从活血化瘀类中药探讨骨髓造血干细胞“小生境”CXCR4-CXCL12轴平衡与慢性粒细胞白血病

慢性粒细胞白血病(CML)是一种发生在骨髓造血干细胞的恶性克隆性骨髓增殖性疾病。具有自我更新和自我复制能力的造血干细胞在体内增殖、分化、迁徙、转移保持平衡,主要归功于稳定的造血微环境,即"小生境",它包括微血管系统、基质干细胞、细胞外基质和多种细胞因子。而骨髓基质细胞分泌的趋化因子CXCL12及造血干细胞表面受体CXCR4组成的生物轴(CXCL12-CXCR4 biological axis)是调节造血干细胞生物学行为的重要影响因子。现代研究发现,"活血化瘀"类中药不仅可以干预骨髓造血干细胞的增殖分化,而且影响"干细胞循环",就其循环过程来看,与活血化瘀法"祛瘀血"层面的观点相吻合;从循环结果来看,与活血化瘀法"生新血"层面的观点相吻合。文章意在探讨造血干细胞小生境中CXCR4/CXCL12轴在慢性粒细胞白血病可能存在的特殊生物学机制,从造血干细胞生物学行为层面探索慢性粒细胞白血病,并为慢性粒细胞白血病发病机制的研究找到可能存在的新突破点——造血微环境,进一步为以后临床及实验研究提供有价值的理论依据。

骨髓造血干细胞与肝再生的相关性研究

感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等. 新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导分化为肝样细胞,移植到肝损伤动物体内可以修复肝组织损伤,这为肝再生研究开辟了新的途径.对骨髓造血干细胞参与肝细胞再生的深入研究,有可能找到肝损伤治疗的有效措施.

自体骨髓造血干细胞心肌移植术12例的围术期护理

目前,对于各种缺血性心脏病,内科药物治疗、介入治疗和手术治疗虽然能够改善心肌缺血和心力衰竭症状,使闭塞的血管再通,挽救缺血心肌,但对已死心肌或无功能的心肌无治疗作用,而干细胞移植能诱导分化有功能的心肌细胞,并能取代坏死及无功能的心肌,成为治疗缺血性肌病的希望[1].

骨髓动员对骨髓造血干细胞在心肌梗死后心脏中定植及分化的影响

目的观察小鼠心肌梗死后骨髓造血干细胞在心脏内的分化及细胞因子的影响。方法C57/BL6小鼠60只分为骨髓动员组和对照组,先后行脾切除、骨髓移植(骨髓供体为增强绿色荧光蛋白转基因小鼠)、骨髓动员及建立心肌梗死模型。心肌梗死后3周将小鼠心脏取出并切片行组织学及激光共聚焦显微镜免疫荧光检查。结果骨髓动员可以增加EGFP阳性细胞在心脏中梗死区和边缘区的定植,但绝大多数EGFP阳性细胞都同时表达CD45。仅发现有极少数骨髓来源的心肌细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞,且与骨髓动员无相关性。结论骨髓动员能够明显促进骨髓来源细胞定植入小鼠心脏的梗死区;极少数骨髓造血干细胞可以分化为心肌细胞,其数量远不足以修复梗死心肌及改善心功能;骨髓造血干细胞不参与梗死区疤痕形成的病理过程。

补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血干细胞bax、C-myc、Bcl-2基因表达水平影响的实验研究

目的 :探讨补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者造血干细胞bax、C -myc和Bcl- 2基因表达水平影响和疗效机理。方法 :应用免疫组化染色法和酶联免疫测定法检测补髓生血冲剂治疗前后CAA患者造血干细胞bax、C -myc和Bcl- 2基因表达水平。结果 :治疗后CAA患者的bax基因阳性表达率下降 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。而C -myc及Bcl- 2基因阳性表达率与对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :补髓生血冲剂的作用机制之一可能是通过降低bax和C -myc基因的阳性表达率以抑制细胞凋亡 ,而并非在于促进调亡抑制基因Bcl- 2表达所致。

