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骨髓间充质干细胞培养上清液治疗支气管哮喘及对肺部炎症的影响 被引量:2
1
作者 雷琰 刘长卿 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第36期5764-5768,共5页
背景:医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病,目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,不仅具有增殖和多向分化能力,还具有低免疫原性和免疫调节能力。目的:探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对... 背景:医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病,目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,不仅具有增殖和多向分化能力,还具有低免疫原性和免疫调节能力。目的:探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对支气管哮喘小鼠肺部炎症的影响。方法:将20只实验小鼠随机分为对照组和实验组,每组10只,在第0天及第14天小鼠腹腔注射卵清蛋白溶液致敏,并在第24-26天雾化吸入卵清蛋白溶液激发。实验组从第24天开始,在每次激发前2 h,腹腔注射制备好的骨髓间充质干细胞培养上清液2 m L,对照组腹腔注射生理盐水。末次激发后麻醉致小鼠安乐死亡,采取血清、肺泡灌洗液及肺脏组织进行研究。结果与结论:1对照组小鼠肺组织结构发生异常,黏膜下层和肌层内能够看见大量嗜酸性粒细胞及单核细胞浸润,经骨髓间充质干细胞培养液治疗后,实验组小鼠肺部炎症较轻。2实验组白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比显著低于对照组(P<0.01)。3实验组肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素17水平显著低于对照组(P<0.05);肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素4水平与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。上述结果提示支气管哮喘小鼠腹腔注入骨髓间充质干细胞培养上清液能够减轻肺部炎性病理反应严重程度,降低肺泡灌洗液以及血清中相关的炎症指标水平。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞培养上清 支气管哮喘 肺部炎症 嗜酸性粒细胞
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骨髓间充质干细胞培养上清液抑制异体淋巴细胞增殖 被引量:4
2
作者 吴涛 白海 +2 位作者 王存邦 路继红 欧剑锋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期469-469,共1页
关键词 骨髓充质干细胞 细胞培养上 淋巴细胞增殖 异体 免疫调节作用 MSCs 多向分化潜能 临床应用前景 免疫调控机制 cells
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无细胞接触条件下成人骨髓间充质干细胞培养上清对异体淋巴细胞增殖的负调控作用(英文) 被引量:3
3
作者 吴涛 石静云 +3 位作者 白海 王存邦 路继红 欧剑锋 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第43期8579-8582,共4页
背景:成人骨髓间充质干细胞对异体淋巴细胞增殖具有负调控作用的理论已公认,但证实其具体机制的资料有限。目的:在无细胞接触的条件下,观察成人骨髓间充质干细胞培养上清对异体淋巴细胞增殖的负调控效果。设计、时间及地点:细胞学体外观... 背景:成人骨髓间充质干细胞对异体淋巴细胞增殖具有负调控作用的理论已公认,但证实其具体机制的资料有限。目的:在无细胞接触的条件下,观察成人骨髓间充质干细胞培养上清对异体淋巴细胞增殖的负调控效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2007-12在解放军兰州军区兰州总医院完成。材料:骨髓标本来源于行异基因造血干细胞移植的健康供者,外周血来源于健康志愿者。方法:无菌条件下采集成人骨髓,Percoll+贴壁法体外分离培养骨髓间充质干细胞。取新鲜肝素抗凝的外周血,Ficoll法分离出淋巴单个核细胞,调整浓度为2×109L-1,分别取100μL淋巴细胞悬液,置入96孔板中,设立4组:培养上清组加入培养3d的骨髓间充质干细胞培养上清,100μL/孔;培养上清+植物血凝素组在前组基础上加入1g/L植物血凝素5μL;空白对照组加入含体积分数0.1胎牛血清的LG-DMEM培养液100μL;植物血凝素组在空白对照组基础上加入1g/L植物血凝素5μL。置37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度孵箱中培养3d。