多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的 :研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法 :应用cDNA芯片技术对 1 0例初诊多发性骨髓 (MM)患者和 1 0名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果 :在 2 0 4 8条基因中共发现差异表达基因5 6 6条。在MM中 2 37条表达增加 ,32 9条表达降低。结论 :MM的发生发展涉及多基因的改变 。

Klotho基因转染骨髓间充质干细胞移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的观察Klotho基因(抗衰老基因)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒介导Klotho转染至BMSC中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMSC中Klotho mRNA的表达。制备大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为正常对照组、模型对照组、增强型绿色荧光蛋白-BMSC组(EGFP-BMSC组)、EGFP-Klotho-BMSC组。细胞移植28天后多普勒超声检测心功能,荧光显微镜观察细胞存活及分布,HE染色观察心肌组织病理变化。Masson染色检测心肌胶原沉积含量和心肌纤维化程度。结果 Klotho转染BMSC后,BMSC中Klotho mRNA表达明显增多(P<0.05)。移植28天后超声心动图结果显示,与EGFP-BMSC组及模型对照组比较,EGFP-Klotho-BMSC组左心室射血分数(LVEF)提高(P<0.05)。EGFP-BMSC组及EGFP-Klotho-BMSC组心肌纤维化程度较模型对照组减轻(P<0.05),EGFP-KlothoBMSC组较EGFP-BMSC组心肌纤维化改善更为明显(P<0.05)。结论 Klotho基因联合BMSC治疗可进一步抑制心肌纤维化,减少心肌间质胶原沉积,改善心功能。

少量多次异基因骨髓移植的实验研究

目的：探讨少量多次异基因骨髓移植的ＧＶＨＤ反应。方法：采用不同少量异基因骨髓细胞的多次尾静脉注射。观察大小便，皮毛，体位及死亡率等ＧＶＨＤ反应一般表现。移植后不同天数进行体内混合淋巴细胞反应及嵌合体测定。外周血象及骨髓有核细胞按常规方法计数。半固体琼脂法进行骨髓ＣＦＵ－ＧＭ测定。肝、脾、小肠及皮肤病理学检查判断ＧＶＨＤ反应程度。外周血Ｌ６１５细胞及脾脏Ｌ６１５细胞比例判断ＧＶＬ作用。结果：一次性大剂量组ＧＭＨＤ反应表现明显，单纯多次异基因骨髓细胞移植的ＧＶＨＤ反应不明显，而少量多次骨髓移植组则ＧＶＨＤ反应强度界于两者之间，并且具有较好的造血恢复作用。在ＧＶＬ作用方面，一次性大剂量骨髓移植组产生较强的近期抗白血病作用，但多死于ＧＶＨＤ反应。少量多次骨髓移植１×１０６骨髓细胞及 １×１０６脾单个核细胞组抗白血病作用较强，３０ ｄ生存率达 ６０％，死亡原因主要为白血病。结论：少量多次骨髓移植可以减轻ＧＶＨＤ反应，保留部分ＧＶＬ作用。

川芎嗪促进同基因骨髓移植小鼠骨髓造血重建机制的探讨

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植(BMT)后小鼠骨髓中干细胞因子(stem cell factor,SCF)mRNA表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。BMT后统计小鼠存活率和计数脾集落形成单位(CFU-S),并采用RT-PCR方法从mRNA水平动态检测骨髓基质细胞中SCF的表达。结果表明:川芎嗪组小鼠在BMT后第10天CFU-S计数、第7、14、21天存活率及川芎嗪组干细胞因子的表达水平均显著高于对照组(p<0.01或p<0.05)。结论:川芎嗪能够促进骨髓造血细胞的恢复,改善骨髓微环境,促进骨髓造血重建。

