骨髓间充质干细胞外泌体在高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良模型中的修复作用

目的 明确骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-Exo)对高氧诱导的大鼠支气管肺发育不良(BPD)模型的修复作用。方法 将新生4 d的Sprague Dawley(SD)大鼠吸入85%高氧建立高氧肺损伤模型。分为空气对照组、高氧组、高氧+PBS组和高氧+Exo组4组。使用BMSCs-Exo腹腔注射1周后处死SD大鼠,取肺组织进行石蜡包埋,分别进行HE染色,辐射状肺泡计数(radial alveolar counts, RAC),Masson染色、免疫组化染色和TUNEL染色。ELISA和Real time-PCR(qPCR)检测血清和肺组织蛋白白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、组织金属蛋白酶-9(MMP-9)及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的表达。结果 动物模型中,HE染色后对各组肺泡进行统计学分析显示,高氧+Exo组的肺泡数量显著高于高氧组及高氧+PBS组(P<0.001)。Masson染色后对蓝色胶原纤维所占面积百分比进行定量分析显示,高氧+Exo组胶原纤维所占面积百分比显著低于高氧组和高氧+PBS组(P<0.001)。免疫组化染色示高氧+Exo组的Ki-67和Bcl-2阳性细胞数量较高氧组和高氧+PBS组显著增高(P<0.05),而Bax阳性细胞数量较以上两组显著降低(P<0.001)。TUNEL染色检测凋亡的肺泡上皮细胞,高氧+Exo组显著低于高氧组和高氧+PBS组(P<0.001)。ELISA和qPCR检测显示,高氧+Exo组相较于高氧组和高氧+PBS组的IL-1β、TNF-α、MMP-9显著降低(P<0.001),而VEGF-A表达显著增高(P<0.001)。结论 BMSCs-Exos在肺发育不良模型干预中能抗高氧诱导的细胞凋亡,促进肺上皮细胞发育和组织修复。

骨髓间充质干细胞外泌体对神经病理性大鼠镇痛、病理及anx1-Src-NMDAR-2B的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对神经病理性大鼠镇痛作用、病理形态及Panx1-Src-NMDAR-2B的影响。方法 30只SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组,模型(MO)组,BMSCs外泌体(BE)组,各10只,对MO组、BE组采用坐骨神经慢性压迫性损伤建立神经病理性大鼠模型,NO组不建立该模型,建模成功后,对BE组鞘内注射0.5 mL 200 mg/L的BMSCs外泌体,NO组、MO组同期鞘内注射同体积生理盐水,用自发疼痛行为学评分、热痛阈值、机械疼痛阈值评价镇痛作用,苏木精-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态,免疫印迹法检测Panx1-Src-NMDAR-2B蛋白表达。结果 NO组、MO组、BE组建模成功后、给药1周末、给药2周末自发疼痛行为学评分、热痛阈值、机械痛阈值差异均有统计学意义(P<0.05);NO组脊髓组织形态正常,MO组出现明显变化,与MO组相比,BE组病理形态明显改善;NO组、MO组、BE组脊髓组织Panx1蛋白表达分别为0.96±0.06、2.36±0.21、1.54±0.16(F=20.270,P<0.01),Src蛋白表达分别为1.24±0.12、2.29±0.24、1.61±0.19(F=12.370,P<0.001),NMDAR-2B蛋白表达分别为1.25±0.11、2.32±0.26、1.59±0.18(F=11.990,P<0.001),NO组、MO组、BE组脊髓组织Panx1、Src、NMDAR-2B蛋白表达异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs外泌体对神经病理性大鼠具有显著疗效,具有显著的镇痛作用,并可有效改善大鼠病理形态,抑制Panx1-Src-NMDAR-2B通路表达。

