时PCR结果显示,沉默组MBP-1 m RNA相对表达量与对照组相比显著下调(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默组MBP-1蛋白表达量与对照组相比也显著下调。CCK-8法结果表明,沉默组细胞在48、72和96 h时增殖能力均比对照组显著升高(P<0.05)。沉默组cyclin D1和cyclin E的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 MBP-1基因沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长被明显促进,为寻找骨肉瘤基因治疗新靶点打下基础。

银杏内脂B对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用研究

目的探讨银杏内脂B(GB)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响以及潜在机制。方法将人骨肉瘤Saos-2细胞分别在含300、600和1200μmol/L GB的培养液中培养24、48和72 h,采用CCK-8法检测Saos-2细胞的增殖情况,流式细胞仪检测Saos-2细胞凋亡率,Transwell小室迁移与侵袭实验检测GB对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响;提取GB处理后Saos-2细胞的mRNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9的基因及蛋白表达水平,Western blotting法检测Erk和Akt磷酸化及cleaved-caspase-3水平。结果 GB能明显抑制Saos-2细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性,600和1200μmol/L GB可诱导Saos-2细胞凋亡,GB对Saos-2细胞的迁移及侵袭的抑制作用呈浓度依赖性;GB可升高Bax mRNA和蛋白水平,但降低Bcl-2、MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白水平;高浓度GB能抑制Erk和Akt的磷酸化且升高cleaved-caspase-3水平。结论 GB具有抑制Saos-2细胞增殖及迁移侵袭和诱导细胞凋亡作用,其机制可能与抑制Erk和Akt磷酸化有关。

苦参碱通过下调STAT3信号通路抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖的实验研究

目的观察苦参碱对成人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的调节作用及其与STAT3活化水平的联系。方法将成人骨肉瘤Saos-2细胞分为对照组(Control组)、低剂量苦参碱干预组(MAT-L干预组)及高剂量苦参碱干预组(MATH干预组)3组。使用MTT法对不同时间点(0、24和48h)各组Saos-2细胞活性进行检测;使用qPCR对干预24小时后Saos-2细胞的survivin mRNA水平进行分析,使用western blot法对干预24小时后Saos-2细胞STAT3的活化水平及survivin蛋白表达水平进行分析。结果与对照组相比,给予苦参碱干预的Saos-2细胞活性呈时间依赖性和浓度依赖性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);给予Saos-2细胞不同浓度的苦参碱干预24小时后,survivin mRNA和蛋白的表达水平及STAT3的活化水平呈浓度依赖性降低,差异均有显著统计学意义(均P<0.05)。结论苦参碱可以通过下调STAT3的活化抑制成人骨肉瘤Saos-2细胞survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖。该研究为苦参碱应用于骨肉瘤及其他恶性肿瘤的临床治疗提供了实验基础。

Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用

目的 :初步研究 Smac在 TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤 Saos- 2细胞凋亡中的作用。 方法 :观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析 TRAIL 作用的 Saos- 2细胞 DNA片段 ,利用流式细胞术及细胞计数法比较 Smac或 Bcl- 2表达不同的细胞的凋亡程度 ,同时以 Western印迹半定量检测细胞胞质内Sm ac表达水平。结果 :Saos- 2细胞在 TRAIL 的作用下出现典型的凋亡样改变。在 TRAIL 作用 Saos- 2细胞时 ,Smac在胞质中的含量明显增加。在 TRAIL 作用 2 4 h后 ,Smac在 Saos- 2细胞中过表达 ,细胞凋亡率由 1 2 .7%增加到 31 .4 %。TRAIL 作用 Saos- 2细胞 4 8h后 ,转染 Bcl- 2的细胞与转染空载体的 Saos- 2细胞相比 ,凋亡率显著降低 (由 2 4 %降至 1 5 % ) ,且胞质中Sm ac的表达水平也明显降低。 结论 :在 TRAIL 诱导的凋亡中 Sm ac起促进作用 ,Bcl- 2可以通过阻止 Sm