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓细胞PECAM-1/CD31分子表达与造血重建的作用

本研究通过观察骨髓移植后小鼠骨髓中血小板内皮细胞间黏附分子 (PECAM 1/CD31)的表达水平变化及川芎嗪对其表达的调节作用 ,进一步探讨川芎嗪促进骨髓造血微环境修复、改善造血重建的作用机制。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组 ,单纯BMT对照组和川芎嗪治疗组 (骨髓移植 +川芎嗪 ) ,接受 7.5Gy60 Coγ射线一次性全身均匀照射 ,照射后进行同基因小鼠骨髓移植 ,并分别胃饲等量生理盐水与川芎嗪注射液 ,2次 /天。骨髓移植后第 7,14 ,2 1天 ,采用流式细胞术检测小鼠骨髓有核细胞表面CD31分子表达水平 ,计数外周血白细胞、血小板及骨髓有核细胞数 ,并做骨髓组织学检查。结果表明 :骨髓移植后第 7,14 ,2 1天川芎嗪治疗组的CD31表达水平 ,外周血白细胞、血小板和骨髓有核细胞计数以及骨髓细胞增生程度均高于骨髓移植对照组 (P <0 .0 1或P<0 .0 5 )。结论 :川芎嗪可以明显促进骨髓移植后骨髓有核细胞表面黏附分子CD31的表达水平 ,这可能是其促进造血重建的作用机制之一。

小鼠异基因骨髓移植γ线清髓性照射对骨髓内皮龛的损伤研究

本研究探索异基因骨髓移植清髓性γ线照射预处理对受鼠骨髓内皮的损伤程度。体外培养小鼠骨髓单个核细胞,经5-7天检测其表面标记、吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行CFSE标记。分析正常组、清髓性照射组、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)移植组及照射联合EPC移植组小鼠外周血中白细胞变化、骨髓内皮的改变及CFSE标记EPC的骨髓内分布。结果发现,培养细胞鉴定证实为CD31+CD133+CD45low/-,且具有吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1能力。小鼠清髓照射后外周血白细胞迅速减少,与正常组相比,有显著差异(p<0.05)。照射后3天,骨髓中大量出血,内皮细胞和基底膜间连接被损坏。清髓照射后输注CFSE标记EPC,18小时后小鼠骨髓中可见CFSE+细胞,其细胞量是正常小鼠单纯EPC输注组的58倍(p<0.05)。结论:移植清髓照射预处理引起严重骨髓内皮龛损伤,该损伤驱动外源性EPC的归巢。

异基因骨髓移植后嵌合状态的研究进展

骨髓移植是许多血液系统疾病和免疫缺陷性疾病的有效治疗措施 ,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入状况即嵌合状态的形成有关。由于造血干细胞输入量、供者和受者T细胞量、预处理方案以及移植时患者病情等因素的影响 ,可以形成不同形式的嵌合状态。如果受者的骨髓或外周血中完全是供者的细胞 ,则形成完全的供者嵌合状态 (CC) ;当检测到供者和受者两种细胞成分时 ,则为混合嵌合状态 (MC)。不同形式的嵌合状态 ,以及嵌合状态形式的不同演变趋势 ,其临床意义各不相同。检测嵌合状态的方法有多种 ,包括微卫星检测、染色体核型分析、血型转换、红细胞抗原、限制性片段长度多态性、可变数目串联重复序列以及现在最常用的PCR法。

异基因大鼠骨髓间充质干细胞成骨效应的初步观察

目的观察异基因大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的成骨效应。方法将BN品系大鼠来源的MSCs(A组)和经成骨诱导的MSCs(B组)分别与其松质骨制备的脱钙骨基质(DBM)构建组织工程骨,然后分别移植到F344品系大鼠肌袋内,以空白DBM作为对照(C组)。术后6、12、18周通过X线、HE染色和血清碱性磷酸酶检测观察移植物的成骨效应。结果术后X线显示:A和B组在12周时才出现云雾状骨块影像,边界模糊,而C组未显像;18周A和B组骨块显影较12周时明显清晰,C组有云雾状骨块影像。HE染色显示:所有动物6周时均有炎症细胞浸润,未见新生骨小梁;12周时炎症细胞减少,A和B组的新生骨小梁较C组明显增多;18周时炎症细胞消失,A和B组骨小梁较C组明显趋于成熟。血清碱性磷酸酶检测显示:各组6周最低;12周数值最高,其中B组高于A组,C组明显偏低;18周较12周降低,B组和A组仍远高于C组。结论由未诱导的和经成骨诱导的异基因MSCs分别构建的组织工程骨均具有异位成骨能力。提示异基因MSCs可作为种子细胞构建异基因组织工程骨。