丹酚酸B体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的观察丹酚酸B(SalB)干预体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs,对其进行分组诱导:SalB组(终浓度为250μg/L)、5-氮胞苷组(终浓度为10μmol/L)、SalB联合5-aza组(终浓度分别为250μg/L与10μmol/L),诱导24 h后继续培养4周,观察其形态学变化,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4、Desmin和a-actin mRNA的表达。结果诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT,与5-aza组相比,SalB组cTnT表达较低,SalB联合5-aza组cTnT表达升高;实时荧光定量RT-PCR结果显示各组均表达心肌分化早期基因,SalB联合5-aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他两组。结论SalB可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,其与5-aza联合诱导可明显提高MSCs向心肌细胞分化的能力。

丹酚酸B体外干预骨髓间充质干细胞分化过程中cTnT的表达

[目的]观察丹酚酸B(SalB)体外干预骨髓间充质干细胞(MSCs)后细胞形态及心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[方法]培养、纯化及鉴定MSCs,用SalB、5-氮胞苷组(5-aza)、SalB联合5-aza(SalB+5-aza)分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[结果]诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT。[结论]SalB在体外定向诱导MSCs分化为心肌细胞的过程中发挥了一定的作用。

体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞中NF-κB的表达改变

目的 研究核因子 κB(NF κB)在体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的作用。方法 在无血清条件下 ,以2 巯基乙醇 (2 ME)作为主要诱导剂 ,诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞 ;同时以无血清培养基为对照组。采用免疫细胞化学染色检测神经细胞标记蛋白表达和NF κB亚基P6 5核移位情况 ;蛋白质印迹 (WesternBlot)检测细胞中IκBα表达变化。结果 2 ME诱导后细胞形成较典型的神经元形态 ,同时表达多种神经元标记蛋白。对照组无类似情况 ,但是出现P6 5由胞浆向胞核移位 ,IκBα表达水平显著降低 ;2 ME诱导后P6 5信号主要仍在胞浆中表达 ,细胞内IκBα降低程度较少。结论 2 ME可以抑制NF κB的活化 ,在骨髓基质细胞诱导分化为神经元样细胞过程中可能起到一定的作用。

长期递增负荷跑台对大鼠骨髓Pro B细胞、Pre B细胞发育的影响

目的:探讨运动性免疫失衡对骨髓B细胞分化、发育的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠128只,随机分成绝对安静组(Absolute control,C)组,运动前安静组(Control,A)、运动后即刻组(ImmediateI,)、运动后3h组(3 Hours,3H),进行6周递增负荷跑台运动,分别在第0、2、46、周用流式细胞术检测其骨髓中Pro B、Pre B细胞数量及凋亡率。结果:六周递增负荷运动过程中,在第0周pro B、pre B细胞数量及凋亡率均没有显著性变化。第2周J组,pro B数量呈显著性下降(P<0.05),pre B呈非常显著性下降(P<0.01),3H组基本恢复到A组(P>0.05)。4周J组6、周J组pro B、pre B呈显著性下降(P<0.05),3H组基本恢复到A组,而同一时相的凋亡率变化则呈相反趋势。结论:提示六周递增运动过程中,机体根据运动需要,通过改变凋亡率,进而改变早期发育中B细胞的数量百分比,以求尽可能维持免疫稳态;并发现pre B细胞对运动负荷更敏感,易受运动的刺激而发生凋亡,细胞数量百分比显著性下降。

系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育

目的 :研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系。方法 :用Whitlock Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞 ,继而检测B细胞系细胞对脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况。结果 :用Whitlock Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞。经LPS刺激后 ,雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似 ,都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA抗体 ,但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感。结论 :Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响 ,提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性 ;并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除 ,可能是产生自身抗体的内在原因之一。

丹酚酸B诱导体外培养大鼠骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的研究

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞的体外培养及丹酚酸B(SalvianolicacidB)诱导其向心肌样细胞分化的可能。犤方法犦取大鼠股骨及胫骨干骨髓基质细胞(MSCs)培养,保留贴壁细胞进行传代;免疫细胞化学行肌动蛋白抗原、肌钙蛋白T抗原染色;观察丹酚酸B对骨髓基质细胞向心肌细胞分化的影响。犤结果犦大鼠骨髓基质细胞在形态上呈贴壁集落生长,具有成纤维细胞样外观。丹酚酸B加入5-氮胞苷诱导组后细胞死亡较少,长方形、多角形细胞明显增多。犤结论犦丹酚酸B能够促进体外诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞的分化。