三氧化二砷对VEGF诱导人骨肉瘤SaOS-2细胞TRAF-2和STAT-6表达的影响

目的通过观察三氧化二砷(As2O3)对血管内皮生长因子(VEGF)诱导人骨肉瘤Sa OS-2细胞肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF-2)和信号转导子与转录激活子(STAT-6)表达的影响,探讨As2O3治疗骨肉瘤的作用机制。方法分别采用CCK8法、实时荧光定量PCR法和流式细胞术测定细胞生长抑制率、TRAF2和STAT-6的表达。结果 2μmol/L的As2O3对Sa OS-2细胞的生长抑制率达57%(0.57±0.03比0)(P<0.01),使VEGF诱导作用显著降低(0.42±0.02)(P<0.05),TRAF-2及STAT-6的表达也显著下降(分别为:149.00±7.21比167.33±8.02;1.29±0.12比2.53±0.67)(P均<0.05)。结论 As2O3可能通过TRAF-2和STAT-6途径对Sa OS-2细胞的生长呈剂量相关的抑制作用。

不同官能团对骨肉瘤Saos-2细胞生物学特性的影响

目的肿瘤假体置换是目前治疗骨肉瘤的常用手段,功能化假体的设计和应用是目前研究的热点方向。肿瘤细胞周围微环境对肿瘤的增殖、活力和凋亡等行为起重要作用。探讨不同的官能团对细胞生物学特性影响。方法通过自组装技术在金片表面接枝不同的化学基团(-CH_3、-COOH、-NH_2、-OH),测定接触角和X线光电子谱确定其表征,采用早期扫描电镜、DAPI、CCK-8法、死/活细胞染色、流式细胞检测仪等方法观察不同官能团对骨肉瘤Saos-2细胞的黏附、增殖、活力、凋亡的影响。结果 -CH_3、-NH_2、-OH、-COOH基团的表面接触角分别为(103.0±10.1)°、(58.5±5.7)°、(13.5±0.5)°和(19.1±2.8)°。电镜下可见骨肉瘤Saos-2细胞在含有-NH_2和-COOH基团的材料表面伸展较大,细胞贴壁展开,形态不规则,大多呈梭形和盘状,细胞间突起相互连接紧密;细胞在含有-OH基团的材料表面铺展面积相对较小,细胞形态基本正常,而含有-CH3基团的材料表面细胞的黏附数量明显较少,不同的官能团对Saos-2细胞黏附、增殖率影响的顺序从大到小依次为-COOH≥-NH_2>-OH■-CH_3;而对Saos-2细胞凋亡率和毒性的顺序-CH_3■-OH>-NH_2>-COOH;不同的官能团对细胞凋亡的影响从大到小依次为-CH_3(19.1%)■-OH(7.2%)>-NH_2(4.3%)>-COOH(2.9%)。结论含有-CH_3基团的材料不利于细胞的黏附和增殖,并对细胞的凋亡有一定的促进作用。

骨肉瘤Saos-2细胞Set7/9基因沉默及基因治疗靶点构建

目的:构建沉默的人Set7/9的真核表达载体,筛选其稳定转染的骨肉瘤Saos-2细胞株,评价干扰效果以及对骨肉瘤相关基因表达和细胞增殖的影响,为临床骨肉瘤基因治疗提供新靶点。方法:依据靶向序列,构建人Set7/9基因的sh RNA和对照载体,稳定转染骨肉瘤细胞Saos-2。应用Real-time PCR以及Western-blot方法检测其基因和蛋白质水平,确定该基因的沉默情况。结果:构建载体Set7/9-sh RNA,Real-time PCR和Western-blot结果显示,沉默后Set7/9基因和蛋白表达明显被抑制,而与其相关的Sirt1、Suv39h1蛋白表达水平提高,细胞增殖率增加。结论:沉默Set7/9基因后,上调与其相关的Sirt1和Suv39h1蛋白表达水平,Set7/9基因在骨肉瘤Saos-2细胞系中可能调控其的表达。此外,细胞增殖效率增加表明Set7/9具有抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖的作用。