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的:建立一个稳定可靠的异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT)急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法:以雄性C57BL/6(H-2b)为供鼠,雌性BALB/C(H-2d)为受鼠,受鼠致死性全身照射(total body irradiation,TBI)(8.0Gy)预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果:单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75%的小鼠长期存活(>30d)。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5:1或1:1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内(8～15d)观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论:建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5:1或1:1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。

高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究(英文)

本研究探讨高压氧(HBO)在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL/6受鼠注入供鼠BALB/c骨髓与脾淋巴细胞的混合液,分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达,用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明:HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO和CsA+MTX可明显降低脾组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达(p<0.05);HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组(p<0.05),但高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA+MTX组(p<0.05)。结论:高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤,其抗aGVHD的作用机制与调节促炎/抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。

同种异基因小鼠骨髓移植后脾细胞的动力学研究

本研究建立同种异基因小鼠骨髓移植模型,监测移植后脾细胞的动力学变化,了解移植后外周免疫器官的免疫重建。供鼠为C57BL/6小鼠,受鼠为BALB/c小鼠。将受鼠分为单纯照射组(R组)、照射+输注骨髓单个核细胞组(B组)、照射+输骨髓单个核细胞+输脾单个核细胞组(S组)。移植后观察小鼠体重、体位、活动性、毛发、腹泻及生存期,每周检测外周血白细胞及血红蛋白,于移植后第2、7、14、27、60天计数S组小鼠脾脏单个核细胞数,检测S组小鼠脾脏单个核细胞中CD3+、CD4+、CD8+、B220+及CD11c+细胞的相对计数,濒死前行肝、小肠、皮肤病理检查。结果显示:S组小鼠中89%于移植后第6-78天死于aGVHD。移植后脾脏单个核细胞迅速下降,于移植后第2天降至最低点,持续至第7天,之后逐渐回升,第14天升至移植前水平;CD8+细胞和B220+细胞于移植后第2天基本降至最低点,CD8+细胞恢复最快,在第7天接近移植前水平,且大多为供者型,而B220+细胞恢复最慢,从第2-14天持续低水平,之后逐渐回升,但直至第60天仍未恢复至移植前水平;CD3+细胞和CD4+细胞降低缓慢,于第7天开始出现少量供者型细胞,总的比例逐渐下降,至14天降至最低点,之后逐渐回升,第60天时均恢复至移植前水平;CD11c+细胞移植后除第14天升高外,其它时间点比例变化不明显,也是由受者型逐渐向供者型转化。结论:C57BL/6为供体,BALB/c为受体并给予7.5Gy60Coγ清髓的预处理条件下,输注骨髓单个核细胞1×107,脾单个核细胞1×107建立同种异基因移植模型,移植后脾细胞呈明显的动力学变化,CD8+细胞重建最快,其次为CD3+、CD4+细胞,B220+细胞重建最慢。

非亲缘异基因骨髓移植病人肝静脉闭塞病的护理

造血干细胞移植后并发肝静脉闭塞病 (VOD)是造血干细胞移植后与预处理有关的危及生命的严重并发症。根据骨髓移植及VOD的临床特征 ,阐述了异基因骨髓移植预处理护理、VOD预防的护理、VOD发生时的护理及心理护理等。

