酶法水解提取骨骼蛋白的实验研究

根据现代生物酶法水解工程技术(以下简称酶解),利用胰酶,提取动物骨骼中的蛋白质。本方法与传统方法相比,具有工艺流程简单易行、环保,蛋白质提取率高,无异味,溶解性能好等优点,降低了成本。

收缩和骨骼蛋白在培养LAM细胞的免疫组化学研究

目的 从形态学上判定淋巴管肌脂瘤病 (L ym phangioleiom yomastosis,L AM)细胞与平滑肌细胞的关联性。方法 用荧光抗体染色法和激光共焦显微镜观察收缩蛋白在 L AM细胞的分布。结果 α平滑肌肌动蛋白 (α- sm ooth m uscle actin,α- SMA)、平滑肌肌球蛋白重链 (sm ooth m uscle myosin heavy chains,SMHC)、结蛋白(desmin)和非肌性肌球蛋白重链 B(nonmuscle m yosin heavy chain B,NMHC- B)存在于 L AM细胞。结论L AM细胞属平滑肌细胞类型。这为进一步研究激素及其它药物对 L

老年心力衰竭病人炎症与骨骼肌蛋白降解、肌肉力量和运动耐力的关系及其对预后的影响

目的:观察老年心力衰竭病人炎症与肌肉萎缩相关指标(骨骼肌蛋白降解、肌肉力量和运动耐力)之间的关系及其对预后的影响。方法:选取2019年1月—12月本院收治的289例老年心力衰竭病人为研究对象,测评免疫炎症指数(IFI)、肌肉萎缩相关指标,统计预后终点事件。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并根据ROC曲线最佳临界值将病人分为高IFI组(152例)和低IFI组(137例),比较高IFI组与低IFI组肌肉萎缩相关指标水平及预后终点事件发生率,并分析IFI值与肌肉萎缩相关指标及预后终点事件的相关性。结果:289例老年心力衰竭病人的IFI值为184.68×10^(9)/L~471.84×10^(9)/L。ROC曲线显示,IFI值的最佳临界值为296.86×10^(9)/L。高IFI组骨骼肌蛋白降解标志物3-甲基组氨酸(3-MH)及肌肉力量指标坐位扩胸时间、卧位上举时间、站位下蹲时间、站位抬膝时间高于低IFI组,6 min步行试验(6MWT)距离低于低IFI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IFI值与骨骼肌蛋白降解标志物3-MH及肌肉力量指标坐位扩胸时间、卧位上举时间、站位下蹲时间、站位抬膝时间均呈正相关(P<0.05),与6MWT距离呈负相关(r=-0.704,P<0.05)。高IFI组的无疾病进展生存时间低于低IFI组[(14.8±2.6)个月与(16.1±2.9)个月],Log-rank检验分析显示差异有统计学意义(χ^(2)=5.634,P=0.003)。结论:炎症可能是促进老年心力衰竭肌肉萎缩的重要原因,且可对老年心力衰竭病人预后产生影响,增加心力衰竭病人不良预后的风险。

我国畜禽骨骼及其蛋白质资源综合利用进展

畜禽骨骼是一种营养十分丰富的天然资源,尤其是其具有较高吸收率和生物学效价的骨蛋白质资源。我国的畜禽骨骼资源丰富,但目前对于畜禽骨骼的开发利用局限性较大,本文对国内外的骨骼开发利用状况进行阐述,重点对畜禽骨骼蛋白质利用价值以及其综合利用进行综述。对我国畜禽骨骼的蛋白质开发既能实现其资源化利用,又能提高我国蛋白质来源,具有经济效益和社会效益。