原花青素对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的影响及机制研究

目的研究原花青素体外对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养人骨肉瘤Saos-2细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;PI染色法检测细胞凋亡率;ELISA法检测Caspase-9、Caspase-12、Survivin含量;Bradford法检测SOD、M DA含量。结果 PC在48 h和72 h对Saos-2细胞的体外增殖均具有抑制作用,并具有浓度和时间依赖性;40、80、160μg/m L浓度的PC均诱导Saos-2细胞凋亡;促进Caspase-9和Caspase-12蛋白表达,抑制Survivin蛋白表达;增加细胞内SOD的活性,降低M DA的含量。结论 PC可抑制Saos-2细胞的增殖,可能与其增加机体的抗氧化功能及启动死亡受体通路、内质网通路、线粒体通路这三条途径诱导细胞凋亡有关。

ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性

目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞 ,以Saos -2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞 ,进行体外杀伤实验 ,比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为 3 0∶1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。

COX-2抑制剂对人骨肉瘤SaoS-2细胞VEGF和bFGF表达的影响

目的探讨COX-2抑制剂celecoxib对人骨肉瘤SaoS-2细胞株VEGF和bFGF表达的影响。方法间接免疫荧光流式细胞术和Western Blot法检测细胞COX-2、VEGF、bFGF的表达状况。结果COX-2抑制剂celecoxib呈浓度依赖性地抑制人骨肉瘤SaoS-2细胞株COX-2、VEGF、bFGF的表达。结论抑制COX-2的表达及由此引起的VEGF和bFGF蛋白表达降低,在COX-2抑制剂抗骨肉瘤的机制中可能具有一定作用。

中低温度热疗对人骨肉瘤SaoS-2细胞VEGF表达和分泌的影响

目的:探讨中低温度热疗对人骨肉瘤SaoS-2细胞株VEGF蛋白表达和分泌的影响。方法:经43℃中低温作用过后的SaoS-2细胞分别提取其全细胞蛋白和收集其培养上清,再使用Westem Blot方法和ELISA方法分别检测SaoS-2细胞表达和分泌VEGF蛋白的状况。结果:43℃加热可以抑制人骨肉瘤SaoS-2细胞表达和分泌VEGF,并且其抑制效应随着加热时间的延长而逐渐增强。结论:中低温度引起的VEGF表达和分泌的降低,在中低温度热疗的抗肿瘤机制中可能发挥了一定的作用。

三氧化二砷、VEGF对人骨肉瘤Saos-2细胞TRAF-2和STAT-6表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF-2)和信号转导子与转录激活子6(STAT-6)在骨肉瘤发病机制中的作用,及三氧化二砷(As2O3)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对其表达的影响。方法:人骨肉瘤Saos-2细胞经分别加入As2O3和VEGF培养48 h后,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术测定TRAF2和STAT-6的表达。结果:100 ng/m L浓度的VEGF能显著上调TRAF-2及STAT-6的表达(P<0.05,P<0.01);2μmol/L以上的As2O3能显著下调TRAF-2及STAT-6的表达(P<0.05,P<0.01),它还能显著降低VEGF诱导作用(P<0.05,P<0.01)。结论:TRAF-2和STAT-6在骨肉瘤的发病机制中可能起了重要作用,VEGF具有促进疾病的进展作用,而As2O3则反之,两者具有一定的量-效关系。