长期递增负荷运动对调控骨髓B细胞发育分化的E2A、EBF、PAX5的影响

目的:观察运动性免疫失衡对调控骨髓早期B细胞分化发育的特异性转录因子的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠128只,随机分为绝对安静组(Absolute control,简称AC组),运动前安静组(Control,简称A组)、运动后即刻组(Immediate简称J组)、运动后3h组(3Hours,简称3H组),进行6周递增负荷跑台运动,分别在第0、2、4、6周末用实时荧光定量PCR、Western Blot或脱钙股骨免疫组化检测其骨髓中转录因子E2A、EBF、PAX5的蛋白及基因表达。结果:6周递增负荷运动中,在第0周,各组间E2A、EBF、PAX5蛋白表达均无显著性差异(P>0.05),而J组的EBF基因表达已呈显著性下降(P<0.05);第2周,与A组相比,J组E2A、EBF蛋白表达均显著性下降(P<0.05),而PAX5蛋白仅3H组呈显著性上升(P<0.05),并且3H组仅EBF基因表达具显著性低下(P<0.05);第4周,J组EBF蛋白有非常显著性下降(P<0.01),3H组有显著性上升(P<0.05),EBF、PAX5基因表达呈显著性下降(P<0.05);第6周,PAX5蛋白在3H组有显著性上升(P<0.05)。EBF,PAX5与Pro B、Pre B数量百分比之间呈较高正性相关系数(EBF蛋白表达与Pro B、Pre B的相关性分别为0.82、0.89;PAX5蛋白表达与Pro B、Pre B的相关性分别为0.81、0.87;EBFmR-NA与Pro B、Pre B的相关性分别为0.89、0.92)。结论与建议:1)6周递增负荷运动过程中,E2A蛋白受运动的影响,波动幅度较小,EBF、PAX5则波动幅度较大。EBF、PAX5与骨髓pro B、pre B细胞数的相关度再次提示转录因子EBF、PAX5对发育中pro B、pre B细胞数量起主导调控作用。2)E2A、PAX5的蛋白与基因表达不同步,提示基因表达对蛋白质合成只是具有指导性合成的作用,还与合成酶的活性、合成底物的充足与否等多种因素有关,此外,还可能涉及基因转录后调控机制,有待进一步研究证实。3)EBFmRNA在WK0呈现波动,提示EBF基因的转录对运动刺激更为敏感,并发现EBF比上级调控因子E2A和下游调控因子PAX5对B细胞发育的主导调控作用更加关键。

骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化的体外研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞( marrow stromal stem cells,MSCs)向神经细胞定向分化中神经蛋白分子的表达情况。 方法 取第5～7代体外培养Wistar大鼠MSCs,以0 .5μmol/ L全反式视黄酸( all- trans retinoidacid,ATRA)预诱导2 4 h后,换用改良神经细胞培养基( modified neuronal medium,MNM)继续培养。在ATRA作用2 4 h及MNM作用2、6、9、18及36 h,免疫组织化学检测巢蛋白( Nestin)、神经元特异性核心抗原( neuron- specificnuclear protein,Neu N)、微管相关蛋白2 ( microtubule- associated protein 2 ,MAP- 2 )和胶质纤维酸性蛋白的表达情况。 结果 ATRA和MNM作用后,MSCs呈典型神经元样,伸出较多的突起和分支,形成网络。Nestin最先表达,ATRA作用2 4 h出现,Neu N其次,MNM作用2 h检测到,MAP- 2最晚,MNM作用9h检测到。Nestin在MNM作用18h后表达最强,其阳性率为92 .3%±3.4 % ;36 h后表达明显减弱,阳性率仅为12 .3%±3.4 % ,而其它标志蛋白则持续表达。 结论 ATRA和MNM能促进MSCs向神经前体细胞和神经元转化,神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。

