白细胞介素10基因修饰干细胞移植对肝纤维化大鼠肝脏炎症和肝再生的影响

目的探讨白细胞介素10（IL-10）基因修饰骨髓源性肝干细胞（BDLSC）移植对大鼠纤维化肝脏的炎症反应和肝再生的影响。方法雌性Wistar大鼠50只随机分为4组：（1）正常组（10只）：皮下注射澉榄油3ml／kg，2次／周，首剂加倍，共注射8周；（2）模型组（16只）：皮下注射体积分数40％CCl4和橄榄油（CCl4：儆榄油=2：3），3ml／kg，注射次数和时间同正常组，于第4周末经门静咏分支输注1ml无菌等渗盐水（NS）；（3）BDLSC组（12只）：造模方法同模型组，于第4周末经门静脉分支输注BDLSC 1ml（每毫升NS含BDLSC 2×10^5个），后续处理同模型组；（4）BDLSC／IL-10组（12只）：造模方法同模型组，于第4周末经门静脉分支输注IL-10基因修饰BDLSC 1ml（每毫升NS含BDLSC 2×10^5个），后续处理同模型组。大鼠于造模第8周末处死，留取肝组织备用。采用酶联免疫吸附法检测肝组织IL-10、肿瘤坏死因子α含量；采用苏木素伊红染色法观察肝组织病理学改变情况；分别采用实时定量PCR法和免疫组织化学法检测肝组织肝细胞生长因子mRNA和增殖细胞核抗原蛋白的表达。根据不同资料采用方差分析或Kruskal—Wallis检验进行统计学分析。结果BDLSC能顺利种植于肝内，并至少维持4周。大鼠肝组织的IL-10／TNF-α比值，模型组为0．05±0．01，正常组为0．26±0．04（F=57．538，P〈0．01），BDLSC／IL-10组为0．68±0．21，BDLSC组为0．08±0．03，模型组比正常组明显降低，BDLSC／IL-10组比正常组明显升高。单纯BDLSC移植未能改善IL-10／TNFα比值降低情况。模型组大鼠肝组织病理学改变明显，炎症反应重，BDLSC组炎症有所减轻，BDLSC／IL-10组的肝组织形态接近正常组。模型组大鼠肝组织的肝细胞生长因子mRNA和增殖细胞核抗原蛋白表达增强，分别为0．0049±0．0009和8511．80±4560．34，F值分别为84．945和82．376，P值均〈0．01。BDLSC组二者表达进一步增强，分别为0．0145±0．0022和15785．21±6431．66，F值分别为84．945和82．376，P值均〈0．01，BDLSC／IL-10组较BDLSC组增强更明显，分别为0．0684±0．0190和44371．43±13865．65，P值分别为84．945和82．376，P值均〈0．01，差异有统计学意义。结论IL-10基因修饰BDLSC移植能减轻纤维化肝脏的炎症反应，促进肝再生，为有效治疗肝纤维化提供了依据。