自组装脂质体纳米载体对骨肉瘤细胞Saos-2靶向递送及凋亡的影响

目的以天然脂肪酸月桂酸和硬脂酸为骨架,利用它们在二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)中的自组装构建了一种脂质体纳米载体并负载阿霉素,对其靶向人骨肉瘤细胞Saos-2及凋亡情况进行考察.方法采用自组装制备了负载阿霉素的脂质体纳米载体,采用激光共聚焦考察了其靶向人骨肉瘤细胞Saos-2能力,采用Annexin V-FITC染色技术考察了脂质体纳米载体对人骨肉瘤细胞Saos-2凋亡的影响.结果自组装脂质体纳米载体与人骨肉瘤细胞Saos-2孵育48h时,荧光强度最高,绿色荧光的自组装脂质体纳米载体会围绕在骨肉瘤细胞Saos-2周围,相对于同剂量DMF的对照组,自组装脂质体纳米载体组的细胞无论是早期凋亡还是晚期凋亡的比例均有所增加.结论负载阿霉素的脂质体纳米载体能准确地靶向人骨肉瘤细胞Saos-2,并加速人骨肉瘤细胞Saos-2的凋亡.

雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。

PLK2协同p21影响骨肉瘤细胞增殖的作用机制

目的通过实验研究PLK2协同p21影响骨肉瘤疾病发生发展的潜在作用机制。方法从GEO数据库获取骨肉瘤组织与正常组织的lncRNA差异化表达;准备HEK293T细胞和U2OS、Sao-2人骨肉瘤细胞系进行培养,利用siRNA技术在U2OS细胞系中抑制PLK2的表达并实施敲低试验,从U2OS细胞中分离细胞总RNA进行实时定量聚合酶链反应,对U2OS细胞系实施免疫印迹(IB)和免疫沉淀(IP)分析,再对其进行EdU实验和细胞活力测定,最后使用SPSS 17.0版本进行统计学分析,将癌组织与癌旁正常组织进行比较。结果与正常组织相比,PLK2在骨肉瘤组织中表达更低;在构建的两种敲低PLK2的小干扰RNA和携带PLK2的重组质粒转染到U2OS细胞实验中,PLK2敲除后发现U2OS细胞的增殖能力增强,而PLK2过表达则相反。在U2OS细胞中检测PLK2和p21的体内相互作用,发现p21的蛋白水平与PLK2的蛋白水平变化一致且差异具有统计学意义。结论PLK2参与了抑制骨肉瘤细胞增殖的过程,可能是通过与p21相互作用而发生的。

氧化苦参碱通过COX-2/PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬对MG63骨肉瘤细胞的促凋亡机制

目的基于环氧合酶2(COX-2)/PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白2(Parkin)信号通路介导的线粒体自噬研究氧化苦参碱对人骨肉瘤MG63细胞的促凋亡机制。方法取MG63细胞经2.0、4.0、8.0 mg/mL的氧化苦参碱和6μmol/L的5-氟尿嘧啶(5-FU)作用后,检测细胞凋亡率、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平、线粒体膜电位降低比例、线粒体自噬水平以及PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平。采用PINK1小干扰RNA(PINK1 siRNA)干扰PINK1的表达,将细胞分为对照组、PINK1 siRNA组、氧化苦参碱组、PINK1 siRNA+氧化苦参碱组,检测细胞中PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平和线粒体膜电位降低比例以及细胞凋亡率。采用慢病毒感染使COX-2过表达,将细胞分为对照组、氧化苦参碱组、COX-2组、COX-2+氧化苦参碱组,检测细胞中COX-2、PINK1和Parkin蛋白表达水平以及线粒体膜电位降低比例。结果经氧化苦参碱干预后,细胞凋亡率,Bax、PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平,线粒体自噬水平和线粒体膜电位降低比例均显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与氧化苦参碱组比较,PINK1 siRNA+氧化苦参碱组细胞中PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平和细胞凋亡率以及线粒体膜电位降低比例均显著降低(P<0.05)。与氧化苦参碱组比较,COX-2+氧化苦参碱组细胞中COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白表达水平和线粒体膜电位降低比例均显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可通过抑制COX-2表达,介导线粒体自噬信号通路PINK1/Parkin的过度活化,从而促进骨肉瘤细胞凋亡。

