香豆素通过调控组蛋白去甲基化酶3和骨髓分化蛋白2改善脓毒症相关AKI的机制研究

目的探讨香豆素(Sco)通过调控组蛋白去甲基化酶3(JMJD3)和骨髓分化蛋白2(MD-2)改善脓毒症相关急性肾损伤(AKI)的作用机制。方法24只C57BL6小鼠根据随机数字表法分为对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+40 mg/kg Sco组和LPS+80 mg/kg Sco组。除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射LPS 10 mg/kg建立脓毒症相关AKI模型,LPS+40 mg/kg Sco组和LPS+80 mg/kg Sco组小鼠在造模成功后分别腹腔注射Sco 40 mg/kg和80 mg/kg,对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液2 mL/kg。采用HE染色和原位末端转移酶标记法染色检测小鼠肾脏组织损伤程度和细胞凋亡程度,ELISA法检测小鼠血清血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,Western blot法检测小鼠肾脏组织中JMJD3和MD-2蛋白表达水平。使用LPS(1μg/mL)处理人肾小管上皮细胞系HK-224 h,建立脓毒症细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+30μmol/L Sco组、LPS+60μmol/L Sco组、LPS+60μmol/L Sco+过表达对照组和LPS+60μmol/L Sco+过表达JMJD3组。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞中JMJD3和MD-2蛋白表达水平。结果与对照组小鼠相比,LPS组小鼠肾组织出现明显病理变化,部分肾小管变形,肾小管上皮细胞水肿,肾间质周围炎症细胞浸润,凋亡信号(棕褐色)增强,JMJD3和MD-2蛋白表达水平升高,血清中Scr、BUN水平均升高。而与LPS组相比,LPS+40 mg/kg Sco组和LPS+80 mg/kg Sco组小鼠肾脏组织以上病理变化明显改善,JMJD3和MD-2蛋白表达水平均降低,血清中Scr、BUN水平也均降低,并且LPS+80 mg/kg Sco组变化更明显。与对照组细胞相比,LPS组细胞凋亡水平升高,JMJD3和MD-2蛋白表达水平升高。而相较于LPS组,使用Sco处理后以上变化趋势发生逆转,且Sco浓度越高,趋势变化越显著。此外,过表达JMJD3后细胞凋亡水平升高,JMJD3和MD-2蛋白表达水平均升高。结论Sco通过抑制肾小管上皮细胞JMJD3和MD-2表达,减少细胞凋亡,从而改善脓毒症相关AKI。

骨髓分化因子88通过核因子-κB/活化蛋白-1信号通路调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨骨髓分化因子88(MyD88)在结直肠癌发生发展中的功能和潜在机制。方法在SW480细胞中稳定敲低MyD88。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell和划痕实验检测结直肠癌细胞的迁移能力;采用Transwell实验分析结直肠癌的侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析MyD88的潜在调控机制。结果实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot结果显示,本研究在结直肠癌细胞中成功敲低了MyD88的表达。结直肠癌细胞中MyD88的降低可以显著抑制细胞的生长和侵袭。进一步研究发现,在结直肠癌细胞中敲低MyD88可以显著抑制MyD88-NF-κB/AP-1信号通路的表达。结论MyD88基因在结直肠癌的发生发展中起着重要的作用,有望成为结直肠癌的潜在的诊断和预后生物标志物。

骨髓分化过程中的基因组分析

目的 为了研究骨髓中性粒细胞 (MPRO)在形态成熟过程中发生的基因表达的变化。方法 RNA分离和 3′ -末端差异显示法。

小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定

目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5～ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞 ,接种后 1 2～ 1 6d形成单层贴壁的成纤维状细胞。体外多向诱导分化鉴定分离的细胞 ,用传代的细胞进行生长曲线的测定、观察其接种贴壁率、检测细胞周期和超微结构。结果 体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力 ;MSCs倍增时间约为 3 8h ,传代后 1 2h贴壁达 90 %以上 ,细胞周期显示有 80 %细胞处于G0 G1 期 ,并用电镜照片显示其超微结构。结论 在本实验条件下 ,体外培养的MSCs具有多向分化潜能 ,体外生长稳定 ,传代后的细胞适应性强 ,增殖较快 ,超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点。