主要观察指标:骨髓间充质干细胞培养上清对异体淋巴细胞增殖转化的影响。结果:与空白对照组和植物血凝素组比较,加入骨髓间充质干细胞培养上清后淋巴细胞增殖活性明显下降(P<0.05),其增殖转化抑制率为9.00%。与培养上清组比较,在有植物血凝素刺激的情况下,淋巴细胞增殖活性进一步下降(P<0.01),其增殖转化抑制率达20.91%。结论:成人骨髓间充质干细胞培养上清能够抑制异体淋巴细胞增殖转化,且在外源性刺激源植物血凝素存在的情况下,其抑制效果明显增强,提示其负调控作用至少是部分通过分泌可溶性细胞因子而间接对淋巴细胞产生抑制的。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 免疫调控 淋巴细胞
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成人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用 被引量:4
4
作者 王茜 哈小琴 +5 位作者 白海 吴涛 路继红 杨小亮 司志刚 薛志文 《西北国防医学杂志》 CAS 2006年第6期447-449,共3页
目的:研究人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐带血(HUCB)中所含有间充质干细胞(MSCs)的影响。方法:取脐带血,肝素抗凝,Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育。流式细... 目的:研究人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐带血(HUCB)中所含有间充质干细胞(MSCs)的影响。方法:取脐带血,肝素抗凝,Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果:脐带血的单个核细胞与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原(CD13,CD44,CD71,CD166),但不表达造血细胞抗原(CD34,CD45),这与源于骨髓的MSCs一致。结论:人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。 展开更多
关键词 人脐带血 充质干细胞 体外培养
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人骨髓间充质干细胞培养上清与肝星状细胞相关酶的分泌 被引量:2
5
作者 王珊 张立婷 陈红 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第45期8374-8379,共6页
背景:研究证实骨髓间充质干细胞移植治疗能改善甚至逆转肝纤维化,但其具体机制尚不清楚。目的:检测人骨髓间充质干细胞培养上清对肝星状细胞中基质金属蛋白酶2及组织抑制基质金属蛋白酶1表达的影响。方法:采用密度梯度离心法分离人骨髓... 背景:研究证实骨髓间充质干细胞移植治疗能改善甚至逆转肝纤维化,但其具体机制尚不清楚。目的:检测人骨髓间充质干细胞培养上清对肝星状细胞中基质金属蛋白酶2及组织抑制基质金属蛋白酶1表达的影响。方法:采用密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞,收集原代培养7d的骨髓间充质干细胞培养上清,加入肝星状细胞中培养作为实验组,并设置单独肝星状细胞组、单独骨髓间充质干细胞组为对照。培养24,48h后,检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2蛋白与组织抑制基质金属蛋白酶1蛋白的表达。结果与结论:与单独肝星状细胞组、单独骨髓间充质干细胞组比较,实验组培养24,48h后肝星状细胞基质金属蛋白酶2及组织抑制基质金属蛋白酶1表达减少(P<0.05或P<0.01)。表明骨髓间充质干细胞培养上清抑制肝星状细胞中基质金属蛋白酶2、组织抑制基质金属蛋白酶1的表达。 展开更多
关键词 肝星状细胞 骨髓充质干细胞 肝纤维化 基质金属蛋白酶2 组织抑制基质金属蛋白酶1
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骨髓间充质干细胞培养上清治疗急性胰腺炎的实验研究 被引量:3
6
作者 刘敏 朱艳丽 +3 位作者 张雪梅 逄德志 杨哲 艾迎春 《黑龙江医药科学》 2017年第4期53-54,52,共3页