丹酚酸B抑制氧化应激引起骨髓间质干细胞凋亡的研究

目的:观察丹酚酸B(Sal B)对氧化应激介导骨髓间质干细胞(BMSCs)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:大鼠BMSCs培养鉴定后分为5组:空白对照组、氧化应激组、低浓度Sal B+H2O2组、中浓度Sal B+H2O2组和高浓度Sal B+H2O2组。应用MTT、流式细胞仪(FCM)及Hoechst标记的方法检测Sal B对氧化应激介导的细胞活性下降以及凋亡效应的影响;通过DCF荧光染色的方法检测过氧化氢及Sal B对细胞内活性氧生成的影响;用Western blotting的方法检测p-ERK1/2表达情况。结果:MTT结果显示不同浓度的Sal B共处理BMSCs 24 h能够提高氧化应激情况下的细胞活性,其中中浓度组的作用更为明显。Hoechst标记以及FCM检测的结果表明:10μmol/L Sal B处理能够提高细胞活性,减少凋亡数。正常组细胞的DCF阳性细胞率为28.7%±8.1%,经500μmol/L H2O2刺激24 h后,阳性细胞数急剧上升,高达86.9%±12.4%。而10μmol/L Sal B处理组的上升不明显,仅有42.1%±10.8%。由此可见,Sal B处理可以减少细胞内活性氧的生成;细胞在氧化应激的条件下p-ERK1/2在15 min内开始上调,持续120 min。而这种上调经10μmol/L Sal B处理可以有效降低,同时Sal B可以降低细胞基础的p-ERK1/2表达。结论:Sal B增强BMSCs抗氧化应激能力从而减少H2O2刺激引起的细胞凋亡,其保护机制可能与参与调节凋亡相关信号通路MEK/ERK1/2和抑制细胞内活性氧生成有关。

递增负荷运动对大鼠早期B细胞发育数量及凋亡情况的影响

目的:探讨运动性免疫失衡对早期B细胞发育及调节体系的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠128只,随机分成绝对安静组(AC)组,运动前安静组(A)、运动后即刻组(J)、运动后3H组(3H),进行6周递增负荷跑台运动,分别在第0、2、4、6周用四色流式细胞术检测大鼠早期immature B、mature B细胞群数量及凋亡情况。结果:0周:各组间immature B、mature B细胞群数量及凋亡情况均无显著性差异(P>0.05);2周,与A组相比,J组immature B、mature B数均呈显著性下降(P<0.05),3H组均显著性上升(P<0.05),而J组immature B细胞凋亡率呈显著性上升(P<0.05),mature B细胞凋亡率则呈显著性下降(P<0.05);4周:immature B细胞数在J组呈显著性下降(P<0.05),而mature B细胞数在3H组呈显著性上升(P<0.05),J组immature B细胞凋亡率呈显著性上升(P<0.05);6周:J组仅mature B细胞数呈显著性下降(P<0.05),仅immature B细胞凋亡率J组呈显著性上升(P<0.05)。结论:1)提示六周递增负荷运动中,机体根据运动需要,通过改变凋亡率,进而促成早期发育中B细胞的数量百分比的改变,以求尽可能维持免疫稳态,缓解运动性免疫失衡;2)联系前期对Pro B,Pre B细胞数量及凋亡率的影响,本研究提示随训练时间的延长,运动负荷的增强,运动应激对mature B凋亡率的影响却是渐趋减弱的;3)结合前期研究成果,提示6周递增负荷运动可能通过代偿机制促使存活的Pre B细胞更多的分化成为mature B淋巴细胞,以适应机体大量耗能的需要。