核因子-κB在黄芩甙诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用

目的研究核因子 κB(NF- κB)在黄芩甙诱导骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用。方法在无血清条件下 ,以中药单体黄芩甙作为主要诱导剂 ,诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞 ;同时以无血清培养基为对照组。采用免疫荧光细胞化学染色检测神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基P6 5核移位情况 ;蛋白质印迹 (Westernblot)检测细胞中NF-κB抑制蛋白 (IκBα)表达变化 ;原位末端标记 (TUNEL法 )染色评价细胞凋亡率。结果黄芩甙诱导后细胞形成较典型的神经细胞形态 ,同时表达多种神经细胞标记蛋白。对照组无类似情况 ,但出现P6 5由胞浆向胞核移位 ,细胞内IκBα表达水平显著降低 ,细胞凋亡率为 (2 8.2±6.1) % ;黄芩甙诱导后P6 5信号主要仍在胞浆中表达 ,细胞内IκBα表达水平降低程度较少 ,细胞凋亡率〔(12 .2± 2.8) %〕 ,也显著低于对照组 (P <0. 0 1)。结论黄芩甙可抑制NF κB的活化 。

骨髓间充质干细胞在糖尿病创面中向皮肤腺上皮的分化

背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,目前已证实其在急性创面中能够向皮肤组织细胞转化,但在糖尿病创面中的分化报道甚少。目的:观察糖尿病创面皮肤微环境中的骨髓间充质干细胞分化为皮肤附属器细胞的可行性。方法:全骨髓法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,传至第三四代细胞行5-BrdU标记。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,2周后在模型鼠背部制作圆形创面,取密度为1×109L-15-BrdU标记的骨髓间充质干细胞悬液1mL注射于创面边缘,分别于细胞移植后2,3周切取创面中央再生组织制备切片,行BrdU和角蛋白免疫组织化学染色。结果与结论:BrdU阳性细胞出现在表皮、真皮及皮下组织各层,部分阳性细胞位于皮脂腺及腺导管上皮中;连续切片中BrdU阳性细胞同时也表达角蛋白,以腺导管上皮多见。提示在糖尿病溃疡创面愈合过程中,骨髓间充质干细胞具有向皮肤附属器细胞分化的潜能。

不同诱导条件对人骨髓基质干细胞向内皮分化的影响

目的探讨不同诱导条件对人骨髓基质干细胞向内皮分化的影响。方法采用密度梯度离心法分离培养人骨髓基质干细胞,用荧光激活细胞分选法分析骨髓基质干细胞CD34、CD105和CD166的表达率;用免疫荧光细胞化学法观察骨髓基质干细胞在细胞因子(50μgL血管内皮细胞生长因子、5μgL碱性成纤维细胞生长因子、100mgL内皮细胞生长补充因子)、内皮条件培养基或与成熟兔主动脉内皮共培养5天时vWF或和Flk1蛋白的表达。结果分离培养的骨髓基质干细胞CD34表达率为4.16%±0.16%,与阴性对照(4.06%±0.23%)相比无统计学差异,CD105表达率为90.20%±2.35%,CD166表达率为82.30%±3.22%,均明显高于阴性对照(P<0.05)。诱导前骨髓基质干细胞不表达vWF和Flk1蛋白,经血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和内皮细胞生长补充因子等细胞因子联合诱导5天时,33.42%骨髓基质干细胞开始表达vWF蛋白;与成熟内皮共培养5天时,vWF染色仍为阴性,但25.71%骨髓基质干细胞开始表达Flk1;用内皮条件培养基培养5天时,骨髓基质干细胞vWF和Flk1染色均为阴性。结论细胞因子和成熟内皮细胞均能诱导骨髓基质干细胞向内皮分化,而内皮条件培养基不能诱导骨髓基质干细胞向内皮分化。

