体外诱导成体大鼠骨骼肌组织来源的干细胞向神经干细胞的转化

目的研究成体Sprague-Dawley（SD）大鼠骨骼肌来源的干细胞（MDSCs）体外诱导向神经干细胞（NSCs）分化的可行性。方法通过酶消化和连续贴壁的方法体外分离成年SD大鼠腓肠肌中的MDSCs。当传代至4-6代时,加入神经干细胞的特殊培养基Neurobasal-A和细胞因子进行诱导分化。用免疫细胞化学、Western blot以及realtime-PCR方法进行鉴定。结果MDSCs在神经干细胞特殊培养基中培养7-10 d后可形成类似神经球的细胞聚集物。运用免疫细胞化学、Western blot以及realtime-PCR检测发现MDSCs的标记蛋白结蛋白（desmin）表达下调,NSCs的特异性抗原神经巢蛋白（Nestin）开始表达。结论在神经干细胞的特殊培养基培养7-10 d后,MDSCs能够向神经干细胞转化。这种现象提示MDSCs有可能作为治疗神经系统疾病尤其是神经退行性疾病的一种新的干细胞来源。

骨骼肌来源细胞移植早期修复小鼠周围神经缺损的实验研究

目的通过观察损伤周围神经早期生长情况,探讨骨骼肌来源细胞(muscle-derived cells,MDCs)修复小鼠坐骨神经缺损的作用机制。方法收集携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)小鼠的后肢骨骼肌,提取EGFP-MDCs并培养至P1代备用。构建C57BL/6小鼠右侧坐骨神经5 mm长缺损模型,并用7 mm长的聚氨酯(polyurethane,PUR)导管桥接两神经断端,将EGFP-MDCs注入PUR导管内(MDC组),与空白组(PUR组)比较。于术后1、2周取术侧坐骨神经近侧断端及远侧断端神经组织,大体观察神经早期生长情况;对神经组织的纵行冰冻切片行雪旺细胞标志物S100β免疫荧光染色,计算小鼠再生神经内雪旺细胞迁移的最远距离总和,并观察表达S100β的雪旺细胞来源;对神经组织横行冰冻切片行磷酸化酪氨酸激酶受体(phosphorylated erb-b2 receptor tyrosine kinase 2,p-ErbB2)及磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)免疫荧光染色,计算二者蛋白阳性率。结果大体观察示术后1、2周PUR组术侧神经的近侧和远侧断端均未相连,而MDC组术后2周两侧神经断端已连接。免疫荧光染色示,术后1周,MDC组及PUR组术侧神经的近侧和远侧断端内表达S100β的雪旺细胞并未相连;术后2周,MDC组两侧神经断端内表达S100β的雪旺细胞已连接,而PUR组仍未连接。术后2周,两组再生神经内雪旺细胞迁移的最远距离总和分别较各组术后1周显著增加,术后1、2周MDC组显著高于PUR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后1周,MDC组近侧断端p-ErbB2及p-FAK蛋白阳性率均显著高于PUR组(P<0.05);术后2周两组近侧断端p-ErbB2蛋白阳性率差异无统计学意义(t=0.327,P=0.747),MDC组p-FAK蛋白阳性率显著高于PUR组(t=4.470,P=0.000)。术后1、2周,MDC组远侧断端p-ErbB2及p-FAK蛋白阳性率均显著高于PUR组(P<0.05)。术后1、2周,MDC组再生神经内均可见部分表达S100β的雪旺细胞来源于EGFP-MDCs。结论 MDCs可促进小鼠坐骨神经断端内ErbB2及FAK蛋白磷酸化,促进雪旺细胞迁移。MDCs可分化为表达雪旺细胞标志物S100β的细胞,或作为其他细胞成分参与周围神经损伤的早期修复。