目的:观察骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)培养上清对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型的作用。方法:采用全骨髓贴壁培养法分离纯化MSCs,培养至第3代,取MSCs培养上清超滤离心备用。将SD大鼠随机... 目的:观察骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)培养上清对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型的作用。方法:采用全骨髓贴壁培养法分离纯化MSCs,培养至第3代,取MSCs培养上清超滤离心备用。将SD大鼠随机分为对照组(n=20)、模型组(n=28)和干预组(n=28),每组再完全随机分为1d、2d、3d、7d四个亚组。模型组和干预组注射L-精氨酸溶液制备急性胰腺炎模型,对照组注射等体积生理盐水。造模1h后,干预组经尾静脉输注MSCs培养上清,模型组和对照组注射等体积低糖DMEM。末次注射后1d、2d、3d、7d后分别处死各亚组大鼠,观察胰腺组织病理学变化,测定血浆淀粉酶、胰腺组织中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果:与对照组比较,模型组血淀粉酶显著升高,胰腺组织病理损伤严重。与模型组对比,干预组胰腺组织病理损伤程度减轻,IL-6及TNF-a水平减低,除1d亚组外,余三个亚组中TGF-β1水平显著升高。结论:MSCs培养上清可有效治疗L-精氨酸诱导的大鼠急性胰腺炎,其作用机制可能与其调节胰腺组织IL-6、TNF-a、和TGF-β1水平相关。 展开更多
关键词 急性胰腺炎 骨髓充质干细胞 L-精氨酸 TGF-Β1
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大鼠骨髓间充质干细胞培养上清液对RSC96细胞生物学功能的影响
7
作者 马永宾 葛锁华 +1 位作者 汪雪峰 苏建华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1291-1295,共5页
目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)培养上清液对大鼠RSC96细胞生物学功能的影响。方法:体外培养、纯化SD大鼠BMSC并进行鉴定;收集第3代BMSC培养上清液(BMSC-CM);采用MTT法检测BMSC-CM对RSC96细胞增殖的影响;平板克隆实验分析BMSC-CM... 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)培养上清液对大鼠RSC96细胞生物学功能的影响。方法:体外培养、纯化SD大鼠BMSC并进行鉴定;收集第3代BMSC培养上清液(BMSC-CM);采用MTT法检测BMSC-CM对RSC96细胞增殖的影响;平板克隆实验分析BMSC-CM对RSC96单个细胞增殖的影响;划痕实验和TranswellTM小室实验分析BMSC-CM对RSC96细胞迁移的作用,Western blot法检测BMSC-CM对RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的改变。结果:SD大鼠第3代BMSC形态呈长梭形,旋涡样生长;成骨染色为阳性结果;成脂诱导后有脂滴出现;BMSC-CM作用后抑制RSC96细胞的增殖和迁移能力,且作用后的RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:BMSC-CM促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 RSC96细胞 增殖 迁移
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骨髓间充质干细胞培养上清液在未成熟鼠脑损伤中的免疫调节作用
8
作者 疏佳萍 柏文华 蒋犁 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2018年第5期863-867,共5页
目的:观察骨髓间充质干细胞上清液对未成熟鼠脑损伤模型炎症因子白细胞介素-6(IL-6)及转化生长因子-β(TGF-β)的影响,探讨骨髓间充质干细胞旁分泌作用干预未成熟鼠脑损伤的机制。方法:采用健康SD大鼠的24只新生3 d乳鼠建立早产儿脑损... 目的:观察骨髓间充质干细胞上清液对未成熟鼠脑损伤模型炎症因子白细胞介素-6(IL-6)及转化生长因子-β(TGF-β)的影响,探讨骨髓间充质干细胞旁分泌作用干预未成熟鼠脑损伤的机制。方法:采用健康SD大鼠的24只新生3 d乳鼠建立早产儿脑损伤模型,分为对照组、磷酸缓冲溶液(PBS)干预组和细胞培养上清液干预组。模型制作成功后,各组侧脑室立体定向移植PBS及上清液,制备侧脑室HE染色病理切片,采用酶联免疫吸附测定法检测各组1、3、5 d IL-6及TGF-β的分泌趋势及分泌浓度。结果:早产儿脑损伤模型分泌IL-6随天数递增而增多,上清液干预组分泌IL-6的量明显少于对照组及PBS干预组,分泌TGF-β的量明显高于对照组及PBS干预组。结论:骨髓间充质干细胞上清液可以改善未成熟鼠脑损伤的预后,降低促炎因子,增加保护性因子的分泌量。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 旁分泌 上清 未成熟鼠脑损伤 大鼠
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麝香黄芪复方滴丸含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖分化 被引量:1
9
作者 陈娜 王燕琳 +3 位作者 孙慧芳 樊飞燕 李东红 张运克 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第19期2960-2966,共7页