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化和脑内定位移植

目的了解骨髓基质细胞(MSC)在体外对抗氧化剂和生长因子等的反应及其脑内移植后的情况。方法体外培养成年大鼠MSC,用β巯基乙醇、BDNF、GDNF、CNTF、forskolin诱导分化,并将MSC植入成鼠大脑皮质,观察MSC在体内外环境中是否能够分化为神经细胞。采用流式细胞术鉴定MSC,免疫荧光染色法鉴定神经细胞。结果在本实验条件下,MSC未见被诱导成神经细胞,植入脑内的MSC能够存活并迁移,但也未见分化为神经细胞。结论MSC横向分化为神经细胞可能是多因素作用的结果,需要更多的实验对其横向分化和定向分化进行探索。

miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控人骨髓间充质干细胞成骨分化且促进骨质疏松

目的:探讨miRNA-338-3p在骨质疏松症进展中的作用及其对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响。方法:选择60例骨质疏松症患者为研究对象,另选同期60名非骨质疏松者作为对照组。检测两组血清miR-338-3p表达水平。采用RT-qPCR检测miR-338-3p、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)和I型胶原蛋白(collagen I)水平。Western blot检测miR-338-3p对RUNX2蛋白表达的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)测定法和茜素红染色评估miR-338-3p和RUNX2对成骨分化和矿化能力的影响;采用生物信息学和荧光素酶报告基因检测验证miR-338-3p和RUNX2之间的关系。结果:骨质疏松患者血清miR-338-3p水平相比对照组表达量明显上升(P<0.05),且其表达随着成骨诱导时间的延长而逐渐降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-338-3p表达情况影响OCN、OPN和Collagen I mRNA的水平(P<0.05)。与对照组相比,miR-338-3p过表达削弱了hBMSCs矿化能力和ALP活性(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实,RUNX2是miR-338-3p的直接靶点,miR-338-3p过表达降低了RUNX2蛋白及其mRNA的表达水平(P<0.05)。RUNX2过表达可逆转miR-338-3p对hBMSCs成骨分化的抑制作用。结论:miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控hBMSCs的成骨分化,从而促进骨质疏松的进展。

牙本质支架体外诱导兔骨髓干细胞分化

目的:探讨将人牙本质作为组织工程支架的可行性,采用不同的方式处理牙本质片,观察牙本质片处理后诱导兔骨髓基质干细胞贴壁附着生长的规律及成骨分化潜能。方法:将兔的骨髓基质干细胞分别接种于经机械去除前期牙本质加EDTA-柠檬酸脱矿处理(A组),标准根管预备-EDTA处理(B组)的牙本质片上,体外培养1周,扫描电镜观察细胞与牙本质片的附着情况,碱性磷酸酶、茜素红及Von kossa染色观察兔骨髓基质干细胞成骨分化。结果:兔骨髓基质细胞附着在2种方式处理的牙本质片上生长良好,贴附紧密。B组牙本质片上细胞碱性磷酸酶表达阳性率高达80%,茜素红、Von kossa染色观察到钙结节数量多于A组。结论:经标准根管预备-EDTA处理的人牙本质能有效促进骨髓基质干细胞增殖及成骨分化,可能成为一种理想的成骨生物支架,并为牙体牙髓疾病的治疗提供了新的思路。

未分化骨髓基质干细胞体外抑制淋巴细胞增殖反应的初步研究

目的:研究犬未分化骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)体外抑制淋巴细胞增殖的作用。方法:从犬骨髓组织中分离获取骨髓基质干细胞,体外培养至第二代,1×105细胞/孔BMSCs刺激异体淋巴细胞,观察淋巴细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2ug/mL)刺激淋巴细胞后,分别以1×102～5细胞/孔数量的异体BMSCs加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。分别以1×102～5细胞/孔数量的"第三者"BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。通透性隔离腔培养的BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果:BMSCs刺激同种异体淋巴细胞体外增殖作用不明显;BM-SCs可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖(P<0.05);"第三者"BMSCs可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05),抑制作用呈BMSCs细胞数量依赖性;隔离腔培养的BMSCs也可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05)。结论:犬未分化BMSCs在体外具有抑制淋巴细胞增殖的作用,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力。

骨髓干细胞向心肌细胞分化的研究现状

心肌细胞在生理和病理状况下存在细胞增殖现象。骨髓干细胞被认为是再生心肌细胞的来源之一。骨髓细胞不论是全髓细胞、造血干细胞 ,还是间质干细胞 ,体内移植都可向心肌细胞分化 ,在一定程度上改善心功能。体外诱导不仅可出现心肌细胞表型 ,还表达功能性受体。

