异体骨髓间充质干细胞在骨髓嵌合小鼠体内分化为肝细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在体内分化为肝细胞的可行性。方法雌性C57BL/6J小鼠全身一次性接受10Gy60Coγ射线照射后立即接受同品系绿色荧光蛋白(green fluores-cence protein,GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植。移植后1周、1、3个月取骨髓嵌合小鼠肝脏,石蜡切片行GFP抗体免疫组化,冰冻切片在荧光显微镜下观察GFP阳性细胞在肝内分布。石蜡切片行GFP抗体和白蛋白(albumin,Alb)抗体以及GFP抗体和细胞角蛋白18(cytokeratin18,CK18)抗体免疫荧光双标染色法,以此检测GFP阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况。结果移植后1周、1、3个月骨髓嵌合小鼠肝内皆可见GFP阳性细胞,且有随时间减少的趋势,并都可见GFP和Alb双阳性细胞。结论异体骨髓间充质干细胞可在骨髓嵌合小鼠体内分化为表达Alb和CK18的肝细胞,为肝组织的再生和修复提供了新思路。

骨髓嵌合促进Lewis肺腺癌细胞体内生长及转移的实验研究

目的研究骨髓移植对近交系C57BL/6(C57) 6～8周龄的野生雌性小鼠皮下接种Lewis肺腺癌细胞成瘤及转移能力的影响。方法采用随机数字表法抽取20只野生小鼠作为受体小鼠,通过8 Gy全身照射破坏受体小鼠骨髓造血系统,再通过尾静脉注射向受体小鼠移植正常小鼠的骨髓细胞,建立骨髓嵌合小鼠模型。随后将其分为对照B组和荷瘤组(每组10只),再使用随机数字表法取20只同批次未处理的野生小鼠分为对照A组和荷瘤组(每组10只)。分别向骨髓嵌合小鼠和野生小鼠背部皮下注射Lewis肺腺癌细胞获得皮下荷瘤模型,通过比较起瘤时间,肿瘤增长速度,离体瘤质量及肝、肺的转移情况,评价骨髓移植对C57BL/6小鼠皮下荷瘤模型的影响。结果皮下荷瘤后,骨髓嵌合小鼠较正常小鼠起瘤时间提早2 d,接种后第5天即可触及肿瘤;相同荷瘤时间,骨髓嵌合小鼠肿瘤体积增长更快,且离体瘤质量增加49. 27%(P <0. 01),并可观察到肺部有明显的肿瘤细胞转移。结论骨髓嵌合后C57小鼠相对正常C57小鼠更适于皮下荷瘤造模,其肿瘤生长更大,更容易发生转移。

骨髓细胞来源的CD1d基因敲除拮抗DSS诱导的结肠炎

目的使用骨髓嵌合小鼠探究骨髓来源细胞的CD1d基因敲除在小鼠结肠炎进程中的调节作用及其可能的作用机制。方法取SPF级C57BL/6、CD1d^(-/-)小鼠全身一次性接受10 Gy剂量^(60)Co的放射源进行γ射线照射3 h后接受骨髓移植构建4组骨髓嵌合小鼠,饮用2.5%DSS连续7 d,每天记录各组小鼠的体质量变化、活动情况、粪便性状等并且评估小鼠的疾病活动指数(DAI)。第7天用FITC-dextran灌胃检测各组小鼠肠通透性、测量其结肠长度,并用H&E染色法观察结肠组织的病理学变化。免疫印迹检测各组小鼠肠组织炎性因子的表达。结果骨髓嵌合小鼠模型研究显示,与移植入WT骨髓细胞的小鼠相比,移植入CD1d^(-/-)骨髓细胞的小鼠质量下降缓慢、疾病活动指数(DAI)低(P<0.05),结肠长度长(P<0.01),肠通透性低(P<0.01),肠黏膜损伤轻、浸润的炎性细胞少。肠组织NLRP3蛋白及其底物IL-18表达高(P<0.05)。结论骨髓细胞来源的CD1d基因敲除能够拮抗DSS诱导的结肠炎,且可能是通过促进NLRP3炎性小体及其底物IL-18的表达发挥作用。

let-7e嵌合小鼠模型的建立和表型分析

目的:探讨微小RNA let-7e在淋巴细胞分化发育中的作用。方法:构建let-7e过表达嵌合小鼠模型,研究let-7e对淋巴组织中T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)、髓系来源的抑制性细胞(MDSC)发育的影响;通过流式细胞仪检测MDSC的细胞增殖和细胞凋亡,初步探讨let-7e促使MDSC增多的机制。结果:嵌合小鼠模型检测结果显示:过表达let-7e后B细胞减少,浆细胞样DC(p DC)、经典DC(c DC)增多,而T细胞及亚群比例没有变化;同时,骨髓和脾脏中的MDSC比例升高,其凋亡水平明显降低,但其增殖没有改变。结论:let-7e参与了淋巴细胞的分化和发育;let-7e可以通过抑制细胞凋亡促进MDSC的增多。

OX40/FcγR多基因人源化小鼠模型的构建及在激动型OX40抗体研究中应用的验证

目的·建立一种能够快速获得可用于激动型抗体活性评估的OX40/FcγR[肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)/Fcγ受体(Fcγreceptor,FcγR)]多基因人源化小鼠模型的方法。方法·将表达人源OX40分子的小鼠骨髓细胞与表达人源FcγR的小鼠骨髓细胞等比例混合后,通过尾静脉注射到经过辐照的野生型小鼠体内,构建骨髓嵌合小鼠。通过流式细胞术检测骨髓嵌合小鼠中OX40/FcγR人源分子的表达情况,确认免疫系统的重建效率。对构建成功的骨髓嵌合小鼠,使用流式细胞术评估人类抗人OX40单克隆抗体对CD4+、CD8+T细胞的免疫激活活性。2组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果·流式细胞术的结果显示,骨髓嵌合小鼠脾脏、外周血和淋巴结中的B淋巴细胞、髓系细胞均可以表达高水平的人源FcγR分子(均P<0.05);骨髓嵌合小鼠T淋巴细胞在体外激活后有明显的人源OX40分子的表达(P<0.05)。使用人类激动型抗人OX40抗体对骨髓嵌合小鼠进行处理显示,人类激动型抗人OX40抗体可以明显增强小鼠体内T细胞的γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)表达量,和CD4+T细胞上OX40分子的表达(均P<0.05)。结论·以表达人源OX40分子的小鼠与表达人源FcγR的小鼠的骨髓细胞为基础构建的骨髓嵌合小鼠模型能够同时表达人源OX40和FcγR分子,可用于评估人类激动型抗人OX40抗体的体内活性。