背景:骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)已被广泛用于治疗神经系统疾病,但由于血脑屏障的限制以及干细胞在受损部位存活率、分化率低,导致治疗效果有限。目的:探讨麝香黄芪复方滴丸含药血清对BMSCs增殖、迁... 背景:骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)已被广泛用于治疗神经系统疾病,但由于血脑屏障的限制以及干细胞在受损部位存活率、分化率低,导致治疗效果有限。目的:探讨麝香黄芪复方滴丸含药血清对BMSCs增殖、迁移和向星形胶质细胞分化的影响。方法:SD雄性大鼠连续灌胃麝香黄芪复方滴丸5 d后进行腹主动脉取血,分离血清备用。采用CCK-8法检测体积分数5%,10%,20%含药血清对BMSCs增殖的影响;划痕实验观察体积分数10%含药血清对BMSCs横向迁移的影响;Transwell小室培养BMSCs,用结晶紫染色和DAPI核染色观察体积分数10%含药血清对BMSCs纵向迁移的影响;用含体积分数10%含药血清的诱导液或与星形胶质细胞共培养观察BMSCs向星形胶质细胞分化情况。结果与结论:①体积分数10%和20%含药血清在第2,3天促进细胞增殖更明显,且两种体积分数无统计学差异;②在划痕30,48 h时,10%含药血清组BMSCs迁移量显著高于对照组;③10%含药血清组BMSCs穿过Transwell小室滤过膜的数量高于对照组;④体积分数10%含药血清可能促进BMSCs向星形胶质细胞方向分化,但分化作用较弱,星形胶质细胞能进一步促进含药血清诱导BMSCs向星形胶质细胞方向分化;⑤结果表明,体积分数10%含药血清能促进BMSCs体外增殖、迁移;与星形胶质细胞共培养可能促进BMSCs向星形胶质细胞方向分化。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 麝香黄芪复方滴丸 含药血 骨髓充质干细胞 星形胶质细胞 增殖 迁移 分化
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乳腺癌细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞生物学行为的影响
10
作者 刘丹阳 李永涛 +3 位作者 张海燕 李林 刘洋 沈雷 《天津医药》 CAS 2024年第5期454-458,共5页
目的探讨MCF-7乳腺癌细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、凋亡和迁移的影响及分子机制。方法正常环境下培养的BMSC为对照组,以MCF-7细胞条件培养基培养的BMSC为MCF-7条件培养基组,向MCF-7条件培养基组添加10 nmol/L GSK690693... 目的探讨MCF-7乳腺癌细胞条件培养基对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、凋亡和迁移的影响及分子机制。方法正常环境下培养的BMSC为对照组,以MCF-7细胞条件培养基培养的BMSC为MCF-7条件培养基组,向MCF-7条件培养基组添加10 nmol/L GSK690693(Akt抑制剂)为Akt抑制剂组,向MCF-7条件培养基组添加10µmol/L Reparixin(CXCR1/2抑制剂)为CXCR1/2抑制剂组。MTT实验检测各组BMSC增殖情况,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞凋亡实验检测各组BMSC凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测各组BMSC的迁移能力,酶联免疫吸附试验检测两种细胞培养上清液和MCF-7细胞条件培养基中白细胞介素(IL)-8蛋白含量,Western blot检测各组BMSC的蛋白激酶B(Akt)/磷酸化Akt(p-Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达。结果与对照组相比,MCF-7条件培养基组BMSC的细胞增殖水平、迁移数目以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均增高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与MCF-7条件培养基组相比,CXCR1/2抑制剂组和Akt抑制剂组BMSC的细胞增殖水平、迁移数目以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均降低,细胞凋亡率增加(P<0.05);MCF-7细胞条件培养基和MCF-7培养上清液中IL-8蛋白含量均较BMSC培养上清液中IL-8蛋白含量高(P<0.05)。结论MCF-7细胞条件培养基通过激活Akt-mTOR信号通路促进BMSC增殖和迁移,抑制BMSC凋亡,其中IL-8-CXCR1/2轴发挥关键作用。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 肿瘤微环境 细胞增殖 细胞凋亡 细胞运动 骨髓充质干细胞