胡桃醌通过Caspase-3/GSDME信号通路诱导骨肉瘤细胞焦亡

目的探讨胡桃醌诱发焦孔素E(Gasdermin E,GSDME)依赖性细胞焦亡对骨肉瘤细胞(U2OS细胞)增殖的影响及相关机制。方法体外培养U2OS细胞,用CCK-8法检测不同浓度胡桃醌处理24 h后对细胞存活率的影响,倒置显微镜观察胡桃醌处理后U2OS细胞形态的变化,流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞的LDH释放量,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Parp1)以及GSDME、GSDME-N、caspase-3、cleave-Caspase-3相关蛋白水平变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测细胞因子白介素IL-1β和IL-18。结果与对照组相比,不同浓度胡桃醌明显抑制细胞增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为19.4μmol/L;倒置显微镜下观察到胡桃醌处理后的细胞出现肿胀、吐泡现象;诱导U2OS细胞线粒体膜电位降低,并使LDH释放增加(P<0.05,P<0.01);ELISA实验表明胡桃醌可以上调IL-1β和IL-18的表达水平;Western blot实验结果显示,胡桃醌能明显上调Bax和Parp、cleave-Caspase-3、GSDME-N的表达,降低BCL-2的表达。结论胡桃醌可抑制骨肉瘤细胞增殖,其机理可能是通过激活Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导细胞焦亡发挥作用。

人骨髓核分化抗原对人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡和增殖的影响

[目的]探讨人骨髓核分化抗原(MNDA)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法定量测定Saos-2细胞中MNDA的mRNA表达差异。将MNDA基因转染Saos-2细胞,应用MTT法测定转染后的肿瘤细胞增殖,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度,没有转染质粒的和转染空质粒的做为对照组。[结果]MNDA的mRNA在骨肉瘤Saos-2细胞中表达明显降低。转染MNDA后人骨肉瘤Saos-2细胞的凋亡程度高于对照组,增殖率低于对照组。[结论]转染MNDA可诱导人骨肉瘤Saos-2细胞发生凋亡,抑制骨肉瘤细胞的增殖率。

松乳菇多糖对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:研究松乳菇多糖体外对人骨肉瘤Saos-2细胞生长、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养Saos-2细胞,将不同浓度的松乳菇多糖作用于细胞,MTT法检测不同时间点和不同浓度的松乳菇多糖对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白和核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路蛋白的表达。结果:松乳菇多糖以时间和浓度依赖性抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,促进人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞侵袭和迁移,抑制人骨肉瘤Saos-2细胞COX-2、NF-κB和NF-κB p65蛋白的表达。结论:松乳菇多糖可抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的生长,降低其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与阻滞NF-κB信号通路和下调COX-2蛋白表达有关。

甲状旁腺素对人成骨肉瘤细胞株SaOS-2内cAMP,IP3,Ca^(2+)的作用研究

目的通过研究ｈＰＴＨ（１～３４）对人成骨肉瘤细胞株ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ、ＩＰ３、Ｃａ２＋的影响，来阐明ＰＴＨ与其膜上特异受体结合后的胞浆内主要信息传递途径。方法利用蛋白竞争结合法测定胞浆内ｃＡＭＰ，以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为荧光指示剂，激光共聚焦显微系统显示ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，离子交换层析法测定ｈＰＴＨ（１～３４）作用下胞浆内ＩＰ３的改变。结果ｈＰＴＨ（１～３４）可使ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ明显升高且与其浓度呈正相关，其最佳作用时间为１０ｍｉｎ。ｈＰＴＨ（１～３４）能迅速提高ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ，而且作用３０ｓ时ＳａＯＳ－２胞浆内ＩＰ３升高即达最高峰，未发现百日咳毒素对此现象有抑制作用。