骨髓间充质干细胞来源的外泌体通过miR-335调控NF-κB通路并减轻大鼠肺缺血再灌注损伤

本文旨在探讨骨髓间充质干细胞来源的外泌体(exosomes derived from bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs-EXO)对大鼠肺缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusioninjury,IRI)的影响及miR-335在其中的作用及机制。通过左肺夹闭60min、开放180 min建立大鼠肺IRI模型。Sprague-Dawley大鼠40只随机分为假手术组(sham)、IRI组、IRI+PBS组、IRI+EXO组和IRI+inhibitor-EXO组(n=8)。Sham组大鼠仅开胸,但不建立肺IRI模型;IRI组建立肺IRI模型,无其他任何处理;其它3组建立肺IRI模型后,于再灌注前分别给予PBS、无任何处理的BMSCs-EXO和经miR-335抑制剂处理的BMSCs-EXO。实验中进行血气分析;再灌注结束后检测肺组织湿/干重比(wet/dry ratio,W/D),以及白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;电镜下观察线粒体并记录Flameng评分;光镜下观察肺组织病理学,记录肺损伤评分(lung injury score,LIS);TUNEL法检测细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);RT-qPCR检测miR-335表达,Westernblot检测caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9、NF-κB蛋白表达。结果显示,再灌注后,与sham组相比,IRI组和IRI+PBS组氧合指数、pH、碱剩余(base excess,BE)显著降低,而与IRI+PBS组相比,IRI+EXO组氧合指数、pH、BE显著升高,与IRI+EXO组相比,IRI+inhibitor-EXO组氧合指数、pH、BE显著降低(P<0.05)。与sham组相比,IRI组W/D、IL-1β、TNF-α、MPO、MDA、LIS、AI、Flameng评分及caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleavedcaspase-9蛋白表达显著升高,NF-κB蛋白表达降低,SOD和miR-335表达显著降低(P<0.05),但IRI组和IRI+PBS组相比无显著差异。与IRI+PBS组相比,IRI+EXO组W/D、IL-1β、TNF-α、MPO、MDA、LIS、AI、Flameng评分以及caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9蛋白表达显著降低,NF-κB蛋白表达升高,SOD和miR-335表达显著升高(P<0.05)。与IRI+EXO组相比,IRI+inhibitor-EXO组中上述指标的变化均反转,但仍优于IRI+PBS组(P<0.05)。上述结果表明,BMSCs-EXO能够上调miR-335,维持线粒体结构稳定,激活NF-κB通路并减轻大鼠肺IRI。

髓外病变和调节T细胞对多发性骨髓瘤嵌合抗原受体T细胞治疗疗效的影响

目的探讨髓外病变(extramedullary diseases,EMD)和调节T细胞(regulatory T cells,Tregs)对靶向B细胞成熟抗原(B cell mature antigens,BCMA)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR⁃T)治疗多发性骨髓瘤(relapsed/refractory multiple myeloma,RRMM)疗效的影响。方法选取2019年6月至2021年9月于安徽医科大学第二附属医院血液科、安徽医科大学第一附属医院血液科、中国科学技术大学附属第一医院血液科接受BCMA⁃CAR⁃T治疗的24例RRMM患者为研究对象,输注BCMA⁃CAR⁃T细胞后观察和监测治疗反应和毒性;比较有无EMD以及Tregs水平高低组患者的总体缓解率(overall remission rate,ORR)、持续缓解时间(duration of response,DOR)、无复发生存期(relapse⁃free survival,RFS)和总生存期(overall survival,OS)。结果RRMM患者输注BCMA⁃CAR⁃T细胞2个月内,ORR为87.5%,其中无EMD患者的ORR优于EMD患者(P=0.038),Tregs水平高低不影响患者的ORR(P=0.876);EMD及Tregs水平异常增高均降低患者的中位DOR(P=0.004,0.001)。EMD患者的OS率和RFS率均低于无EMD患者(60.0%vs 84.2%,P=0.013;40.0%vs 57.9%,P=0.007)。Tregs水平异常增高患者的OS率与Tregs水平正常或较低患者比较差异无统计学意义(P=0.077),但RFS率明显降低(40.0%vs 77.8%,P=0.011)。单因素Cox回归分析结果显示,有EMD患者的OS和RFS均较无EMD患者短(HR=8.465,95%CI:1.150-62.315,P=0.036;HR=5.569,95%CI:1.332-23.285,P=0.019),Tregs水平异常增高患者的RFS也较Tregs水平正常或较低患者短(HR=8.806,95%CI:1.088-71.282,P=0.017)。有无EMD组及Tregs水平高低组患者在BCMA⁃CAR⁃T细胞治疗中总体不良事件的发生率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论有EMD的RRMM患者,BCMA⁃CAR T细胞治疗疗效及生存均较无EMD患者差,异常Tregs可能是其复发的根源之一。

