MSCs成骨分化中BMP2对成骨转录因子SATB2表达的调控作用

目的探索间充质干细胞(MSCs)成骨分化中骨形态发生蛋白2(BMP2)对成骨转录因子SATB2表达的调控作用。方法体外培养小鼠间充质细胞系C2C12,腺病毒介导的BMP2(Adv-BMP2)诱导其向成骨细胞分化,建立并验证C2C12细胞成骨分化细胞模型。Real-Time PCR和Western blotting分别检测C2C12细胞成骨分化过程中经不同浓度Adv-BMP2处理不同时间时SATB2 mRNA和SATB2蛋白表达;以经相应浓度Adv-β-Gal处理细胞作对照。结果经150 pfu/cell Adv-BMP2处理C2C12细胞5 d后,成骨细胞标志基因Ⅰ型胶原、骨唾液酸蛋白和骨钙素表达以及碱性磷酸酶活性均显著增加,MSCs成骨分化模型构建成功。150 pfu/cell Adv-BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,SATB2 mRNA和SATB蛋白表达随分化进程而增加;Adv-BMP2浓度为0～225 pfu/cell时,SATB2表达随Adv-BMP2浓度升高而增加。结论 BMP2可调控SATB2的表达,从而影响MSCs成骨分化。

间隙连接蛋白Connexin43对力刺激下人牙周膜细胞成骨相关转录因子表达的影响

目的研究间隙连接蛋白Connexin43(Cx43)在牵张力刺激下对牙周膜成纤维细胞成骨相关转录因子表达的影响。方法对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)施加变形量为5%的牵张力,在受力1、2、4、8、24 h后检测成骨相关转录因子Osterix、RUNX2及Cx43 mRNA的表达。分别采用间隙连接的阻断剂18α-GA和基因沉没Cx43的方法阻断Cx43后观察Osteix、RUNX2 mRNA表达的变化。结果对h PDLFs施加牵张力时,h PDLFs内的Cx43、Osterix和RUNX2mRNA水平随加力时间增加表达均明显增强(P均<O.05),在24 h达到最高值。分别阻断间隙连接通道和抑制间隙连接蛋白Cx43,结果显示Osterix和RUNX2 mRNA表达水平均受到明显抑制(P均<O.05)。结论力刺激下间隙连接蛋白Cx43及成骨转录因子Osterix和RUNX2在h PDLFs中的表达呈现时间依赖性增加。间隙连接蛋白Cx43可能参与了这两种成骨转录因子表达的调节。

人成骨特异性转录因子cDNA胞外区片段的克隆和序列分析

目的:克隆人成骨特异性转录因子(cbfa1)cDNA胞外区片段并进行序列分析。方法:提取人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC19克隆载体中,转化TOP10感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒进行酶切鉴定后进行序列分析。结果:从人骨肉瘤细胞系细胞提取的总RNA中成功获得人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,DNA序列分析证实其序列和文献报道一致。结论:采用基因克隆的方法得到人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,为进一步进行其结构和功能研究打下基础。

大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1和成骨特异转录因子RUNX2的表达

目的:检测大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1(forkhead box O1,Fox O1)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化,初步探讨Fox O1和Runx2在正畸牙移动牙周组织改建中的作用及相互关系。方法:将40只8周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组,建立正畸牙移动模型,以上颌左侧加力的第一磨牙为实验侧,右侧不加力的第一磨牙为对照侧。分别加力1、3、5、7、14 d后处死大鼠,解剖分离出含有第一磨牙的牙槽骨制备标本,进行苏木精-伊红(H-E)染色和Fox O1、Runx2免疫组织化学染色,利用Image Pro Plus图像分析系统对染色后的切片做定量分析,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理。结果:Fox O1在牙周膜主要表达于成骨细胞及成牙骨质细胞中,Runx2主要表达于成骨细胞、成纤维细胞及成牙骨质细胞中。实验组加力后,大鼠牙周组织中Fox O1和Runx2的表达增强,在3~5 d内达到峰值,而后表达降低;14 d时与对照组相比无显著差异(P>0.05),其余组与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论:Fox O1和Runx2参与了正畸牙移动中的牙周组织改建,且主要参与了成骨细胞和骨形成的过程。