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温肾通络止痛方对小鼠H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响
11
作者 周士杰 李沐哲 +7 位作者 员浬 张天驰 牛园园 朱弈桦 周勤峰 郭杨 马勇 王礼宁 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期8-15,共8页
背景:骨骼依赖血管与骨细胞之间的密切连接来维持完整性,骨骼处在生理低氧环境中,因此在低氧环境下研究血管生成与骨生成具有重要意义。目的:探究在低氧环境下温肾通络止痛方对H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响及... 背景:骨骼依赖血管与骨细胞之间的密切连接来维持完整性,骨骼处在生理低氧环境中,因此在低氧环境下研究血管生成与骨生成具有重要意义。目的:探究在低氧环境下温肾通络止痛方对H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响及相关机制。方法:运用酶消化法及流式分选技术,分选小鼠H型血管特异型骨微血管内皮细胞;应用骨髓贴壁法分离获取小鼠骨髓间充质干细胞;采用Transwell小室以及缺氧培养工作站建立两种细胞低氧共培养体系,使用50,100μg/m L质量浓度温肾通络止痛方冻干粉进行干预;通过划痕迁移实验与管形成实验评估共培养体系内H型骨微血管内皮细胞的成血管功能;通过碱性磷酸酶染色与茜素红染色评估共培养体系内骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;使用Western Blotting与q-PCR检测共培养体系内H型骨微血管内皮细胞中PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白表达及mRNA表达。结果与结论:(1)与常氧组相比,低氧组H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度均显著升高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力增强(P<0.05);PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达升高(P<0.05);(2)与低氧组相比,经不同质量浓度温肾通络止痛方干预后H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度进一步提高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力更强(P<0.05),PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达也进一步升高(P<0.05)。结果表明:低氧条件下H型血管生成及骨生成可能与PDGF/PI3K/AKT信号轴有关,而温肾通络止痛方可能通过激活PDGF/PI3K/AKT信号轴促进“H型血管生成-骨生成”作用从而防治骨质疏松症。 展开更多
关键词 温肾通络止痛方 H型骨微血管内皮细胞 骨髓充质干细胞 低氧 血管生成 骨生成
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培养间充质干细胞的上清液对食管癌细胞ECA109生物学行为的影响
12
作者 许彭 张亚杰 +1 位作者 马莉莉 李秀梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第11期1967-1972,共6页
目的:探讨脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养的上清液对食管癌细胞ECA109增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:培养人脐带MSCs,提取过滤脐带MSCs培养的上清液与食管癌细胞ECA109共培养,通过细胞划痕实验和CCK-8... 目的:探讨脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养的上清液对食管癌细胞ECA109增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:培养人脐带MSCs,提取过滤脐带MSCs培养的上清液与食管癌细胞ECA109共培养,通过细胞划痕实验和CCK-8实验检测ECA109细胞迁移、增殖能力;采用流式细胞测定技术检测ECA109细胞凋亡情况;利用RT-PCR和Western blot检测相关通路中ERK、AKT、PI3K的表达水平。结果:划痕实验48 h,MSCs上清液共培养组ECA109细胞划痕面积为(17.157±1.425)μm^(2),明显高于对照组划痕面积(14.500±0.563)μm^(2)(P=0.04);CCK-8结果显示,48 h后MSCs上清液培养组ECA109细胞OD值(1.069±0.254)显著低于对照组(1.718±0.520)(P=0.037);流式细胞术检测结果显示MSCs上清液共培养组细胞早期凋亡率(12.36±2.47)%高于对照组(7.23±0.86)%;G2+S期MSCs上清液共培养组细胞比例(39.82±1.01)%相比对照组(55.17±9.60)%显著减少。RT-PCR结果显示,MSCs上清液共培养组AKT mRNA表达量(0.35±0.01)明显低于对照组(1.00±0.05)(P=0.004);Western blot可以看出,MSCs上清液共培养组ERK、AKT蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义。结论:MSCs上清液抑制食管癌细胞ECA109的增殖和迁移能力,促进ECA109细胞的凋亡,且ERK和AKT的蛋白质表达水平均下降。 展开更多
