推拿手法对家兔骨骼肌失神经支配后神经生长因子表达的影响

目的通过观察推拿手法家兔失神经支配骨骼肌干预后肌湿重、神经组织中神经生长因子(NGF)蛋白及信使RNA(mRNA)水平的变化,探讨推拿手法对受损神经及失神经支配骨骼肌的影响。方法新西兰家兔,随机分为3组:正常对照组、模型对照组、手法治疗组。分别于手法干预2周、3周、1个月、2个月、4个月后,每组各取6只家兔,称量肌湿重,计算术侧与健侧的肌湿重比值;测定NGF蛋白水平及NGF mRNA表达水平。结果 (1)腓肠肌肌湿重比:与正常组比较,模型组各时间点腓肠肌肌湿重比均明显下降(P<0.01);与模型组比较,手法组各时间点肌湿重比均显著升高(P<0.05)。(2)损伤神经NGF IHC法检测:造模后,与正常组相比,模型组神经组织NGF平均光密度(AOD)值各时间点均显著升高(P<0.01);与模型组相比,手法组损伤神经NGF AOD值各时间点均显著升高(P<0.01)。(3)损伤神经NGF mRNA qRT-PCR检测:造模后,与正常组相比,模型2周、3周组NGF mRNA水平均明显升高(P<0.01),其余各时间点均降低(P<0.01);与模型组相比,手法2周、3周组NGF mRNA水平有升高趋势,但无统计学差异,手法1个月、2个月、4个月组NGF mRNA水平升高,有统计学意义(P<0.01)。结论推拿手法可以延缓周围神经损伤后骨骼肌萎缩、变性,促进损伤神经的修复。

推拿手法对家兔骨骼肌失神经支配后雪旺氏细胞S-100蛋白表达的影响

目的通过观察推拿家兔骨骼肌失神经支配后肌湿重、雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平,探讨推拿手法对受损神经及失神经支配骨骼肌的影响。方法新西兰家兔120只,分为正常对照组、模型组、神经生长因子(NGF)治疗组、手法治疗组,每组30只,分别于手法干预2周、3周、1个月、2个月、4个月后,每组各取6只家兔,称量腓肠肌肌湿重,计算术侧与健侧的肌湿重比值;测定雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平。结果(1)腓肠肌肌湿重比:与模型组比较,手法治疗组各时间点均增加[2周:(0.72±0.05)%比(0.53±0.01)%,3周:(0.55±0.04)%比(0.41±0.03)%,1个月:(0.55±0.99)%比(0.40±0.03)%,2个月:(0.49±0.03)%比(0.38±0.05)%,4个月:(0.50±0.03)%比(0.38±0.05)%,P均<0.05]。手法治疗组4个月时则显著高于NGF治疗组[(0.50±0.03)%比(0.42±0.02)%,P<0.05]。(2)雪旺氏细胞S-100蛋白表达:手法治疗组在各时期均高于模型组[2周:(27.00±6.29)比(10.33±1.51),3周:(33.17±5.27)比(20.83±3.87),1个月(51.00±4.56)比(21.17±4.62),2个月:(75.83±9.66)比(30.67±3.27),4个月:(116.67±3.10)比(53.17±7.52),P均<0.05]。手法治疗组在1个月、2个月均高于NGF治疗组[1个月:(51.00±4.56)比(32.83±4.12),2个月:(75.83±9.66)比(47.00±5.06),P均<0.05]。结论推拿手法可以延缓周围神经损伤后骨骼肌萎缩、变性,促进损伤神经的修复。

