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人与恒河猴下颌骨骨膜干细胞的分离、鉴定和跨物种单细胞分析
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作者 王子硕 李阳阳 +2 位作者 王海涛 邹多宏 张志愿 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期696-705,共10页
目的探究人与非人灵长类动物(恒河猴)的下颌骨骨膜中是否存在有别于传统间充质干细胞的干细胞群体及其在膜内成骨过程中的特性,并提供区别于其他解剖区域骨膜干细胞(PSCs)的下颌骨PSCs的稳定分离、培养、扩增的标准化流程。方法分别从... 目的探究人与非人灵长类动物(恒河猴)的下颌骨骨膜中是否存在有别于传统间充质干细胞的干细胞群体及其在膜内成骨过程中的特性,并提供区别于其他解剖区域骨膜干细胞(PSCs)的下颌骨PSCs的稳定分离、培养、扩增的标准化流程。方法分别从上海交通大学医学院附属第九人民医院的18~24岁行第三磨牙拔除术3例患者翻瓣去骨过程中的骨块表面和3只6岁龄恒河猴下颌骨的前磨牙区颊侧获取骨膜,使用Illumina平台Novaseq 6000测序仪进行单细胞测序,并通过同源基因匹配进行跨物种单细胞转录组测序的结果比较。使用37℃和低温两种消化方式从原代组织中分离PSCs,经流式细胞术分析鉴定其表面标志物(CD200、CD31、CD45和CD90)并通过免疫荧光鉴定组织蛋白酶K(CTSK)与CD200的共定位情况。接着评估了体外扩增至第三代的不同物种PSCs的细胞增殖能力和三系分化能力。最后比较了PSCs和骨髓间充质干细胞(BMSCs)在成骨方面的特性异同。结果单细胞测序结果提示直系同源基因匹配降维后获得了18个聚类的细胞群,基于各细胞标志物数据库对各聚类进行细胞注释。低温消化方案可以稳定地从人、恒河猴下颌骨骨膜中分离出PSCs,细胞呈成纤维细胞状。细胞计数法结果显示人与恒河猴的PSCs增殖能力差异无统计学意义,流式细胞术分析鉴定结果显示,从骨膜分离的细胞表面抗原表达CD200^(+)、CD31^(-)、CD45^(-)和CD90^(-),免疫荧光提示CTSK与CD200共定位于此细胞中。茜素红染色、油红O染色和阿尔率蓝染色结果显示,人和恒河猴的PSCs均具备成骨、成脂、成软骨的三系分化能力。与BMSCs的成骨能力相比,PSCs增殖能力略优,分化过程中,PSCs在早期有良好的成骨表现。结论本研究成功稳定分离并鉴定出人和非人灵长类动物(恒河猴)的正常下颌骨PSCs,为探索下颌骨膜内成骨的机制、建立理想的非人灵长类动物模型以及下颌骨缺损修复新型策略提供了细胞学基础。 展开更多
关键词 灵长目 下颌骨 骨膜干细胞 成骨分化 膜内成骨 细胞测序 跨物种分析
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FGF-2/PELA/BMP-2微囊支架促进大鼠骨膜来源干细胞的成骨分化 被引量:6
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作者 殷杰 邱素均 +2 位作者 高浚淮 赵胜利 闵少雄 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期68-74,共7页
目的观察成纤维细胞生长因子-2/聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸/骨形态发生蛋白-2(FGF-2/PELA/BMP-2)微囊支架对SD大鼠骨膜来源干细胞成骨分化作用。方法提取SD大鼠骨膜来源干细胞(PDSC),进行流式细胞学表面标记物鉴定及成骨、成软骨、成脂三... 目的观察成纤维细胞生长因子-2/聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸/骨形态发生蛋白-2(FGF-2/PELA/BMP-2)微囊支架对SD大鼠骨膜来源干细胞成骨分化作用。方法提取SD大鼠骨膜来源干细胞(PDSC),进行流式细胞学表面标记物鉴定及成骨、成软骨、成脂三系诱导并进行茜素红、甲苯胺蓝、阿利新蓝、油红O染色及免疫荧光实验。制备FGF-2/PELA/BMP-2、FGF-2/PELA、PELA/BMP-2、PELA四组材料,进行扫描电镜(SEM)观察微囊表面,通过ELISA实验制作两因子的控释曲线。将4组材料浸提液与第3代骨膜来源干细胞进行共培养,分别在7、14 d进行碱性磷酸酶(AKP)活性检测,分别在7、14、21 d进行q RT-PCR成骨基因表达检测,观察比较各组PDSC成骨分化能力,数据汇总后进行统计学分析。结果流式细胞学表面标记物鉴定显示PDSC表达间充质干细胞表面标记物,三系诱导分化染色结果表面PDSC具有成骨、成软骨、成脂等多向分化能力。AKP活性结果显示,FGF-2/PELA/BMP-2组在PDSC培养的7 d及14 d,AKP活性最高,差异显著。FGF-2/PELA/BMP-2组的q RT-PCR结果提示Run X-2、OCN表达量均高于其他组,且在第14天Run X-2表达量达到顶峰,OCN呈持续增长趋势。结论 FGF-2/PELA/BMP-2仿生控释微囊支架中的细胞因子活性得以保留,并相对其他实验组具有更高的促进PDSC成骨分化的能力。 展开更多
关键词 骨膜来源干细胞 成纤维细胞生长因子-2 骨形态发生蛋白-2 FIBROBLAST growth factor-2 bone morphogenetic protein 2