关键词 充质干细胞上清 食管癌 增殖迁移能力
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软坚清脉颗粒促进骨髓间充质干细胞迁移的实验研究
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作者 宗媛 张永康 +1 位作者 曹烨民 马斌 《西部中医药》 2024年第4期1-8,共8页
目的:探讨软坚清脉颗粒含药血清对糖氧剥夺条件下促进骨髓间充质干细胞的增殖及其向血管内皮细胞趋化的影响,探讨软坚清脉颗粒治疗动脉硬化闭塞症的可能作用机制。方法:制备软坚清脉颗粒含药血清采用血清药理学方法。分离骨髓间充质干细... 目的:探讨软坚清脉颗粒含药血清对糖氧剥夺条件下促进骨髓间充质干细胞的增殖及其向血管内皮细胞趋化的影响,探讨软坚清脉颗粒治疗动脉硬化闭塞症的可能作用机制。方法:制备软坚清脉颗粒含药血清采用血清药理学方法。分离骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后将其分为正常组,模型组,空白血清组,中药低、中、高剂量组共六组。细胞增殖毒性检测(CCK-8)法检测不同浓度软坚清脉颗粒含药血清对糖氧剥夺下BMSCs细胞培养6、12、18、24 h时增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度软坚清脉颗粒含药血清对缺糖氧剥夺条件下BMSCs细胞CCND1、MYC、ERK1/2 mRNA和蛋白的表达情况。Transwell实验检测BMSCs细胞的迁移能力,将BMSCs与人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)在糖氧剥夺条件下分别加入制备的空白血清组老鼠血清与中药中剂量组含药血清,处理24 h后检测细胞迁移情况。Realtime PCR法检测同样条件处理下HUVECs细胞表面趋化因子PDGFB、CXCL12、CCL21mRNA及BMSC细胞表面趋化因子受体PDGFRB、CXCR4、CCR7mRNA表达情况。结果:成功分离BMSCs细胞且纯度为95%。1)CCK-8结果示:与正常组相比较,模型组BMSCs细胞在6,12 h时细胞增殖能力上升(P<0.01);与正常组相比较,模型组BMSCs在24 h时细胞增殖存活率降低(P<0.01);与空白血清组相比较,软坚清脉颗粒含药血清各剂量组在24 h时不同程度的提高缺氧缺血BMSCs细胞增殖能力(P<0.01)。2)qRT-PCR与Western blot结果显示:与正常组相比较,模型组细胞CCND1、MYC、ERK1/2mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.01);与空白血清组相比较,软坚清脉颗粒含药血清各剂量组均可升高CCND1、MYC、ERK1/2 mRNA和蛋白相对表达量(P<0.01)。3)Transwell结果显示:与对照组相比,共同加药组能促进BMSCs细胞向HUVECs细胞迁移(P<0.01)。4)Real-time PCR结果显示:与空白血清组相比较,中药中剂量组可升高HUVECs细胞表面趋化因子PDGFRB、CCL21的表达(P<0.01);与空白血清组相比较,中药中剂量组可以升高BMSCs表面趋化因子受体PDGFRB、CXCR4的表达(P<0.01)。结论:软坚清脉颗粒含药血清可能通过ERK通路促进BMSCs细胞增殖,同时通过促进HUVEC细胞趋化因子的表达及BMSCs细胞趋化因子受体的表达来实现归巢。 展开更多
关键词 动脉硬化闭塞症 软坚脉颗粒 骨髓充质干细胞
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转基因猪骨髓间充质干细胞的分离及与猪胰岛的共培养研究
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作者 朱淑芳 曲泽澎 +2 位作者 陆赢 潘登科 牟丽莎 《器官移植》 CSCD 北大核心 2024年第1期55-62,共8页