固体曲法水解牛骨骼蛋白研制复合调味料

本文用低盐稀醉─—团作曲水解提取牛骨骼蛋白研制复合调味料。复合调味料的最佳配方：大蒜粉4％，洋葱粉4％，胡萝卜15％，牛骨粉10％。

烧伤后大鼠不同类型骨骼肌蛋白降解率的变化规律及其与糖皮质激素间的关系

为了解烧伤后不同类型骨骼肌蛋白降解率和血浆中糖皮质激素含量的变化 ,比较不同类型骨骼肌对烧伤刺激的反应 ,分析烧伤后骨骼肌萎缩的调节因子 ,应用 30 %Ⅲ度烫伤大鼠模型 ,借助骨骼肌充分氧供离体孵育系统 ,采用氨基酸全谱分析仪测定大鼠伤后不同时间点伸趾长肌和比目鱼肌蛋白降解率 ,用放射免疫分析测定大鼠血浆中糖皮质激素含量。结果发现 :烧伤后大鼠伸趾长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率均明显增加 ,以烧伤后 12h和 2 4h为著 ,其中肌纤维蛋白降解率增幅明显 ;比目鱼肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率烧伤后均无显著变化 ;烧伤后不同时间点血浆糖皮质激素含量较正常对照组均显著增加 (P <0 0 1) ;伸趾长肌蛋白降解率与血浆糖皮质激素增加密切相关。说明烧伤后骨骼肌萎缩主要是由于肌纤维蛋白大量降解所致 ,快白肌比慢红肌对烧伤刺激敏感 ;糖皮质激素可能是导致骨骼肌蛋白降解增强的重要调节因子。

肿瘤坏死因子-α在慢阻肺大鼠骨骼肌蛋白分解代谢中的作用及其机制

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢中的作用及其机制。方法45只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组和COPD+TNF-α组,每组15只。COPD组和COPD+TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予含或不含有TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育。实时定量PCR和Western blot检测泛素在mRNA和蛋白水平的变化。结果COPD组和COPD+TNF-α组泛素mRNA和蛋白的表达均高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。结论COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是TNF-α激活泛素-蛋白酶体途径所致。

肿瘤坏死因子α对COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基表达的影响

目的研究COPD大鼠骨骼肌蛋白酶体C2亚基的表达,以及TNF-α对其表达的影响,探讨COPD大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、COPD组及COPD+TNF-α组,每组15只。COPD组和COPD+TNF-α组大鼠用单纯熏香烟法制成COPD大鼠动物模型,分离其伸趾长肌,分别给予不含和含TNF-α(10μg/L)的孵育液进行离体有氧孵育。利用实时定量PCR和Western blot技术检测C2亚基在转录和蛋白水平的变化。结果COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基mRNA表达为对照组的1.74倍和1.95倍(P均<0.01),其中COPD+TNF-α组显著高于COPD组(P<0.01)。COPD组和COPD+TNF-α组C2亚基蛋白表达也显著高于对照组(1.04±0.15和1.23±0.16比0.71±0.12,P<0.05和P<0.01),COPD组和COPD+TNF-α组表达无显著差异(P>0.05)。结论COPD时骨骼肌蛋白降解增加可能是经由TNF-α激活泛素-蛋白酶体途径所致。

烫伤后早期肠道喂养对骨骼肌蛋白质分解代谢影响的研究

目的 探讨烫伤后早期肠道喂养（ＥＥＦ）能否抑制骨骼肌蛋白质分解代谢。方法 给予３７％ＴＢ－ＳＡⅢ度烫伤大鼠早期（伤后２ｈ）或延迟（伤后２４ｈ）肠道喂养安素营养液，观察伤后第５天经目鱼肌总Ｔｙｒ释放率及２０Ｓ蛋白酶复合体的活性，以及血中ＴＮＦ、皮质酶水平。结果 烫伤后ＥＥＦ大鼠比目鱼肌总Ｔｙｒ释放率及２０Ｓ蛋白酶复合体活性，血中ＴＮＦ、皮质醇水平的升高程度均显著低于延迟肠道喂养组大鼠。结论

雄激素受体在低氧和运动条件下对骨骼肌蛋白质合成的作用

雄激素促进骨骼肌蛋白质合成是通过雄激素受体作用的,高原训练时高原低氧抑制蛋白质合成,导致肌肉质量下降。综述了雄激素受体的结构,作用机理,在骨骼肌中的作用机制,低氧和运动对雄激素受体的作用,明确低氧和运动条件下雄激素受体在骨骼肌蛋白质合成中的可能作用机理。