骨髓造血干细胞与肝脏再生相关性研究进展

骨髓造血干细胞具有多向的分化能力,当肝脏在严重受损情况下,骨髓造血干细胞具有向肝细胞分化的能力,从而促进肝脏的再生。本文对其发生机制以及应用前景作一综述。

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。

免疫磁珠法分离提纯骨髓造血干细胞方法的建立

目的 :为了建立免疫磁珠法体外分离提纯骨髓造血干细胞的方法。方法 :采用免疫磁珠阴性选择法分选 CBA(H - 2 K)小鼠骨髓细胞的 CD34+ CD38- Scal+ 细胞群 ,台盼蓝染色观察活力 ,流式细胞仪检测荧光标记的 CD34+ CD38- Scal+ 表达阳性率 ,骨髓造血干细胞 (HSCs)在体外克隆形成的分析 ,HSCs在体内造血功能重建的分析。结果 :分选后 CD34+ CD38- Scal+ 表达阳性细胞纯度达 (86 .5± 3.2 ) % ,细胞活力为 (95 .8± 2 .2 ) %。结论 :免疫磁珠阴性选择法分选系统是一种有效的骨髓造血干细胞分离提纯方法 ,省时、简便、纯度高并对细胞的生物活性无明显影响 。

珠子参皂苷诱导骨髓造血干细胞增殖分化的体外实验研究

目的:观察珠子参皂苷对环磷酰胺干预后小鼠造血干细胞的增殖分化及细胞因子、转录因子、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其对应的受体CXCR4表达的影响。方法:模型小鼠按照380mg/kg腹腔注射环磷酰胺,正常小鼠腹腔注射同体积的生理盐水,1次/d,连续3d。给药结束后分离小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC),分成正常组、模型组、促红细胞生成素(EPO)+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组(50U/mL+250U/mL)和珠子参皂苷(50、100和200μg/mL)组。分别于给药d 4和d 8观察细胞增殖,计数粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、红系细胞集落形成单位(CFU-E)和红系爆式集落形成单位(BFU-E)数量,检测干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)分泌,检测SDF-1、CXCR4、GATA-1、PU.1基因mRNA和蛋白表达量。结果:珠子参皂苷可显著促进骨髓造血干细胞增殖分化,增加CFU-E、CFU-GM和BFU-E集落形成数量,促进细胞因子SCF和IL-3分泌、抑制细胞因子INF-γ和TNF-α分泌,上调SDF-1、CXCR4、GATA-1、PU.1基因mRNA和蛋白表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:珠子参皂苷可以显著促进骨髓抑制后小鼠造血干细胞增殖分化,其机制可能与上调SDF-1、CXCR4、GATA-1、PU.1的表达和调节细胞因子的分泌有关。

无偿献血对骨髓造血干细胞的影响

目的:Southern印迹杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度,观察无偿献血对骨髓造血干细胞的影响。方法:收集35～40岁有15次左右献血史者的血样,同年龄组无献血史者的血样与之对照,酚/氯仿提取基因组DNA,Southern印迹杂交,积分光密度扫描计算TRF值。结果:无偿献血组TRF值平均为11.76Kb,对照组平均为11.81Kb。经统计学分析P>0.05两组样本差异无显著性。结论:通过对两组样本端粒长度的检测未发现长期的无偿献血会对献血者的骨髓造血干细胞产生负面影响。

银屑病患者骨髓造血干细胞中干扰素-γ的表达

目的探讨干扰素-γ(interferon,IFN-γ)在中重度寻常性银屑病患者骨髓造血干细胞中的表达情况,评价其与病情严重程度的相关性。方法免疫磁珠分选纯化20例中重度寻常性银屑病患者及10例健康对照者骨髓造血干细胞,以β-actin基因为内参采用Taqman探针实时定量PCR技术分析患者及健康对照者IFN-γ的mRNA水平,并进行统计学分析。结果 IFN-γ在寻常性银屑病患者及健康对照者的骨髓造血干细胞中均有表达,且在前者明显高表达,为后者的20.53倍(P<0.001);而IFN-γ的mRNA水平与银屑病的严重程度无相关性(r=0.014,P=0.631)。结论造血干细胞中IFN-γ的异常表达可能影响造血干细胞的增殖与分化,进而参与银屑病的发病。