全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞分化的调节作用

目的:观察全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞分化的调节作用。方法:将36只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术、去卵巢静止和去卵巢振动3个组。去卵巢手术后10周,去卵巢振动组大鼠经过1周适应振动治疗后,开始接受正式全身垂直振动治疗,每次振动15 min、频率为90 Hz,每天振动2次,每周7次。治疗7周时,用721分光光度计检测血清碱性磷酸酶和甘油三酯水平;常规HE染色观察左侧胫骨组织形态学;收集右侧股骨和胫骨骨髓细胞,一部分细胞用作碱性磷酸酶和油红O染色,另一部分细胞用作尼罗红(Nile Red)染色。结果:与假手术组比较,去卵巢静止组骨髓细胞碱性磷酸酶阳性染色细胞数目显著降低,而骨髓细胞Nile Red阳性染色细胞百分比和胫骨骨髓脂肪空泡数目显著增加;与去卵巢静止组比较,去卵巢振动组骨髓细胞碱性磷酸酶阳性染色细胞数目显著增加,而骨髓细胞Nile Red阳性染色细胞百分比和胫骨骨髓脂肪空泡数目显著下降。结论:全身垂直振动不仅增加去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞的成骨分化能力,而且降低去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞的成脂分化能力。

盘龙七片调控Toll样受体4-骨髓样分化因子88-核因子-κB通路保护佐剂性关节炎大鼠滑膜组织

目的研究盘龙七片通过调控Toll样受体4(TLR4)-骨髓样分化因子88(MyD88)-核因子-κB(NF-κB)信号通路保护类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织的作用机制。方法将50只SD大鼠以随机数字表法分为正常组,模型组,低、中、高盘龙七片组,每组10只,除正常组外,其余组均采用风、寒、湿环境结合弗氏完全佐剂注射的方式制备RA模型,RA大鼠模型制备成功后,低、中、高盘龙七片组分别灌胃给予盘龙七片溶液150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg,对照组与模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,连续灌胃处理15 d后,切片观察滑膜组织病理形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组大鼠滑膜组织细胞中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA以及肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测滑膜组织中NF-κB p65蛋白表达情况。结果与正常组相比,模型组滑膜组织可见明显变性坏死,滑膜处可见中度充血水肿,且有大量炎细胞并伴随轻度滑膜增生,与模型组相比,不同剂量盘龙七片处理后关节变性坏死情况明显改善,滑膜组织充血水肿情况减轻,炎细胞浸润情况极大的改善,且呈浓度依赖;模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1分别为(1.26±0.11)μg/L、(0.35±0.08)μg/L,显著高于正常组的(0.68±0.05)μg/L、(0.11±0.02)μg/L,滑膜组织中TLR4、MyD88、TRAF-6的mRNA相对表达水平分别为(2.56±0.21)、(3.83±0.26)、(2.78±0.23),显著高于正常组(1.00±0.02)、(1.01±0.02)、(1.00±0.01)(P<0.05),NF-κB p65蛋白磷酸化水平为(1.37±0.22),显著高于正常组(0.21±0.06)(P<0.05),与模型组相比,不同剂量盘龙七片组大鼠血清中TNF-α、IL-1水平显著降低(P<0.05),滑膜组织中TLR4、MyD88、TRAF-6的mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05),NF-κB p65蛋白磷酸化水平也显著降低(P<0.05)。结论盘龙七片通过抑制TLR4-MyD88-NF-κB信号转导通路,降低滑膜组织处炎症反应,改善滑膜细胞增生,从而保护滑膜组织。

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca^(2+)浓度的变化

背景: 单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。目的: 探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。方法: 分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和RealtimePCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果与结论: ①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P<0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20min时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P<0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。