金利胶囊对膝骨关节炎兔骨骼肌收缩蛋白基因与软骨基质蛋白多糖表达的影响

[目的]通过观察兔膝骨关节炎(KOA)骨骼肌蛋白与软骨基质蛋白多糖(PGs)表达,探讨柔肝中药金利胶囊治疗KOA的作用及机理。[方法]42只新西兰大白兔分为空白对照组(K组),模型对照组(MD组),金利干预组(R组);MD组与R组动物以改良Hulth法造模,R组造模并给药;取膝关节行番红/固绿染色、Mankin评分;RT-PCR检测肌肉α-肌动蛋白(-αactin)、重链肌球蛋白亚型(MHCⅠ,MHCⅡa,MHCⅡd/x,MHCⅡb)、Aggrecan与ADAMTS5 mRNA表达,检测关节软骨糖胺聚糖(GAG)水平。[结果]与模型组比较,R组Mankin评分降低,-αactin与多种MHC亚型mRNA表达水平上调(P<0.05);Aggre-can mRNA呈高表达,ADAMTS5 mRNA低表达(P<0.05)。[结论]金利胶囊能够延缓OA软骨退变,促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,改善软骨基质蛋白多糖代谢。

mTOR介导抗阻运动骨骼肌蛋白质合成机制研究进展

国内外学者普遍认为,长期反复抗阻运动导致骨骼肌肥大。其根源是蛋白质合成率远大于蛋白质分解以致蛋白质积累,导致肌纤维横截面积增大,骨骼肌质量增加[1]。已有研究显示,骨骼肌质量发生微小变化可能对骨骼肌功能起着决定性作用[2]。以往研究显示,抗阻运动导致骨骼肌IGF-1 mRNA和蛋白表达均增加[3]。骨骼肌外源性补给IGF-1,

运动对骨骼肌肌动蛋白及其基因表达影响的研究进展

以肌动蛋白在骨骼肌运动中的重要生理功能为依据,从分子水平阐述了运动方式对骨骼肌肌动蛋白及其基因表达的不同影响,并对调节骨骼肌肌动蛋白合成和基因表达的因素进行了探讨。

帕夫林对骨质疏松模型大鼠骨密度、骨骼肌蛋白含量及相关细胞因子的影响

目的探讨帕夫林(TGP)对骨质疏松模型大鼠骨密度、骨骼肌蛋白及相关细胞因子的影响。方法6月龄SD雌性大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松动物模型。对照组行假手术。每组8只,共分4组。假手术组和卵巢切除组均用生理盐水灌胃,帕夫林低剂量+卵巢切除组、帕夫林高剂量+卵巢切除组分别给予TGP50mg/kg·d)、150mg/kg·d)灌胃。所有动物给药时间均为12周。处死大鼠后取血清测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转移生长因子-β(TGF-β),右侧股四头肌固定部位肌肉测定其蛋白总量及白蛋白含量,取右侧股骨及腰椎测骨密度。结果TGP组较卵巢切除组骨密度明显增高(P<0.05),TGP组骨骼肌总蛋白含量较卵巢切除组高(P<0.05),帕夫林低剂量组IL-6水平较卵巢切除组明显下降(P<0.05)。TGP高、低浓度与各检测指标间的相关性分析,无统计学差异(P>0.05)。结论TGP能够提高大鼠骨密度,增加骨骼肌蛋白含量,降低血清IL-6水平。

猪骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因的cDNA克隆与表达分析

从人骨骼肌快肌肌钙蛋白C2（TNNC 2）基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到一个有较高同源性且在猪背最长肌中表达EST（BM083186）。通过电子克隆和进一步RT-PCR实验验证，获得猪TNNC 2基因全长cDNA序列，其全长843bp，开放阅读框为201-683bp，编码有160个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、鼠的骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为93．6％、90．5％，蛋白序列同源性均为97．5％。多种组织的半定量RT-PCR研究表明，该基因在骨骼肌中表达，并且在杜洛克猪背最长肌中的表达比兰塘猪高。