miR-133a调控RUNX2/BMP2信号通路参与激素性股骨头坏死的机制

目的探讨微RNA(miR)-133a调控生长相关转录因子2(RUNX2)/骨形态蛋白2(BMP2)信号通路参与激素性股骨头坏死(SONFH)的机制。方法收集本院接受髋关节置换SONFH患者(SONFH组)骨髓及股骨颈骨折不愈合患者(对照组)骨髓,提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),经表型鉴定、成骨、成脂分化鉴定后检测BMSCs miR-133a、RUNX2 mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶鉴定miR-133a与RUNX2的靶向关系。实验分组包括对照组、SONFH组、抑制剂对照组(inhibitor con组)、miR-133a抑制剂组(miR-133a inhibitor组)、miR-133a inhibitor+si-RUNX2组。实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-133a、RUNX2 mRNA水平;Western blotting检测BMSCs中RUNX2、BMP2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)蛋白水平;CCK-8检测细胞增殖情况;茜素红染色鉴定细胞矿化能力。结果BMSCs细胞表型鉴定结果显示,细胞表面CD71、CD44表达,CD34、人类白细胞抗原DR等位基因不表达;成骨分化鉴定显示BMSCs出现矿化结节,结节呈红色散落分布;成脂分化鉴定显示BMSCs中脂滴呈橙红色,脂滴沉着细胞,且数量较多,部分细胞内脂滴融合变大成泡状,细胞核位于中央或挤向外周,提示BMSCs提取成功。miR-133a与RUNX2靶向关系存在特异性结合位点。与对照组比较,SONFH组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。与SONFH组、inhibitor con组比较,miR-133a inhibitor组BMSCs中miR-133a水平降低(P<0.05);RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h时BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著升高(均P<0.05)。与miR-133a inhibitor组比较,miR-133a inhibitor+si-RUNX2组BMSCs中miR-133a水平升高(P<0.05),RUNX2 mRNA和蛋白水平,24、48、72 h BMSCs的吸光度值,BMSCs矿化结节相对数量,BMP2、BGP、COL-Ⅰ蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。结论miR-133a在SONFH患者BMSCs中高表达,抑制miR-133a表达可靶向促进RUNX2的表达,从而促进BMSCs成骨分化和细胞增殖。

AMPK信号在骨形成中的作用研究进展

AMP活化的蛋白激酶(AMPK)不仅可以调控成骨细胞分化,还可调控骨形成关键信号通路及相关机制,其相关信号通路(核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素信号通路、Wnt/β联蛋白通路、甲羟戊酸途径、骨形态发生蛋白2/Smad/Runt相关转录因子2信号通路)的异常均会引起成骨细胞分化异常或骨形成障碍,进而导致相应骨代谢疾病,如骨质疏松症、类风湿关节炎等,且涉及沉默信息调节因子2相关酶1、细胞自噬、血管生成、活性氧的产生等。对AMPK信号在骨形成中作用的研究可为临床抗骨质疏松新药物的研发提供更多靶点。

高糖环境下GATA4通过调节RUNX2影响成骨细胞增殖分化的研究

目的:探讨高糖环境下GATA锌指转录因子蛋白4(GATA4)对成骨细胞增殖分化的影响,及对转录因子蛋白2(Runx2)的调控作用。方法:取MC3T3-E1成骨细胞,在高糖(25 mmoL/L)的条件下分别培养1 d、4 d、7 d、14 d,免疫印迹法(Western blotting)法检测GATA4、Runx2蛋白表达水平。将MC3T3-E1成骨细胞分为空白对照组、高糖诱导组、GATA4过表达腺病毒(Ad-GATA4)组、GATA4空载腺病毒组(Ad-eGFP)组,CCK-8法检测各组细胞的存活率,碱性磷酸酶(ALP)染色法及茜素红染色法检测细胞分化能力;Western blot法检测各组细胞GATA4、Runx2、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、骨唾液蛋白(BSP)蛋白表达水平。共转染Ad-GATA4及Runx2干扰腺病毒(Ad-si-Runx2),将MC3T3-E1成骨细胞分为Ad-GATA4-si-Runx2组、AdGATA4-eGFP2组、Ad-eGFP-si-Runx2组、Ad-eGFP-eGFP2组及未转染组(高糖组),高糖条件下培养7 d后检测GATA4、Runx2、OSX、BSP蛋白表达水平。结果:随着高糖培养时间延长,细胞中GATA4、Runx2蛋白表达持续降低,在第7天降低至最低,选取高糖培养7 d为后续培养条件。转染Ad-GATA4后,与空白对照组比较,高糖诱导组细胞矿化结节形成较少,细胞存活率、ALP活性、GATA4、Runx2蛋白表达、OSX、BSP蛋白表达降低(P<0.05);与高糖组相比,Ad-GATA4组细胞矿化结节形成较多,细胞存活率、ALP活性、GATA4、Runx2蛋白表达、OSX、BSP蛋白表达升高(P<0.05),Ad-eGFP组与高糖诱导组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-GATA4与Ad-si-Runx2共转染后,与高糖诱导组相比,Ad-GATA4-eGFP2组细胞GATA4、Runx2、OSX及BSP蛋白表达升高(P<0.05);Ad-eGFP-si-Runx2细胞Runx2、OSX及BSP蛋白表达降低(P<0.05),GATA4蛋白表达变化差异无统计学意义(P>0.05)。与Ad-GATA4-eGFP2组比较,Ad-GATA4-si-Runx2细胞Runx2、OSX及BSP蛋白表达降低(P<0.05),GATA4蛋白表达变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高糖可抑制成骨细胞增殖分化,伴随GATA4、Runx2蛋白表达降低。过表达GATA4则可促进成骨细胞在高糖环境中的增殖、分化,其可能与激活Runx2表达有关。

鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20g·L-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量PCR法与Western blotting法测定对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10g·L-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量PCR和Western blotting检测,10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。

壮骨止痛胶囊调控OSX、OPN蛋白对去势大鼠成骨细胞分化的影响

目的探究壮骨止痛胶囊含药血清调控成骨相关转录因子抗体(osterix, OSX)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)对去势大鼠成骨细胞分化的机制。方法 50只3月龄雌性大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、骨松宝组和壮骨止痛胶囊组,10只/组,除空白组及假手术组外,摘除双侧完整卵巢,然后各组分别予以相应干预,获取相应血清;10只新生SD乳鼠提取原代成骨细胞,培养至第三代后添加上述分组相应10%血清,银染及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色鉴定成骨细胞,免疫组化检测OSX、OPN蛋白的表达。结果各组中的成骨细胞银染呈褐色、碱性磷酸酶染色呈蓝紫色;免疫组化结果表明,骨松宝组、壮骨止痛胶囊组中细胞质呈棕色;空白组和假手术组呈浅棕黄色;模型组几乎不见棕黄色。与假手术组比,模型组OSX、OPN蛋白的表达率降低(P<0.05);壮骨止痛方及骨松宝干预后OSX、OPN蛋白表达率较模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论壮骨止痛胶囊组含药血清能促进OSX、OPN蛋白分泌,从而促进成骨细胞增殖、分化,发挥抗绝经后骨质疏松作用。

流体剪切力对人脂肪基质细胞成骨相关基因表达影响的研究

目的探讨流体剪切力(FSS)对人脂肪基质细胞(ADSC)成骨相关基因骨钙素(OCN)、转录因子Osterix(Osx)及核心结合因子(Cbf)a1 / Runt相关转录因子(Runx)2表达的影响。方法将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行常规培养(A1、A2组)和诱导培养(A3、A4组),然后分别对其加载强度为0.3 Pa的FSS(A1、A3组),未加FSS的为对照组(A2、A4组),通过逆转录-聚合酶链反应检测骨钙素、转录因子Osx及Cbfa1/Runx2基因表达的情况。结果 A3、A4组在FSS加载后,其成骨相关基因的表达增强;而A1、A2组未见成骨特异性基因条带。这表明在常规培养条件下,无论是否有FSS的刺激,均无成骨特异性基因表达。结论脂肪基质细胞在诱导培养条件下,FSS可促使其向成骨细胞分化,可作为骨组织工程的种子细胞。

成骨细胞中雌激素与Runx2相互作用机制的研究与趋势

背景:普遍认为雌激素和成骨特异性转录因子(runt-related transcription factor2,Runx2)是骨骼形成和维持的重要调控因子。目的:分析总结目前有关成骨细胞中雌激素与Runx2相互作用的研究进展,综述在成骨细胞中雌激素与Runx2相互作用的分子机制。方法:以"雌激素"、"成骨特异性转录因子"、"成骨细胞"、"Runx-2"、"Estrogen"为检索词,检索PubMed数据库、中国生物医学文献数据库、维普期刊全文数据库、万方数据库有关文章。排除重复性研究及无关研究。计算机初步检索得到62篇文献,经过进一步研读分析,保留22篇进行总结。结果与结论:研究发现,雌激素和Runx2在成骨细胞中并不是孤立的发挥作用,而是通过多种方式相互协同,共同发挥对成骨细胞的调控,作用于骨代谢过程。雌激素与Runx2之间存在的复杂作用机制,除E2/ER与Runx2直接作用外还涉及到许多信号系统,如转化生长因子β信号通路,Wnt/β-连锁蛋白信号通路,Fas/FasL信号通路和核因子κB信号通路等。