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骨膜来源干细胞在骨折修复中的研究进展
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作者 谭奇超 庞河 +2 位作者 彭鑫 彭中华 魏波 《医师在线》 2022年第5期46-48,共3页
骨膜是一种广泛附着于骨皮质表面的特殊结缔组织。骨膜中富含大量多能干细胞,这些骨膜来源的干细胞拥有较高的细胞增殖活性及成骨分化潜能,并且能通过分泌大量细胞因子促进骨痂形成和血管形成从而加速骨折愈合。本文查阅了近年来关于骨... 骨膜是一种广泛附着于骨皮质表面的特殊结缔组织。骨膜中富含大量多能干细胞,这些骨膜来源的干细胞拥有较高的细胞增殖活性及成骨分化潜能,并且能通过分泌大量细胞因子促进骨痂形成和血管形成从而加速骨折愈合。本文查阅了近年来关于骨膜来源干细胞的提取和鉴定、成骨潜能、促血管形成及组织工程应用方面的进展,希望为骨膜来源干细胞促进骨修复/骨重建的临床应用提供参考。 展开更多
关键词 骨膜 骨膜来源干细胞 骨折修复与重建
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抑制EGFR信号通路对骨折愈合早期骨内、外膜来源干细胞增殖、分化能力影响的研究 被引量:2
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作者 王华松 兰生辉 +4 位作者 庞炯宇 丰瑞兵 杨晨曦 袁功武 曾文波 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2020年第6期5-8,14,共5页
目的探索抑制表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对骨折愈合早期骨内、外膜来源SCs增殖、分化能力的影响。方法将建立右股骨骨折模型成功的42只SD大鼠按随机数字表分为实验组与对照组,实验组给予Gefitinib 100 mg/(kg·d)(溶于0.5%甲... 目的探索抑制表皮生长因子受体(EGFR)信号通路对骨折愈合早期骨内、外膜来源SCs增殖、分化能力的影响。方法将建立右股骨骨折模型成功的42只SD大鼠按随机数字表分为实验组与对照组,实验组给予Gefitinib 100 mg/(kg·d)(溶于0.5%甲基纤维素)灌胃,对照组给予等量0.5%甲基纤维素灌胃。术后1周提取右股骨骨内、外膜区域的SCs并进行体外培养。通过流式细胞术鉴定第3代干细胞表面标志物FITC-CD29、FITCCD34、FITC-CD45、FITC-CD90;BrdU法检测各组干细胞增殖能力;成骨诱导及成软骨诱导分化后行von Kossa染色及阿尔新蓝染色,检测干细胞的分化能力。结果各组SCs表面标志物FITC-CD29、FITC-CD90呈高表达,FITC-CD34、FITC-CD45呈低表达;BrdU法检测发现实验组骨内、外膜SCs增殖能力较对照组显著降低(P<0.01);成骨诱导分化并染色后,实验组骨内、外膜SCs的矿化结节较对照组更多,成软骨诱导分化并染色后,实验组SCs的淡蓝色颗粒较对照组更多。结论在骨折愈合早期,抑制EGFR信号通路能抑制骨内、外膜来源SCs的增殖,促进其成骨、成软骨的分化。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 信号通路 骨膜干细胞
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骨膜间质干细胞移植时机的实验和临床研究 被引量:3
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作者 徐栋梁 李佛保 +3 位作者 符气祯 黄纲 杨忠汉 韩士英 《中华显微外科杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期116-118,共3页
目的 研究骨膜间质干细胞异体移植时机。 方法 根据骨缺损内纤维组织生长时间的不同 ,将从大鼠骨膜分离培养的细胞分别分批植入 ,在植入的第 2、3、4和 8周时动态观察其成骨量 ,即骨小梁体积比 ;另将幼儿骨膜间质干细胞悬液 ,移植于 ... 目的 研究骨膜间质干细胞异体移植时机。 方法 根据骨缺损内纤维组织生长时间的不同 ,将从大鼠骨膜分离培养的细胞分别分批植入 ,在植入的第 2、3、4和 8周时动态观察其成骨量 ,即骨小梁体积比 ;另将幼儿骨膜间质干细胞悬液 ,移植于 2 6例长管状骨干骨折 2周后的缺损内 ,观察骨折临床愈合的时间。 结果 大鼠骨缺损后 2周以内移植干细胞其骨小梁体积比大 ,愈合快 ,2周以后与对照组比无显著差异 ;临床应用 9个月内病人骨折缺损愈合 15例 ( 5 7 7% ) ,骨不愈合者 11例( 4 2 3 % )。 结论 大鼠骨缺损 2周以内移植干细胞其疗效好 ,大鼠实验和临床上骨缺损 2周以后移植骨膜间质干细胞不能明显促进骨缺损愈合。 展开更多
关键词 骨缺损 骨膜间质干细胞移植 骨组织工程化材料 骨小梁体积比 动物实验
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骨膜及骨膜源干细胞在骨修复/再生中的研究进展 被引量:4
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作者 褚文辉 刘振 李春义 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2018年第4期336-341,共6页