低氧暴露所致大鼠骨骼肌萎缩的蛋白转化调节机制

目的 对比低氧暴露和常氧下配对低氧摄食干预(半饥饿状态)下大鼠骨骼肌蛋白质合成和分解相关基因表达的差异,以探讨低氧暴露诱导骨骼肌萎缩发生的可能机制。方法 SD大鼠分为:①常氧正常饮食组(C组);②低氧正常饮食组(H组),氧气浓度为12.4%;③常氧配对饮食组(P组),投食量即为H组前一天摄食量。4周干预后测量大鼠体成分,取比目鱼肌(SOL)和趾长伸肌(EDL),称量湿重;HE染色观察肌纤维形态,计算肌纤维横截面积(FCSA);WB测试骨骼肌中HIF1α、Akt、p-Akt及骨骼肌蛋白合成和分解相关基因蛋白含量。结果 1)H组大鼠体重较C组持续下降,P组与C组间无显著性差异;干预初期H组(P组同)摄食量较C组显著下降,后期两组间无差异;(2)干预后,H组大鼠体质量和肌肉总量较C组和P组显著性降低,P组与C组间无差异;H组两肌肉湿重较C组显著下降;H组EDL的FCSA显著低于C组和P组;(3)H组EDL中HIF1α蛋白含量显著高于C组;H组和P组SOL中p-Akt/Akt比值显著低于C组;H组EDL中mTOR、4EBP1蛋白含量显著低于C组,atrogin1、MuRF1、beclin1蛋白含量及LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著高于C组,H组SOL中MuRF1蛋白含量显著高于C组和P组。结论 低氧所致的骨骼肌萎缩由低氧特异性因素诱发,表现为以快肌为主的骨骼肌蛋白合成减少和分解增加,而非低氧下摄食量减少引起。

饲粮蛋白质水平对肥育猪背最长肌嫩度及骨骼肌特异性蛋白-核转录因子κB信号途径的影响

本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及骨骼肌特异性蛋白-核转录因子κB(P94-NFκB)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50 kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2。3个处理分别采用12%、16%、20%理想蛋白质水平的饲粮,饲粮能量水平相同。正试期58 d,结束后屠宰取样,测定肌肉剪切力并利用实时定量PCR法测定猪背最长肌P94、NFκB、核转录因子抑制物(IκB)和CAST mRNA表达量。结果表明:1)饲粮蛋白质水平对背最长肌剪切力、P94、NFκB、IκB和CAST mRNA表达量有显著影响(P<0.05);随饲粮蛋白质水平升高,背最长肌剪切力、IκB和CAST mRNA表达量升高、P94和NFκB mRNA表达量降低。2)背最长肌剪切力与IκB(相关系数为0.513,P<0.05)、CASTmRNA表达量(相关系数为0.816,P<0.01)呈正相关。3)CAST与P94 mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.496,P<0.05),与IκB mRNA表达量呈正相关(相关系数为0.710,P<0.01)。4)P94与NFκB mRNA表达量呈正相关(相关系数为0.550,P<0.05),与IκB mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.518,P<0.05);IκB与NFκB mRNA表达量呈负相关(相关系数为-0.539,P<0.05)。结果提示:饲粮高蛋白质水平提高了猪背最长肌剪切力、CAST和IκBmRNA表达量,降低了肌肉嫩度和P94 mRNA表达量;猪背最长肌P94-NFκB信号途径在肌肉嫩度调控过程中发挥一定作用,但不是主要途径。

骨骼形态发生蛋白受体的研究进展

介绍了骨骼形态发生蛋白的结构和生物学功能;骨骼形态发生蛋白受体的种类、结构,信号传 递机制、生物学功能;骨骼形态发生蛋白15基因和骨骼形态发生蛋白受体IB基因与繁殖性能的关系。

骨骼肌蛋白代谢及其调控机制研究进展

骨骼肌是人体氨基酸和蛋白质的主要贮存、代谢场所。肌肉的丰度能反映机体蛋白质代谢的情况。而骨骼肌的质量主要取决于蛋白质合成代谢和分解代谢,两者又通过某些信号互相作用,共同组成一个网状调控系统,调控蛋白质代谢。分解代谢增强或者合成代谢减弱均可以使蛋白质代谢失平衡,从而导致骨骼肌蛋白质丢失而萎缩。骨骼肌的蛋白代谢网络较为复杂,因此本文系统性回顾骨骼肌蛋白质相关代谢信号的研究进展,现综述如下。

大鼠骨骼肌肌钙蛋白I与死亡及离体时间的相关性探讨

目的研究大鼠骨骼肌肌钙蛋白I(sTnI)在体和离体两种情况下的降解规律及其相互间的异同,探讨较晚期死后经过时间的推断方法。方法以大鼠骨骼肌组织为研究对象,利用免疫印迹(Westernblot)结合图像分析技术半定量检测不同死亡(离体)时间内大鼠sTnI的含量,观察其与死亡(离体)时间的关系及相互间的异同。结果大鼠sTnI的含量随死亡(离体)时间延长而逐渐下降,且与死亡(离体)时间的对数值均呈近似的线性关系,但在体情况下要比离体情况下降解慢。结论sTnI有望用于推断较晚期死后经过时间;sTnI在体与离体条件下的降解情况并不完全一致。