目的探讨α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)、GTKO/人补体调节蛋白hCD46插入、单磷酸胞嘧啶-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)/GGTA1双基因敲除(Neu5GC/Gal)猪骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离培养,以及与猪胰岛共培养对胰岛的保护作... 目的探讨α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)、GTKO/人补体调节蛋白hCD46插入、单磷酸胞嘧啶-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)/GGTA1双基因敲除(Neu5GC/Gal)猪骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离培养,以及与猪胰岛共培养对胰岛的保护作用。方法从不同转基因修饰GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪中提取骨髓,采用全骨髓法分离猪BMSC后进行培养。对BMSC进行形态学观察,并使用流式细胞术鉴定BMSC表面标志物。同时,观察BMSC诱导的多向分化,通过绿色荧光蛋白(GFP)转染标记猪BMSC来实现对BMSC的标记和示踪。将GFP转染标记的猪BMSC与猪胰岛细胞共培养,观察猪胰岛形态变化,与单纯猪胰岛细胞培养组进行比较。结果猪来源的BMSC在体外培养时呈梭形,表达标志物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105及CD166,不表达CD34、CD45,具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的能力;通过GFP转染标记的猪BMSC能够实现BMSC的标记和示踪,且在细胞分裂后的子代细胞中也能够稳定表达。猪BMSC对胰岛细胞有一定保护能力。结论成功建立了GFP标记的GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪来源的BMSC,其对胰岛细胞具有一定的保护能力。 展开更多
关键词 胰岛移植 1型糖尿病 充质干细胞 基因修饰猪 分离 鉴定 培养 排斥反应
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骨髓间充质干细胞来源外泌体调节大鼠肝细胞凋亡的机制 被引量:1
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作者 郑嵘炅 邓泽润 +1 位作者 韩丹 孙丽华 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第1期44-49,共6页
背景:骨髓间充质干细胞可释放大量外泌体,关于骨髓间充质干细胞来源外泌体对肝细胞凋亡的影响以及具体机制还没有完全阐明。目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体所携带的miR-21-5p对大鼠肝脏细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分离大... 背景:骨髓间充质干细胞可释放大量外泌体,关于骨髓间充质干细胞来源外泌体对肝细胞凋亡的影响以及具体机制还没有完全阐明。目的:探索骨髓间充质干细胞来源外泌体所携带的miR-21-5p对大鼠肝脏细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞,将miR-21-5p NC或miR-21-5p inhibitor转染到骨髓间充质干细胞中,采用超速离心法提取外泌体,命名为(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos,(BMSCs+miR-21-5p inhibitor)-Exos,将外泌体与BRL大鼠肝细胞共培养,观察抑制miR-21-5p表达后对大鼠肝细胞凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因检测验证外泌体中miR-21-5p和PIK3R1之间的靶向关系;TUNEL检测外泌体中miR-21-5p直接靶向PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路对BRL大鼠肝细胞凋亡的影响。结果与结论:①双荧光素酶报告系统证实,PI3KR1野生型载体与miR-21-5p mimics共转染293T细胞时的荧光素酶活性显著低于PI3KR1突变型载体共转染组,表明miR-21-5p可靶向结合PIK3R1;②TUNEL检测结果显示:相比于(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos组,(BMSCs+miR-21-5p inhibitor)-Exos处理后BRL肝细胞凋亡率显著增加;与(BMSCs+miR-21-5p NC)-Exos组相比,加入AKT抑制剂LY294002之后,细胞凋亡率显著增加;③结果提示:外泌体可能通过miR-21-5p直接靶向PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路抑制BRL大鼠肝细胞凋亡。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 外泌体 miR-21-5p 细胞 凋亡 PIK3R1
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颌骨来源骨髓间充质干细胞成骨分化的特点、优势与应用 被引量:1