基于BMP-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠BMSCs增殖和成骨分化的影响

目的基于BMPs-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用机制。方法制备固本增骨方含药血清;台盼蓝染色观察细胞生长情况;取P3代大鼠BMSCs分为空白血清组、5%、10%、20%、30%浓度含药血清组及传统诱导组,分别对各组大鼠BMSCs进行培养及成骨诱导,向6组加入相应培养液24 h后开始测量细胞计数,连续测量4天;成骨诱导2周后,进行碱性磷酸酶染色试剂盒说明书进行染色,光镜下观察各组细胞蓝紫色区域的密集程度;ELISA法检测COL-I、ALP、BGP、OPN蛋白的含量;Real-time PCR检测BMPs信号通路相关基因BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2表达。结果各组固本增骨方含药血清组在培养24h后比空白组及传统成骨诱导组OD值比较差异均具有统计学意义(P<0.05),并且20%含药血清组较5%、10%及30%含药血清组OD值比较差异具有统计学意义(P<0.05);碱性磷酸酶染色后镜下观察在浓度为20%时染色区域最密集;5%、10%、20%含药血清组与其他各组BGP、OPN、ALP、COL-I含量比较差异具有统计学意义(P<0.05),且20%含药血清组与5%、10%含药血清组比较差异具有统计学意义(P<0.05);20%含药血清组与其他各组BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2mRNA表达比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论固本增骨方能促进BMSCs的增殖,并且能促进成骨标志蛋白BGP、OPN、ALP、COL-I蛋白含量的增加,且在20%浓度为最佳,这个机制可能是激活了BMPSmad/RUNX2信号通路实现的。

冻存骨髓基质细胞体外成骨潜能的实验研究

目的观察冻存骨髓基质细胞(BMSC)的体外生长特点及诱导与非诱导条件下的成骨能力。方法取冻存11个月犬BMSC复苏后进行体外扩增培养,传代培养中加入10-8mol/L地塞米松、50 mg/L Vit C和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠进行诱导分化,观察细胞形态、细胞诱导前后增殖情况、细胞碱性磷酸酶(ALP)含量以及形成矿化结节能力的改变。结果冻存BMSC复苏后呈成纤维样表现,增殖力强。在诱导液的作用下冻存BMSC增殖性能降低,ALP活性增加,诱导5 d后可见矿化结节。结论冻存BMSC增殖能力强,经诱导后表现出明显的成骨活性,可作为骨组织工程的种子细胞。

基于生物信息学分析MYD88在泛癌中的差异表达和临床意义

目的通过生物信息学方法探索和揭示泛癌中MYD88的功能和分子作用。方法通过多种生物数据库和工具,从基因表达水平、预后、免疫细胞浸润等多个角度分析MYD88在泛癌中的分子作用。进一步选择5种癌症类型并收集癌组织样本,采用免疫组化技术对上述生物信息学分析结果进行验证。结果经生物信息学分析及免疫组化分析,在宫颈鳞癌与宫颈腺癌、胶质瘤、卵巢浆液性囊腺癌、多形性胶质母细胞瘤、胃腺癌、乳腺浸润癌组织中的MYD88表达水平高于正常组织(P<0.05),MYD88表达水平升高与部分癌症患者预后、免疫细胞浸润具有明显相关性(P<0.05)。与MYD88相互作用基因和共表达基因参与了核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)信号通路、NOD样受体(NOD-like receptor,NLR)信号通路等关键信号通路。另外,这些基因参与了天然免疫应答、炎症反应、信号转导、转录调控、细胞凋亡等多种生物过程。结论MYD88在多种癌组织中高表达,与患者预后存在相关性,有望成为多种癌症的新型生物标志物。

Toll样受体4通过转化生长因子β1参与增生性瘢痕形成的机制研究

增生性瘢痕是机体在创伤后过度修复的表现形式之一,其发病机制并不十分明确.最近有证据显示,成纤维细胞能在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的作用下,激活toll样受体4(toll like receptor-4,TLR-4),参与调节免疫/炎症反应.因此,探索了TLR-4在增生性瘢痕的产生中可能起到的作用.利用荧光定量PCR检测证实,在体外培养的原代增生性瘢痕成纤维细胞(hyperplastic scar fibroblast,HSFB)中TLR-4和骨髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)的表达高于正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast,NFB).用LPS处理NFB和HSFB 24 h,发现TLR-4、MyD88和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)、Ⅰ型前胶原在mRNA和蛋白质水平的表达均上调.MTT也证实LPS促进体外培养的HSFB的增殖效应强于NFB.然而,在HSFB中采用siRNA干扰MyD88后,再用LPS处理,与干扰对照组相比,MyD88、TGF-β1和Ⅰ型前胶原的表达均明显减弱.结果表明,在皮肤成纤维细胞激活TLR-4信号通路,能引起促炎细胞因子TGF-β1的产生,同时促进细胞增殖,而干扰MyD88,能抑制LPS刺激后这些细胞因子的表达.