左旋肉碱经Runx2/COL1A1通路抑制老年鼠肿瘤恶液质的骨骼肌纤维化

目的探讨左旋肉碱经Runx2/COL1A1通路抑制老年鼠肿瘤恶液质的骨骼肌纤维化。方法用结肠癌MC38细胞在C57老年鼠右侧腹股沟皮下植瘤构建肿瘤恶液质模型,实验分为非荷瘤组、荷瘤组和左旋肉碱组,并进行相应干预。实验结束后取一侧腓肠肌称重,行苏木精‑伊红染色(HE染色)和Masson染色后,分别测量腓肠肌横截面积和胶原纤维面积占比;对侧腓肠肌提取总蛋白,蛋白质印迹法检测Runx2和COL1A1蛋白水平。体外实验用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导NIH/3T3细胞,建立体外纤维化模型,经左旋肉碱干预后,分别提取总蛋白和mRNA,蛋白质印迹法检测Runx2和COL1A1蛋白水平,并用qRT‑PCR检测COL1A1 mRNA水平,转染cDNA‑Runx2验证左旋肉碱通过Runx2调控COL1A1。结果三组进行比较,荷瘤组腓肠肌重量明显低于非荷瘤组[(98.12±17.04)mg比(122.18±6.91)mg](P<0.05);荷瘤组腓肠肌横截面积(207.46±54.55)μm^(2)显著低于非荷瘤组(488.61±46.72)μm^(2)和左旋肉碱组(434.54±113.84)μm^(2)(P<0.05);胶原纤维面积占比荷瘤组(9.69±1.55)%明显高于左旋肉碱组(5.48±1.19)%和非荷瘤组(3.88±0.86)%(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,与其他两组相比,荷瘤组Runx2和COL1A1高表达(P<0.05)。体外研究表明,左旋肉碱可逆转TGF‑β1诱导的Runx2蛋白和COL1A1 mRNA高表达。过表达Runx2结果证实左旋肉碱通过抑制Runx2蛋白的表达下调COL1A1 mRNA。结论左旋肉碱通过降低Runx2/COL1A1改善老年鼠肿瘤恶液质的骨骼肌纤维化。

miR-21对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨miR-21对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨的影响,旨在为干细胞治疗牙周炎提供实验基础。方法酶解组织块法分离培养hPDLSCs,通过流式细胞仪检测表面分子CD34、CD45、CD90、CD105对hPDLSCs进行鉴定,采用Lipofectamine 2000将miR-21的mimics(pre-miR-21)、inhibitor(anti-miR-21)以及各自的阴性对照转染至hPDLSCs。实验分组:过表达组(mimics组)、过表达阴性对照组(mimics-NC组);抑制阴性对照组(inhibitor-NC组)、抑制组(inhibitor组)。实时荧光定量PCR检测miR-21转染效率;CCK-8、流式细胞术检测hPDLSCs的增殖;茜素红染色检测hPDLSCs的成骨能力和Western blot检测成骨相关基因Runx2的蛋白表达。结果miR-21的mRNA表达量mimics组较mimics-NC组明显升高,inhibitor组较inhibitor-NC组明显降低(P<0.05)。hPDLSCs增殖及S期细胞比例mimics组较mimicsNC组升高,inhibitor组较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。经茜素红染色后,mimics组矿化结节多于mimics-NC组;inhibitor组矿化结节少于inhibitor-NC组;Western blot检测mimics组Runx2蛋白表达高于mimics-NC组,inhibitor组Runx2蛋白表达量较inhibitor-NC组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-21调控hPDLSCs的增殖和成骨向分化。