树突状细胞来源外泌体通过NF-κB通路影响内皮细胞致促炎因子的变化

目的探讨来源于树突状细胞(DCs)的外泌体对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子的作用和机制。方法从C57BL/6J小鼠中分离获得骨髓树突状细胞(BMDCs)并培养,采用超速离心法分别从BMDCs及经脂多糖(LPS)诱导成熟的BMDCs培养基中分离获得外泌体、并经电镜扫描及免疫印迹法(WB)验证;构建CD63-GFP慢病毒载体并转染BMDCs细胞,Transwell共培养BMDCs细胞与HUVEC、并用外泌体处理细胞;应用ELISA法检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的浓度,蛋白质印迹法(Western blot)测试p100和p105的磷酸化水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测试TNF-α和IL-6的mRNA表达水平,利用免疫荧光技术检测HUVEC摄取外泌体的情况。结果激光共聚焦显微镜观察显示,HUVEC能摄取BMDCs来源的外泌体;通过LPS诱导的成熟和未成熟的BMDCs外泌体中的IL和TNF水平无统计学差异;BMDCs与HUVEC共同培养的培养基中IL-6和TNF-α的浓度和p100和p105的磷酸化水平比单纯培养HUVEC培养基中的表达明显升高(P<0.05),但BMDCs外泌体被外泌体抑制剂GW4869抑制后,TNF-α和IL-6含量及p100和p105的磷酸化水平明显下降(P<0.01);共培养联合NF-κB抑制剂BAY11-7082组中的TNF-α和IL-6含量及p100和p105磷酸化水平比单纯HUVEC与BMDCs共培养组明显下降(P<0.001)。结论BMDCs来源的外泌体能够被HUVEC摄取,并促进HUVEC炎症因子TNF-α和IL-6升高,其机制可能与BMDCs来源的外泌体影响NF-κB信号通路中p100以及p105的磷酸化水平有关。

BMSCs分泌的miR-125b通过外泌体途径对体外成骨分化的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法提取BMSCs原代,通过流式细胞仪进行其表面抗原(CD45、CD90)的鉴定来确定纯度,分别进行成骨诱导,茜素红染色检测成骨效果;成脂诱导,油红染色检测成脂效果。检测P3代上清液外泌体标志性蛋白CD9、CD63的表达量,电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、21天进行qRT-PCR测定外泌体内miR-125b及细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runx2的mRNA的表达量。BMSCs侵染miR-125b模拟物及模拟物阴性对照剂,miR-125b抑制剂及其抑制物阴性对照剂,转染后验证转染效率。转染后五组(前四组+生理盐水空白对照组)细胞上清液外泌体提取,提取后与BMSCs共培养,继续成骨诱导48 h,qPCR及蛋白质免疫印迹(Western Blot)分别测定BMSCs细胞ALP、Runx2、miR-125b的表达量。结果(1)成功分离的BMSCs向成脂、成骨分化。(2)成骨诱导分化期间,P3代BMSCs的成骨标志基因ALP mRNA表达量明显增加,Runx2基因的表达趋势与其相同,而在上清液所提取的外泌体中,miR-125b趋势相反,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)转染后共培养组中模拟物组较模拟物阴性对照组其成骨标志基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著下降,而抑制组较抑制剂阴性对照组其成骨基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs来源miR-125b能通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。

中脑神经干细胞分化的神经元体外表达突触素的动态分析

目的:观察中脑神经干细胞(NSCs)分化的神经元在不同条件下及不同时间内表达突触素的动态变化。方法:使用骨髓基质细胞(BMSCs)的条件液培养中脑NSCs,免疫细胞化学染色方法观察NSCs分化的神经元表达突触素的状态。结果:在NSCs分化后的12d,可观察到神经元能够表达突触素,但水平较低;18d,NSCs分化的神经元表达突触素的水平接近体外培养3d的海马神经元,并且也呈现典型的串珠样分布。结论:中脑NSCs分化而来的神经元在体外能够表达突触素,但与原代海马神经元相比,则需要更长的体外培养时间,提示NSCs分化的神经元发育成熟可能需要一定时间。