骨膜是附着在骨质上的一层特殊结缔组织,不仅包含了骨质修复所需的间充质细胞,即骨膜源干细胞(PDSCs),而且提供了PDSCs所需的微环境以及必要的生物力学支撑.骨膜在骨组织修复中起着至关重要的作用,临床上骨膜移植已广泛应用于骨质修复... 骨膜是附着在骨质上的一层特殊结缔组织,不仅包含了骨质修复所需的间充质细胞,即骨膜源干细胞(PDSCs),而且提供了PDSCs所需的微环境以及必要的生物力学支撑.骨膜在骨组织修复中起着至关重要的作用,临床上骨膜移植已广泛应用于骨质修复,是再生医学的重要研究领域.对骨膜的结构以及PDSCs的生物学特征进行了综述,概述两者在骨修复中的研究进展,探讨了PDSCs参与骨修复所涉及的相关信号通路.骨膜和PDSCs除了在骨修复中起着决定性作用外,还是影响骨质再生的重要因素之一.对比了PDSCs在人/小鼠断肢愈伤、蝾螈割处再生以及鹿茸完全再生过程中增殖及分化潜能的差异,发现PDSCs增殖潜能以及丰富的血液供给可能是决定骨质再生的关键因素. 展开更多
关键词 骨膜 骨膜来源干细胞 骨质修复 骨质再生
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Application of modified polyethylene glycol hydrogels in the construction of tissue engineered heart valve
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作者 OUYANG Hui ZHAO Rong +8 位作者 ZHANG Jin-bao LIU Yang ZHENG Qi-jun YANG Jian GU Chun-hu WEI Xu-feng CHEN Chang-sheng Yi Ding-hua LIU Wei-yong 《Journal of Life Sciences》 2008年第5期1-9,共9页
To enhance the adhesion of seeding-cells to the biomaterial scaffolds, the PEG-hydrogels were modified. Porcine aortic valves were decellularized with Triton X-100 and trypsin. The cells were encapsulated into the PEG... To enhance the adhesion of seeding-cells to the biomaterial scaffolds, the PEG-hydrogels were modified. Porcine aortic valves were decellularized with Triton X-100 and trypsin. The cells were encapsulated into the PEG-hydrogels to complete the process of the cells attaching to the acellular porcine aortic valves. Herein, the autologous mesenchymal stem cells (MSCs) of goats were selected as the seeding-cells and the tendency of MSCs toward differentiation was observed when the single semilunar TEHV had been implanted into their abdominal aortas. Furthermore, VEGF, TGF-β1, and the cell adhesive peptide motif RGD were incorporated. Light and electron microscopy observations were performed. Analysis of modified PEG-hydrogels TEHV's (PEG-TEHV) tensile strength, and the ratio of reendothelial and mural thrombosis revealed much better improvement than the naked acellular porcine aortic valve (NAPAV). The data illustrated the critical importance of MSC differentiation into endothelial and myofibroblast for remodeling into native tissue. Our results indicate that it is feasible to reconstruct TEHV efficiently by combining modified PEG-hydrogels with acellular biomaterial scaffold andautologous MSCs cells. 展开更多
关键词 tissue engineering BIOMATERIALS DECELLULARIZATION polyethylene glycol hydrogel heart valves
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