IL-18对人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用

目的探讨IL-18对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的成骨分化作用。方法取生长良好的第3代hBMSC每孔2×10^(4)个接种于6孔培养板,并随机分成两组。于细胞汇合率为80%~90%时,对照组采用经典成骨诱导液培养,观察组采用经典成骨诱导液+质量浓度为100 ng/mL的重组人IL-18培养液培养。成骨分化诱导1、3、7 d后检测骨特异性转录因子-2(Runx2)、骨形态发生蛋白-2(BMP2)、骨桥蛋白(OPN)mRNA及蛋白表达。两组hBMSC诱导分化7 d后进行碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色。结果两组成骨诱导1、3、7 d,Runx2、BMP2、OPN mRNA及蛋白表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组随诱导时间延长,Runx2、BMP2、OPN mRNA及蛋白表达增加,不同时点Runx2、BMP2、OPN mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组成骨诱导7d后ALP染色较对照组明显深染,茜素红染色矿化结节染色区域明显多于对照组。结论IL-18体外能促进hBMSC向成骨细胞分化。

miR-214抑制牙囊细胞成骨分化的体外研究

目的探讨miR-214对于牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)成骨分化的影响。方法双向差速传代法体外培养提纯牙囊细胞,以未转染的DFCs为对照(DFCs组),通过向DFCs中转染miR-214-3p mimics(miR-214 mimics组)或miR-214-3p inhibitor(miR-214 inhibitor组)分别上调和下调DFCs中的miR-214的表达。成骨诱导7 d,qRT-PCR检测miR-214表达及相关成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨粘连蛋白(osteonectin,OSN)、成骨相关转录因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX-2)的mRNA表达,免疫蛋白印迹检测各组RUNX-2、β-catenin蛋白表达;成骨诱导14 d茜素红染色观察矿化结节形成的情况。结果骨诱导7d,相较DFCs组,miR-214 mimics组miR-214的表达上调,miR-214 mimics组成骨相关基因ALP、OSN及RUNX-2的mRNA表达均低于DFCs组,但仅ALP在两组的差异具有统计学意义(P>0.05),而miR-214 inhibitor组成骨相关基因ALP、OSN、RUNX-2的mRNA表达均高于DFCs组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。miR-214mimics组RUNX-2、β-catenin的蛋白表达均低于miR-214 inhibitor组。miR-214 mimics组钙化结节明显少于DFCs组,而miR-214 inhibitor组钙化结节却明显多于DFCs组。结论miR-214上调可使β-catenin表达下调,并抑制成骨相关基因ALP、OSN及RUNX-2的表达,抑制成骨分化;下调miR-214,结果相反;miR-214可能是通过下调β-catenin的表达,抑制DFCs的成骨分化。

补肾化痰方对绝经后骨质疏松模型大鼠骨重建平衡的影响

目的观察补肾化痰方对绝经后骨质疏松(PMOP)模型大鼠骨重建平衡的影响。方法选取6月龄SD雌性大鼠30只,按照随机数字表法将其分为假手术组、模型组及中药组,每组10只。假手术组及中药组均以卵巢切除术造模,假手术组仅切除卵巢旁等量脂肪。术后5周开始灌胃,中药组给予补肾化痰方,假手术组和模型组灌服等量生理盐水。12周末大鼠处死后取材,分别采用酶联免疫吸附测定法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测血清及骨组织骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的含量及定位,采用micro CT检测大鼠的骨密度,比较分析各组间各个指标的差异。结果模型组和中药组大鼠骨密度及血清BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL含量均低于假手术组,RANKL含量高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组大鼠骨密度及血清BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL含量均高于模型组,RANKL含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和中药组大鼠骨组织BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL灰度值均低于假手术组,RANKL灰度值高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组大鼠骨组织BMP2、RUNX2、OPG、OPG/RANKL灰度值均高于模型组,RANKL灰度值低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,BMP2、RUNX2、OPG的阳性表达主要位于骨髓基质细胞胞浆及骨小梁周边成骨细胞中;RANKL的阳性表达位于骨质边缘破骨细胞中,呈棕黄色颗粒。结论补肾化痰方能够通过BMP2/Smad/RUNX2信号通路及OPG/RANKL/RANK信号通路调控骨重建平衡,从而起到治疗PMOP的作用。

Runx2,Osterix及MMP-13在大鼠激素性股骨头无菌性坏死组织中的表达及意义

目的探讨Runx2,Osterix及MMP-13蛋白及基因在大鼠激素性股骨头无菌性坏死组织中的表达。方法40只成年Wistar大鼠随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。模型组大鼠接受地塞米松20 mg/kg肌肉注射,1次/周,注射后,在跑步机上对动物进行训练。模型组根据训练时间分为3组(各10只):A组8周;B组10周;C组12周。采用PCR和Western blot方法检测大鼠股骨头组织中基因及蛋白变化。结果模型组大鼠脂肪细胞最大直径、空骨陷窝率高于对照组,且随着训练时间的增加,脂肪细胞最大直径、空骨陷窝率逐渐增加,差异具有统计学意义(P<0.00);模型组骨小梁面积低于对照组,且随着训练时间的增加,骨小梁面积逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.00)。模型组大鼠Runx2,Osterix蛋白与基因表达量低于对照组,且随着时间的延长,表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠MMP-13蛋白与基因表达量高于对照组,且随着时间的延长,表达量逐渐增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论激素性股骨头坏死组织中Runx2,Osterix在mRNA和蛋白表达水平均低于正常股骨头组织,MMP-13高于正常股骨头组织。

