LACA小鼠骨髓辐射损伤后干细胞因子受体表达的免疫组化研究

目的至今，尚未见到采用免疫组化技术研究骨髓辐射损伤后干细胞因子受体（Ｃ－ｋｉｔ）表达及其在造血重建中的意义。方法经６０Ｃｏγ射线全身照射ＬＡＣＡ小鼠，于照射后４周内分批活杀动物，采用光镜、电镜及ＬＳＡＢ免疫组化方法，研究了辐射诱导的造血细胞凋亡及Ｃ－ｋｉｔ的表达及意义。结果全身照射ＬＡＣＡ小鼠时，５．５Ｇｙ为其亚致死剂量，此剂量照射小鼠可导致外周血白细胞及骨髓有核细胞数减少；骨髓明显损伤及损伤后重建现象；在照后１天内可使骨髓造血细胞发生凋亡；５．５Ｇｙ照射后６小时，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞浆内明显增多，呈强阳性；照后１０天，骨髓造血细胞增生、恢复，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞膜表达明显增多，呈强阳性。结论Ｃ－ｋｉｔ表达与造血功能重建有关，在早期造血功能重建中起重要调节作用。

p53基因表达在辐射诱导骨髓细胞凋亡和修复中的作用研究

目的 探讨p53基因表达在辐射导的骨髓细胞凋亡和修复中的改变与作用。方法 经^60Coγ射线以5．5Gy全身辐射78只LACA小鼠。于照后4wk内分批活杀，将骨髓分别进行HE染色和超薄切片，并进行P53蛋白LSAB免疫组化染色和突变型p53(mtp53)cDNA-DNA原位杂交。结果 照射后小鼠骨髓出现明显损伤及损伤后重建现象；照射后6h,造血细胞凋亡显著，并出现凋亡的典型改变；P53蛋白于造血细胞凋亡及修复时均明显增多，而mtp53DNA仅于修复期呈阳性。结论 p53基因表达与了辐射诱导的骨髓细胞凋亡和凋亡后的修复过程。

辐射诱导骨髓细胞凋亡及相关基因表达研究

目的 研究辐射诱导骨髓细胞凋亡、bcl 2和 p5 3基因表达及意义。 方法 γ射线全身照射小鼠 ,采用原位末端标记、原位杂交和图像分析等技术 ,研究骨髓细胞凋亡及bcl 2和p5 3表达。结果 照射后 6h骨髓细胞凋亡 ;bcl 2于细胞凋亡时减少 ,而于其后修复早期增加 ;p5 3于造血细胞凋亡及之后修复均增多 ,而mtp5 3仅于其修复时阳性。 结论 辐射可导致骨髓细胞凋亡 ,且呈剂量相关性 ;bcl 2与 p5 3基因均参与其凋亡和修复过程。

SSH方法分离大剂量照射后小鼠骨髓差异表达EST序列

目的 为探讨骨髓辐射损伤的分子机理 ,研究了整体照射条件下 ,辐射前后骨髓基因表达的变化。方法 小鼠 7Gyγ射线照射后 4h提取骨髓总RNA为实验方 (tester) ,对照组动物骨髓总RNA为驱动方 (driver) ;实验方、驱动方总RNA由SMARTcDNA合成方法合成双链cDNA ,进而由抑制消减杂交 (SSH)方法获得消减杂交产物 ,消减杂交产物克隆到T载体建立消减文库 ;对部分克隆进行杂交筛选及序列比对。结果 消减杂交文库挑取 80 0个克隆进行PCR扩增 ,阳性率约为86 % ;部分克隆经两轮杂交筛选获得 1 4个差异片段 ;7个差异片段与鼠EST库已有序列高度相似 ,其余 7个差异片段可能是新的EST序列。

γ射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞IL-3基因表达的原位PCR检测及其意义

目的 探讨内源性IL 3基因表达在骨髓辐射损伤后修复中的作用。方法 5 5Gy6 0 Coγ射线全身照射 78只LACA小鼠 ,于照射后 4周内分批活杀 ,将骨髓进行HE染色 ,并进行内源性IL 3基因表达的免疫组化、原位杂交和原位反转录PCR检测。结果 照射后 4周内小鼠骨髓出现明显损伤及损伤后重建现象。免疫组化观察IL 3于修复期造血细胞浆内明显增多 ,尤以照后 2 1天其量达高峰 ,而原位杂交则显示其mRNA于照射后 10～ 2 1天为弱阳性 ,尤以照射后 15天明显。原位反转录PCR显示IL 3mRNA于修复期造血细胞浆内明显增多 ,尤以照射后 10～ 15天为甚。结论 原位反转录PCR能客观反映IL 3基因表达在骨髓辐射损伤后的变化规律 ,且内源性IL 3基因表达在骨髓辐射损伤后造血功能重建中可能起明显促进作用。