骨髓间充质干细胞对大鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：从大鼠骨髓中分离培养问充质干细胞，通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。通过混合淋巴细胞培养（MLR）检测MSCs体外对T细胞增殖的影响。建立大鼠GVHD模型（SD—Wistar），对其进行allo—BMT的同时，共移植不同数量供者源性的MSCs，观察受体大鼠的临床表现、绘制Kaplan—Meier生存曲线，并通过病理分析，综合评价MSCs，对allo-BMT后GVHD的影响。结果：在混合淋巴细胞培养体系中加入与反应淋巴细胞同源的MSCs，能够抑制T细胞的增殖，不同MSCs浓度组之问存在显著性差异（P〈0．01）。异基因骨髓移植时，供鼠MSC与T细胞比例为1：5、2：5共输注时，能推迟受鼠GVHD的发生时间，延长生存期，但并未避免GVHD的发生；当比例为1：1时，只有20％的受鼠发生了慢性GVHD反应，1—2周后逐渐缓解，并得到了长期生存，其余80％大鼠均未出现GVHD反应而长期生存。结论：大鼠MSCs不仅在体外能够抑制T细胞的增殖，体内共移植骨髓和高数量的MSCs也可以降低GVHD的发生率和严重程度，并延长受鼠的生存时间。本研究结果为临床GVHD的防治提供了新的思路。

非亲缘异基因骨髓移植后并发严重肝静脉闭塞病和Ⅲ度房室传导阻滞的诊治

目的 探讨非亲缘异基因骨髓移植后严重肝静脉闭塞病 (VOD)和Ⅲ度房室传导阻滞 (AVB)并发症的临床表现和治疗措施。方法 1例非亲缘异基因骨髓移植患者 +36天发生严重VOD ,+129天发生Ⅲ度AVB。予肝素钠、前列腺素E1 脂质微球治疗 ,以及安置人工心脏起搏器。结果 患者抢救成功 ,已存活17个月 ,恢复情况良好。结论 VOD可在骨髓移植 +20天以后出现 ;低剂量肝素和前列腺素E1 防治严重VOD有效 。

STR基因座在异基因骨髓移植植活诊断中的应用研究

目的 :探讨多个 STR基因座在异基因骨髓移植植活诊断中的应用。方法 :分别复合扩增各病例组常染色体 1 3个STR基因座和 Amelogenin基因座 ,以及Y染色体 6个 STR基因座。扩增产物进行 Gene Scan扫描 ,Genotyper分型。结果 :病例 1、2、3移植后呈完全嵌合状态 ,提示移植成活。病例 4在第一次移植未成活后 ,行二次移植后呈完全嵌合状态。结论 :常染色体 1 3个 STR基因座可以很好地应用于异基因骨髓移植植活诊断的检测。Y- STR基因座做为植活诊断的证据具有一定的局限性。

非血缘供者异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病

探讨非血缘供者异基因骨髓移植对慢性粒细胞白血病的治疗 ,并对移植相关并发症作了详细观察和处理。预处理方案为标准 Bu Cy,马利兰 (Bu) 4 mg/(kg· d)× 4;环磷酰胺 (Cy) 6 0 mg/(kg· d)× 2。2例供者均来自台湾慈济骨髓捐赠中心 ,HL A基因配型 (SSOP法 )与患者完全配合。采髓量分别为 12 30 m l和 10 10 ml,其中植入的单个核细胞为 2 .13× 10 8/kg和 2 .38× 10 8/kg;CD34+细胞为 2 .3× 10 6 /kg和 2 .8× 10 6 /kg;CFU- GM4.6× 10 5个 /kg和 5 .3× 10 5个 /kg,BFU- E1.2× 10 5个 /kg和 1.7× 10 5个 /kg,CFU- GEMM3.6× 10 5个 /kg和 4.5× 10 5个 /kg。移植物抗宿主病的预防采用环胞素 A+氨甲蝶呤 +人体丙种球蛋白。结果 :在移植后 + 2 4和 + 16天患者中性粒细胞恢复达≥ 0 .5× 10 9/L,在 + 6 4和 + 45天血小板≥ 2 .0× 10 9/L,+ 30天骨髓染色体核型分析 ,2例均达 90 %以上供者嵌合 ,+ 10 0天达完全嵌合 ,Ph1染色体 (- ) ,血型转变为供者血型 ,DNA可变数目重复序列检测 (VNTR)证实供者源造血重建。结论 :HL A相合非血缘异基因骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病获得成功 ,重建了患者造血功能 ;移植相关并发症的及时发现和正确处理是保证移植成功的重要因素。