非编码RNA调控血管平滑肌细胞成骨样表型转化的研究进展

分化成熟的血管平滑肌主要功能是收缩血管、调节血管周径及血压等.在高磷、高糖、维生素D3、炎症等因素的作用下,平滑肌细胞可转分化为成骨样细胞参与血管钙化的形成,诱发心脑血管不良事件.非编码RNA是经基因转录但不翻译为蛋白质的一类RNA总称,其通过调控多种细胞活动来参与机体的生理和病理过程.已有研究表明,非编码RNA可通过调控血管平滑肌细胞成骨样表型转化影响血管钙化的发生、发展.本文从微小RNA、长链非编码RNA、环状RNA几方面综述非编码RNA在血管平滑肌成骨样表型转化中的调节作用,有助于进一步了解血管钙化的分子机制以及发现防治血管钙化的新靶点.

三花接骨散对股骨骨不连模型大鼠BMP-7/Runx2通路及骨愈合的影响

目的:探讨三花接骨散对股骨骨不连模型大鼠骨形态蛋白7(BMP-7)/转录因子蛋白2(Runx2)信号通路及骨愈合的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,三花接骨散低(1g/kg)、中(4g/kg)、高(8g/kg)剂量组,复方骨肽注射液组(阳性组,25mg/kg),每组10只。除正常对照组外,均建立大鼠股骨骨不连模型。除正常对照组和模型组灌胃给予生理盐水外,三花接骨散组、阳性组均腹腔注射给予相应剂量药物。末次给药12h后,酶联免疫吸附试剂法(ELISA)检测血液血小板衍生因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;取股骨组织,观察股骨大体情况;X线拍片观察骨愈合情况并进行评分;苏木精—伊红染色(HE)检测各组大鼠股骨组织病理变化并进行评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨痂组织中BMP-7、骨钙素(OCN)、Runx2蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠断端骨性连接较少、间隙较大、骨小梁排列紊乱,X射线评分、骨愈合组织学评分、血清VEGF、PDGF水平及骨组织BMP-7、OCN、Runx2蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组相比,三花接骨散低、中、高剂量组及阳性组大鼠断端间隙减小、骨小梁形成较多,X射线评分、骨愈合组织学评分、VEGF、PDGF水平及BMP-7、OCN、Runx2蛋白表达均升高(P<0.05),且随三花接骨散剂量升高上述指标依次升高。三花接骨散高剂量组与阳性组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三花接骨散可能通过促进BMP-7/Runx2/OCN信号通路活化,促进骨折处成骨形成,进而改善股骨骨不连大鼠骨愈合状况。

补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响

目的:观察补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠BMP2/Smad/RUNX2信号通路及钙沉积的影响。方法:6月龄SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、补肾组和补肾化痰方组,每组10只。补肾组予补肾方灌胃,0.51 g/mL;补肾化痰组予补肾化痰方灌胃,0.94 g/mL,模型组和假手术组予等体积生理盐水灌胃,1 mL/100 g,持续灌胃8周。采用micro CT检测大鼠的骨密度(BMD),采用ELISA检测血清骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、胎球蛋白(Fetuin-A)、基质gla蛋白(MGP)含量,Western blot法检测骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP蛋白的表达。结果:模型组、补肾组、补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A的含量、血清MGP水平均低于假手术组,骨组织MGP水平高于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05);补肾组和补肾化痰方组大鼠骨密度、血清及骨组织BMP2、RUNX2、Fetuin-A含量、血清MGP水平均高于模型组,骨组织MGP水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。补肾化痰方组血清BMP2、RUNX2、Fetuin-A、MGP高于补肾组(P<0.05);补肾组骨组织BMP2、RUNX2高于补肾化痰方组(P<0.05);补肾组和补肾化痰方组骨密度、骨组织Fetuin-A、MGP比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾化痰方能够提高骨质疏松大鼠的骨密度及血清Fetuin-A的含量,影响BMP2/Smad/RUNX2信号通路。