小鼠c-Kit^+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究

目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞。接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。

造血干/祖细胞与肿瘤的关系

新近研究发现,骨髓衍生的造血干/祖细胞(bone marrow-derived hematopoietic stem/progenitor cells)可以不断植入肿瘤,参与肿瘤间质和血管生成;持续存在的炎症环境提供了潜在的致癌性条件,使骨髓衍生干细胞可能成为恶性肿瘤起源细胞。VEGFR1+造血祖细胞(vascular endothelial growth factor receptor1positive hematopoiet-ic progenitor cell,VEGFR1+HPC)在肿瘤转移中可能具有决定性作用,肿瘤细胞先突破原发病灶,进入血流,然后停留在另一个预转移场所,在这个场所中,肿瘤细胞先建立造血干祖细胞簇后生长成瘤。

c-Kit^+ Lin^- 细胞体外扩增及体内分化的实验研究

目的研究移植刚分选及扩增后雄性小鼠的骨髓c-Kit+Lin-细胞到酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内后,模型小鼠的肝脏形态改变、肝功能变化和移植细胞的分布、分化及归巢情况。方法采用酒精灌胃法建立酒精性肝纤维化雌性小鼠模型,造模成功后随机选取8只模型小鼠(模型组)与正常小鼠8只(对照组)比较两组肝功能变化。剩余模型小鼠再随机选取32只,分为4组处理,并再随机选取8只正常小鼠(第1组)与其对照。模型小鼠的4组分别为:移植前取血处死组(第2组),移植新鲜分选的c-Kit+Lin-细胞组(第3组),移植扩增后的cKit+Lin-细胞组(第4组),仅予以注射Buffer组(第5组)。采用免疫磁珠法分选雄性小鼠骨髓c-Kit+Lin-细胞;利用SCF+HGF+FL+LIF+TPO+IL-3因子组合对其进行体外扩增;将刚分选及扩增后c-Kit+Lin-细胞移植入酒精性肝纤维化雌性模型小鼠体内,检测两组肝功能改变、肝脏纤维化改善、含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA(Sry)的移植细胞在受体肝内定居分化情况。结果 (1)两移植组在移植30天后,较移植前肝脏纤维化改善明显;(2)两移植组在移植30天后AST、ALT、ALB与移植前比较差异有显著性意义(P<0.05);(3)两移植组均可见含雄性小鼠Y染色体性别决定基因cDNA(Sry)的移植细胞,并同时表达ALB mRNA,计数细胞比例,比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论移植c-Kit+Lin-细胞后能在受体肝内定居并转化成有功能新生肝细胞;移植cKit+Lin-细胞后能明显改善肝损伤小鼠的肝功能及肝脏纤维化;扩增对c-Kit+Lin-细胞的归巢、在体内分化没有明显影响。