Cramp过表达对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究Cramp蛋白过表达对小鼠骨髓造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法应用流式细胞仪分析Cramp过表达转基因小鼠及同龄野生型小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例;分选骨髓造血干细胞,体外培养,观察其克隆形成能力。结果与野生型小鼠相比,Cramp过表达转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例、骨髓造血干细胞的克隆形成能力等均无明显变化。结论本研究中,Cramp过表达转基因小鼠骨髓造血干细胞的分化能力、克隆形成能力无明显变化。

环境应激诱导骨髓造血干细胞衰老机制

造血系统是由不同时期造血细胞形成的高度有组织的系统，其中造血干细胞（HSC）具有自我更新、增殖、分化功能，含量极少。作者研究发现化疗药物马利兰（BU）及放射诱导骨髓功能持久性抑制可能与骨髓HSC衰老有关，表现为集落形成活性下降、衰老相关-半乳糖苷酶（sA- -gal）、p16升高。SA- -gal是公认的衰老细胞生物标记，p16升高与细胞衰老诱导有关。首次为HSC衰老提供了试验证据。

特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系。方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系。结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关。结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病。ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果。

自体骨髓造血干细胞在治疗下肢缺血性疾病中的应用

对56例下肢缺血性疾病患者进行自体骨髓造血干细胞移植术。结果所有患者的自主症状均有不同程度的缓解,踝肱指数升高,新生毛细血管网增多、丰富。自体骨髓造血干细胞移植是一种治疗下肢缺血性疾病的简单有效方法。

自体骨髓造血干细胞移植治疗恶性肿瘤10例报告

我院于1990～1999年对10例恶性肿瘤进行自体骨髓造血干细胞移植(ABMT)治疗取得了一定的疗效,现报告如下:

RunX3对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究RunX3基因对造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测RunX3转基因小鼠骨髓干细胞的功能。结果移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血细胞占总外周血细胞的比例与野生对照鼠相比无明显差异,移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血中髓系细胞占总外周血髓系细胞的比例较野生型对照鼠高。结论RunX3基因缺失对骨髓造血干细胞的自我更新没有影响,但其可能参与了骨髓造血干细胞的分化过程。

痕量小鼠骨髓造血干细胞移植体系的建立

目的:建立痕量小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)移植体系。方法:利用ESLAM(CD45^+EPCR^+CD150^+CD48-)组合流式分选成体GFP/CD45.2小鼠骨髓细胞与保护细胞(CD45.2小鼠),共同移植给致死剂量照射的受体小鼠(CD45.2小鼠),分析移植后不同时间点,受体小鼠外周血嵌合以及其重建效率和谱系分化情况,随后处死受体小鼠,获取骨髓、胸腺、脾脏和外周血等组织的细胞,检测各组织嵌合情况。结果:移植后受体小鼠外周血结果显示第4周之后重建效率为100%,GFP^+细胞在各系细胞(髓系、红系、B细胞、T细胞、巨核)中不同时间点的比例不同,且各系重建水平的变化趋势不同;6个月之后各组织(外周血、骨髓、脾脏、胸腺)嵌合情况显示外周血红系和巨核细胞中有较高比例GFP^+细胞,且在髓系和淋系细胞中无GFP^+细胞,而骨髓的髓系细胞含也有较高比例GFP^+细胞,脾脏中的B细胞也有较高比例的GFP^+细胞,胸腺中的T细胞也含有较高比例GFP^+细胞。结论:ESLAM组合能够较高效率的富集具有长期重建能力的HSCs;这群细胞移植后6个月外周血结果提示可能具有红系和巨核分化倾向。