推拿手法对家兔骨骼肌失神经支配后成肌调节因子Myf-5、Myogenin表达的影响

目的观察推拿手法对家兔失神经支配骨骼肌干预后肌湿重、成肌调节因子中生肌因子5(Myogenic factor 5,Myf-5)、肌细胞生成素(Myogenin)表达的影响。方法普通级新西兰雄性家兔随机分为正常对照组、模型对照组、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)治疗组和手法治疗组,每组30只。每组再随机分为2周、3周、1个月、2个月和4个月五个亚组,每组6只。模型对照组、NGF治疗组及手法治疗组家兔建立腓肠肌失神经支配模型,NGF治疗组给予肌注注射用鼠神经生长因子,手法干预组进行推拿干预,模型对照组及正常对照组不进行其他操作。分别干预后处死取材,称量腓肠肌肌湿重,计算术侧与健侧的腓肠肌肌湿重比值;检测腓肠肌组织Myf-5 mRNA、Myogenin mRNA表达水平。结果(1)腓肠肌肌湿重比:NGF治疗组在2周(0.79±0.03)%、3周(0.70±0.06)%、1个月(0.58±0.04)%、2个月(0.44±0.05)%,手法治疗组在2周(0.72±0.05)%、3周(0.55±0.04)%、1个月(0.55±0.09)%、2个月(0.49±0.03)%、4个月(0.50±0.03)%高于模型对照组同期[2周(0.53±0.01)%、3周(0.41±0.03)%、1个月(0.40±0.03)%、2个月(0.38±0.05)%、4个月(0.38±0.05)%,P<0.05]。手法治疗组在2周(0.72±0.05)%、3周(0.55±0.04)%低于NGF治疗组[2周(0.79±0.03)%、3周(0.70±0.06)%],4个月(0.50±0.03)%时则高于NGF治疗组(0.42±0.02)%(P<0.05)。(2)腓肠肌Myf-5 mRNA表达:NGF治疗组在2周(18.50±1.79)、3周(12.52±0.58)、1个月(5.30±1.76)、2个月(2.82±0.23),手法治疗组在2周(20.48±2.20)低于模型对照组同期[2周(40.91±10.31)、3周(25.25±1.27)、1个月(13.91±1.40)、2个月(8.83±0.86),P<0.05],手法治疗组在1个月(16.50±1.17)、2个月(12.20±0.84)、4个月(5.32±0.60)高于模型对照组[1个月(13.91±1.40)、2个月(8.83±0.86)、4个月(3.82±0.54),P<0.05]。手法治疗组在3周(37.21±9.10)、1个月(16.50±1.17)、2个月(12.20±0.84)、4个月(5.32±0.60)时高于NGF治疗组[3周(12.52±0.58)、1个月(5.30±1.76)、2个月(2.82±0.23)、4个月(3.88±0.57),P<0.05]。(3)腓肠肌Myogenin mRNA表达:NGF治疗组在2周(94.31±23.87)、3周(165.95±29.58)、1个月(156.59±64.76)、4个月(4.05±0.51),手法治疗组在4个月(5.74±1.35)低于模型对照组同期[2周(185.92±48.71)、3周(359.21±116.88)、1个月(597.50±146.66)、4个月(63.13±12.24),P<0.05],手法治疗组在2个月(1026.75±132.63)高于模型对照组(168.84±31.85),P<0.05。手法治疗组在2周(209.80±91.25)、3周(482.37±97.95)、1个月(667.73±97.95)、2个月(1026.75±132.63)均高于NGF治疗组[2周(94.31±23.87)、3周(165.95±29.58)、1个月(156.59±64.76)、2个月(140.63±40.18),P<0.05]。结论推拿手法可能通过改善成肌调节因子Myf-5、Myogenin表达来延缓失神经支配后骨骼肌的萎缩,远期疗效较NGF良好。

电刺激对失神经支配骨骼肌超微结构及酶活性的影响

目的 研究电刺激对失神经支配骨骼肌萎缩进程的影响。方法 选用SD大鼠,建立双下肢失神经支配腓肠肌的实验模型,电刺激右下肢腓肠肌,观察肌细胞直径、截面积、超微结构、Na,K-ATP酶和Ca-ATP酶活性变化。结果 电刺激能延缓肌细胞的线粒体、肌质网退变。肌细胞直径及截面积,电刺激侧较对照侧肢体下降速度明显减慢;Na,K-ATP酶活性下降速度,电刺激侧较对照侧慢15.59％和27.38％;Ca-ATP酶活性下降速度,电刺激侧较对照侧慢4.83％和21.64％。结论 电刺激对失神经支配骨骼肌具有保护作用,是延缓肌肉萎缩的有效方法。

熏洗一号方对大鼠失神经支配骨骼肌乙酰胆碱酶与Na^+-K^+-ATP酶影响的实验研究

目的:研究中药熏洗一号方对失神经支配骨骼肌乙酰胆碱酶与Na+-K+-ATP酶的影响。方法:雄性SD大鼠120只,造模成功后随机分为熏洗一号方组、丹参组、模型组和空白对照组,每组各30只。各组实验动物分别在术后7d、14d和21d处死,股直肌肌腹组织块取材,常规HE染色,分别观察失神经支配后骨骼肌结构,乙酰胆碱酯酶活性和骨骼肌匀浆液Na+-K+-ATP酶改变。结果:⒈HE染色:按优劣排列依次为熏洗一号方组、丹参组、模型组。⒉乙酰胆碱酯酶活性:随着试验观察时间的推移,熏洗一号方组乙酰胆碱酯酶活性逐渐增强,最后接近正常水平,染色均匀,运动终板结构规则,呈椭圆形或卵圆形花纹状结构,与空白组相比(P>0.05);模型组和丹参组乙酰胆碱酯酶活性弱,与空白对照组相比(P<0.01)。⒊骨骼肌匀浆液Na+-K+-ATP结果:术后7d各组Na+-K+-ATP酶组间比较没有统计学意义(P>0.05)。术后14d熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.05)。术后21d,熏洗一号方组与空白对照组对比(P<0.01),且熏洗一号方组Na+-K+-ATP酶含量最高。结论:熏洗一号方能延缓神经肌肉运动终板(Motor endplate,MEP)与效应器的变性,改善失神经支配骨骼肌的营养供应、延缓骨骼肌的萎缩。

