苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响.方法:将对数期生长RPMI8226细胞随机分为空白对照组、BMA(0. 1、0. 5、1、10、100μmo L)组,24 h后用CCK8测定各组光密度(A),根据A值计算出半数抑制质量浓度(IC50);根据所测IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组、阴性对照组、BMA(4、6、8μmo L)各组,作用12～48 h,用CCK8测定不同作用时间下各组RPMI8226细胞A值,计算出各组增殖抑制率;根据BMA对RMPI8226增殖抑制率的影响规律再设空白对照组、BMA(4、8μmo L)组,作用24、48 h,用Annexin V/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:作用24 h后,各组BMA换算成质量浓度,在13～13 000 ng/m L(即1～10μmo L)质量浓度,各组A值随药物质量浓度的增加而减少,P <0. 05,其IC50质量浓度为1 040 ng/m L;作用12～48 h,各组细胞增殖抑制率随加入的BMA的增加、作用时间的增加而增加,各组P <0. 05;作用24、48 h后各组细胞凋亡率随加入BMA的增加、作用的增加而增大,各组P <0. 05.结论:BMA能抑制RPMI8226增殖并使其凋亡.

南瓜蛋白抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226 Notch信号表达

本研究探讨南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)在体外对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的分子机制。用Western blot法检测不同浓度CUS作用骨髓瘤细胞后Notch信号通路Notch1、Jagged-2、P-Akt和NF-kB的表达水平,结果显示,CUS可以下调骨髓瘤细胞中Notch1、Jagged-2和NF-kB蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和P-Akt的表达。结论:CUS对体外培养的RPMI8226细胞具有明显的增殖抑制作用,并且能明显下调Notch信号及其下游靶基因的表达水平,因此Notch信号通路可能作为多发性骨髓瘤治疗的新靶点,而CUS也可能成为潜在的调控Notch信号通路的新药之一。

褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt/β-catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡,观察多发性骨髓瘤细胞株经10,25,50,100μg/m L浓度褐藻糖胶分别作用24,48,72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组:空白组不予药物干预,褐藻糖胶组给予25μg/m L褐藻糖胶培养,Wnt通道抑制剂(DKK-1)组给予DKK-1培养。用Annexin V-FITC/PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率,通过Western blot方法检测3组β-catenin与c-myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增高(P均<0.05)。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组;褐藻糖胶组和DKK-1组β-catenin和c-myc蛋白表达水平均明显低于空白组(P均<0.05),褐藻糖胶组与DKK-1组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡,与DKK-1作用相当,并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt/β-catenin通路的活化状态,为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(benzoylmesaconine,BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响。方法:将RPMI8226细胞随机分为空白对照组和BMA不同浓度组,用CCK8测定BMA对细胞活性的影响,根据结果计算出半数抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50);根据IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为:空白对照组、阴性对照组以及BMA不同浓度组测定BMA对RPMI增值抑制率随浓度及时间的变化;根据增值抑制率情况将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组及BMA不同浓度组,用AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测BMA对RPMI8226凋亡率的影响随时间浓度的变化。结果:作用24小时,BMA浓度为13～13000ng·ml^(-1)范围内,RPMI8226细胞活性随浓度增加而减小,各组P<0.05,差异有统计学意义,其IC50约为1040ng·ml^(-1);BMA对RPMI8226细胞的增值抑制率随作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义;RPMI8226细胞凋亡率随BMA作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义。结论:BMA能抑制RPMI8226增值并促进其凋亡。

BECN1表达对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖、侵袭的影响

目的:探讨BECN1表达对人多发性骨髓瘤(MM)细胞RPMI-8226增殖、侵袭的影响。方法:体外培养RPMI-8226细胞,构建重组质粒pcDNA3.1-BECN1,并转染至RPMI-8226细胞,将细胞分为对照组、阴性转染组、BECN1转染组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中BECN1mRNA的表达;CCK-8法检测过表达BECN1对各组细胞增殖抑制率的影响;平板克隆法检测过表达BECN1对各组细胞克隆形成率的影响;Transwell实验检测过表达BECN1对各组细胞侵袭的影响;蛋白免疫印迹法检测过表达BECN1对各组细胞增殖、侵袭、自噬相关蛋白表达的影响。结果:BECN1转染组细胞BECN1mRNA的表达显著高于对照组和阴性转染组(P<0.05);BECN1转染组细胞增殖抑制率及细胞自噬蛋白Beclin1和Atg5、侵袭蛋白E-cadherin的表达显著高于对照组和阴性转染组,而细胞克隆形成率、侵袭数目及细胞增殖蛋白CyclinD1、β-catenin、侵袭蛋白N-cadherin表达显著低于对照组和阴性转染组(P<0.05)。结论:过表达BECN1能够抑制人MM细胞RPMI-8226的增殖和侵袭,可能是MM的潜在研究靶点。