ERK与NF-κB信号通路在汗腺发育过程中作用的研究进展

大面积深度烧伤形成的瘢痕组织往往导致患者汗腺等皮肤附属器受损或丧失，从而影响患者的生存质量。因此，汗腺重建研究具有重大的临床意义。汗腺细胞的分化、增殖和结构的形成受多种细胞外基质成分、调控因子、作用蛋白和信号通路的调控，迄今为止人们仍未能在体外建立功能完全的汗腺组织。因此，如何从汗腺发生的角度来实现汗腺的重建成为当前创伤修复研究的重要课题。研究证实胞外信号调节激酶（ERK）信号通路与核转录因子-κB（NF-κB）信号通路在汗腺发生和发育过程中具有重要作用，现就以上两条通路的研究进展综述如下。

鼻腔髓外浆细胞瘤二例报道

浆细胞瘤是一类起源于骨髓B淋巴细胞的全身性恶性肿瘤，具有单克隆性浆细胞异常增生并分泌大量免疫球蛋白的特点，临床上可分为髓外浆细胞瘤（EMP）、骨孤立性浆细胞瘤、多发性骨髓瘤（MM）和浆母细胞瘤。

骨髓间充质干细胞分泌的外泌体治疗胰腺癌机制的研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体对胰腺癌(PC)细胞调节控制的分子机制。方法应用PANC-1和AsPC-1细胞系建立胰腺癌裸鼠模型,采用随机数字法将每细胞系各自分为3组,每组10只。空白对照组[鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)],治疗组(经尾静脉进行注射外泌体PBS悬液),抑制剂组(尾静脉注射靶向抑制剂LY294002,随后尾静脉注射含外泌体的PBS悬液),8周后处死裸鼠,采用蛋白质印迹法(Western blot)法检测肿瘤组织细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)以及蛋白激酶B(Akt)的蛋白、生存素(Survivin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9以及CD31的表达表达。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对B7-H4和CA199的表达进行检测。多组间比较采用单因素方差分析,两组数据间比较采用t检验。结果提取BMSC分泌的外泌体成功。给予外泌体治疗后,两细胞系中治疗组磷酸化PI3K(p-PI3K)以及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达均高于空白对照组[PANC-1(p-PI3K:8.5±2.7比17.9±5.6,F=19.645,p-Akt:9.3±2.9比19.4±6.2,F=26.813),AsPC-1(p-PI3K:9.7±3.2比19.7±6.4,F=18.578,p-Akt:8.4±2.6比18.7±6.3,F=19.817),P<0.05],而抑制剂组p-PI3K以及p-Akt与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);给予外泌体治疗后,两细胞系中治疗组胰腺癌标志物的水平均低于空白对照组,同时CD31水平降低[PANC-1(B7-H4:15.9±4.8比6.8±2.3,F=23.467,CA199:17.5±5.8比5.8±1.7,F=29.284,Survivin:12.4±4.0比4.7±1.4,F=28.714,MMP-9:10.3±3.4比3.9±1.3,F=28.927,CD31:16.9±5.6比6.1±1.9,F=30.168),AsPC-1(B7-H4:14.7±4.8比3.1±0.9,F=18.736,CA199:16.2±5.7比3.9±1.2,F=26.948,Survivin:14.4±4.7比4.8±1.5,F=29.841,MMP-9:11.3±3.8比4.7±1.5,F=29.798,CD31:17.1±5.7比5.7±1.8,F=32.864),P<0.05],而抑制剂组两细胞系中上述指标与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论BMSC分泌的外泌体可通过激活PI3K/Akt信号通路抑制PC的增殖、侵袭和转移能力,同时抑制PC血管形成,达到抑癌作用。