复方太子参颗粒影响大鼠失神经支配骨骼肌萎缩的实验研究

为探讨复方太子参颗粒对失神经支配骨骼肌萎缩的影响,用切断SD大鼠右侧胫神经的方法建立失神经支配骨骼肌萎缩的动物模型。将造模后的SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每天每只大鼠以含复方太子参颗粒1g的生理盐水溶液3ml灌胃;对照组每天每只大鼠以生理盐水3ml灌胃。于术后2、4、6周取大鼠腓肠肌,称量肌湿重,测定肌肉蛋白质。结果术后大鼠腓肠肌明显萎缩,腓肠肌湿重进行性下降,实验组肌湿重显著大于对照组。失神经支配后,骨骼肌总蛋白含量逐渐减少,实验组肌肉总蛋白含量显著大于对照组。表明复方太子参颗粒可以延缓失神经支配骨骼肌的萎缩,其可能机制是抑制失神经支配后肌肉蛋白质的分解;周围神经损伤后,周围神经的手术修复越早,术后功能恢复越好。

氯沙坦减少细胞凋亡延缓失神经骨骼肌萎缩的实验研究

目的失神经骨骼肌萎缩是临床亟待解决的难题,研究旨在探讨氯沙坦能否减少细胞凋亡,以期寻找延缓失神经骨骼肌萎缩的新途径。方法雄性SD大鼠42只,随机分成3组(n=14),分别为Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(失神经对照组)和Ⅲ组(氯沙坦治疗组)。Ⅰ组不作处理,Ⅱ组和Ⅲ组制备失神经腓肠肌(gastrocnemius,GAS)动物模型。术后Ⅲ组大鼠采用氯沙坦以10mg/kg·d空腹灌胃4周;Ⅰ、Ⅱ组大鼠分别以等剂量生理盐水灌胃。术后4周处死大鼠,以GAS和体重(bod ymass,BM)之比(GAS/BM)作为骨骼肌萎缩指标;TUNEL法检测腓肠肌细胞凋亡;免疫组织化学和Western blot检测GASBcl-2及Bax的表达。结果术后4周Ⅰ组腓肠肌正常粗细;Ⅱ、Ⅲ组腓肠肌明显萎缩,肌肉变细,与周围组织粘连明显。GAS/BMⅡ组为11.68±1.98,与Ⅰ组(12.86±0.74)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组GAS/BM为12.11±0.65;与Ⅱ组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL法检测:Ⅰ组罕见凋亡细胞核,凋亡率为0.56%±0.21%;Ⅱ组凋亡细胞核较Ⅰ组明显增多,凋亡率为11.32%±4.51%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组可见凋亡细胞核,凋亡率为7.21%±2.05%,与Ⅱ组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色观察:Bcl-2阳性率Ⅱ组为18.3%±4.9%,较Ⅰ组(27.5%±2.8%)和Ⅲ组(25.5%±3.5%)低,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组与Ⅰ比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bax阳性率:Ⅱ组为24.1%±3.1%,较Ⅰ组(22.1%±3.6%)和Ⅲ组(21.7%±2.3%)高,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组与Ⅰ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组Bax/Bcl-2平均分别为0.8、1.3及0.8。Westernblot检测:Bcl-2蛋白表达Ⅱ组为122.5±14.6,较Ⅰ组(135.3±6.2)下降(P<0.05),Ⅲ组为139.2±16.2,较Ⅱ组增加(P<0.05);Bax蛋白表达Ⅱ组为107.1±15.8,Ⅰ组为89.3±8.4,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ组为94.2±9.5,较Ⅱ组下降(P<0.05);Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达Ⅲ组与Ⅰ组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论细胞凋亡在失神经骨骼肌萎缩中发挥重要作用,可能是骨骼肌萎缩的原因之一;氯沙坦可通过抑制肌细胞凋亡延缓大鼠失神经骨骼肌的萎缩。

成肌调节因子在选择性神经损伤骨骼肌萎缩中的作用

成肌调节因子在失神经支配骨骼肌的再生修复中发挥着突出的影响作用，本实验通过建立大鼠选择性神经损伤模型，观察成肌调节因子MyoD、myogenin在单纯运动神经和感觉神经损伤骨骼肌萎缩中的作用。

单纯运动神经或感觉神经损伤对大鼠腓肠肌显微形态学和超微结构的影响

失神经支配骨骼肌的萎缩逆转涉及到神经修复的许多方面，我们通过建立大鼠高选择性神经损伤模型，观察单纯运动神经或感觉神经损伤对腓肠肌形态学及超微结构的影响。