人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的：探索人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法：Balb／c裸鼠进行3Gyx线照射预处理后24h，于其皮下接种2×10^7人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226，每2—3d观察裸鼠体重的变化、肿瘤生长的情况、裸鼠的生存时间等，待裸鼠濒死或死亡，或者超过观察时间仍未死亡时，处死裸鼠，取其皮下结节及器官进行病理检测，同时摘眼球取血行血清免疫固定电泳检测。结果：荷瘤裸鼠出现皮下结节的高峰为荷瘤后第2～3周，结节体积基本达到高峰为荷瘤后第5～6周；裸鼠死亡高峰出现在荷瘤后第7周，荷瘤小鼠中位生存时间为荷瘤后52d；裸鼠处死后血清中未检测到人源单克隆免疫球蛋白；皮下结节HE染色证实瘤组织为浆细胞来源，器官HE染色显示肝脏部分炎性损伤。结论：采用RPMI8226人骨髓瘤细胞于Balb／c裸鼠皮下接种（接种细胞数为2×10^7个细胞）造模的方法，具有操作过程较简单、技术要求低，观察肿瘤生长较为直观等优点；同时采用X线照射预处理的方法可降低裸鼠免疫力，明显提高模型的成瘤率；人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226皮下接种于裸鼠，肿瘤生长过程中很难有人源单克隆免疫球蛋白分泌入血；荷瘤裸鼠出现肝脏的损伤，也许可作为今后抗肿瘤药物疗效研究的指标之一。

黄连解毒汤抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增生及促凋亡作用的研究

目的研究中药黄连解毒汤(HLJDT)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞RPMI8226增生和凋亡的作用。方法以含10%胎牛血清的RPMI1640培养基常规培养RPMI8226细胞,分别以不同浓度的HLJDT作用不同的时间后,应用锥虫蓝拒染法测定细胞活力变化,MTT法检测细胞的增生变化;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;应用流式细胞仪检测药物细胞的凋亡现象,荧光显微镜下观察AO/EB染色后的细胞凋亡形态变化;比色法检测半胱氨酸蛋白水解酶3(caspase3)活性变化。结果与对照组相比,200～800ng/ml浓度的HLJDT可明显抑制细胞增生影响(P<0.01),并呈时间和剂量依赖性;使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并呈剂量依赖性改变;MM细胞凋亡百分率显著增高(P<0.01),免疫荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞形态学变化;使caspase3活性增强,且呈剂量和时间依赖性(P<0.01)。结论HLJDT能有效抑制MM细胞RPMI8226增生,促其凋亡,G0/G1期细胞比例增加和S期细胞比例减少可能是原因之一;caspase3活性增强可能参与其凋亡过程,具体机制还有待研究。

氟化钠对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的毒性作用

目的研究人多发性骨髓细胞系RPMI8226暴露于不同浓度氟化钠时细胞增殖、凋亡和周期的变化。方法采用CCK-8法检测不同剂量的氟化钠对RPMI8226细胞存活率的影响;采用Annexin V/PI流式细胞仪定量检测凋亡测定细胞周期和凋亡。结果氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160μmol/L时细胞存活率均高于空白对照组,氟化钠浓度在320、640、1280和2560μmol/L时细胞存活率低于空白对照组,氟化钠浓度为10、20、40、80、160、320、640、1280和2560μmol/L时所测反映细胞增殖的吸光度(A)值差异均有统计学意义(P<0.05);细胞周期实验结果显示在不同剂量(5、40、320和2560μmol/L)时,随着氟化钠浓度的增加,G2期细胞相对数量减少,G1期细胞相对数量增多,就整个细胞周期而言,S期细胞相对数量比G1期、G2期均高,其中对照组与染毒组的相对细胞数量差异有统计学意义;细胞凋亡实验显示氟化钠浓度为320和2560μmol/L时均诱导细胞凋亡,其中细胞凋亡率在对照组与染毒组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160μmol/L时促进RPMI8226细胞的增殖。氟化钠浓度在320、640、1280和2560μmol/L时抑制RPMI8226细胞的增殖。细胞周期和细胞凋亡实验显示DNA损伤程度与S期细胞相对数量一致,氟化钠对RPMI8226细胞造成的DNA损伤可能是细胞滞留在S期的一个重要原因。