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作者 范永晶 王姝 金武龙 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第1期100-106,共7页
背景:颌面部骨组织缺损修复是目前研究的热点与难点,而种子细胞的选择是关键。颌骨来源骨髓间充质干细胞是存在于颌骨内的成体间充质干细胞,在颌面部组织再生方面的应用更具优势。目的:综述颌骨来源骨髓间充质干细胞的生物学特性和成骨... 背景:颌面部骨组织缺损修复是目前研究的热点与难点,而种子细胞的选择是关键。颌骨来源骨髓间充质干细胞是存在于颌骨内的成体间充质干细胞,在颌面部组织再生方面的应用更具优势。目的:综述颌骨来源骨髓间充质干细胞的生物学特性和成骨分化优势以及药物、体内环境、微小RNA对其成骨分化影响的相关研究进展。方法:利用计算机在PubMed和中国知网进行文献检索。中文检索词为“口腔,骨组织工程,干细胞”,英文检索词为“oral,bone tissue engineering,stem cells”。共检索下载文章405篇,根据纳入与排除标准对文章进行筛选,最终纳入70篇文献进行综述。结果与结论:颌骨来源骨髓间充质干细胞是口腔骨组织工程的优良种子细胞,与长骨骨髓间充质干细胞相比,颌骨来源骨髓间充质干细胞具有更强的增殖能力和成骨分化能力。药物、体内环境、微小RNA均可以调控颌骨来源骨髓间充质干细胞的成骨分化,但目前对颌骨来源骨髓间充质干细胞的研究尚处于初始阶段,因此需要更多论证力较强的研究来证实其在颌面部骨组织再生领域的应用更具优势。 展开更多
关键词 颌面部 骨组织工程 颌骨来源的骨髓充质干细胞 种子细胞 成骨分化
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麝香含药血清促进骨髓间充质干细胞迁移及其机制
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作者 李应福 谢兴文 +1 位作者 李宁 施彦龙 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期478-483,共6页
目的探讨麝香含药血清对体外骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组,制备含药血清,另设空白对照组。15只SD大鼠,分离培养BMSCs,将第3代BMSCs通... 目的探讨麝香含药血清对体外骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组,制备含药血清,另设空白对照组。15只SD大鼠,分离培养BMSCs,将第3代BMSCs通过形态学、表型鉴定、成骨及成脂诱导后鉴定。采用高、中、低组(16.8、8.4、4.2μL/100 g)麝香含药血清干预BMSCs,培养不同时间,MTT法检测细胞增殖情况;Transwell实验检测麝香含药血清及蛋白激酶C(PKC)信号通路阻断剂(GF109203X)干预对BMSCs体外迁移的影响。结果大鼠BMSCs贴壁生长,排列整齐规则,细胞活力好;表型鉴定显示CD44、CD90阳性表达,CD45、CD34阴性表达;可分化为成骨、成脂细胞。不同浓度麝香组在不同时间点的BMSCs增殖率均高于空白对照组(P<0.05);低浓度麝香组(4.2μL/100 g)在24、48、72 h的BMSCs迁移数量较对照组明显增加(P<0.05),低浓度麝香组+阻断剂(GF109203X)组的不同时间点的迁移数量明显减少,但各时间点的组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论麝香含药血清可能通过活化PKC信号通路促进BMSCs迁移。 展开更多
关键词 麝香 骨髓充质干细胞(BMSCs) 信号通路 增殖 机制
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骨髓间充质干细胞条件培养基治疗大鼠糖尿病足溃疡的疗效及机制
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作者 许忆峰 吴雁翔 +3 位作者 王红梅 高翠华 徐阳洋 闫杨 《医学研究杂志》 2024年第5期86-91,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(mesenchymal stem cell-conditioned medium,MSC-CM)治疗大鼠糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)的疗效与机制。方法通过高脂饮食和腹腔注射STZ建立2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)S... 目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(mesenchymal stem cell-conditioned medium,MSC-CM)治疗大鼠糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer,DFU)的疗效与机制。方法通过高脂饮食和腹腔注射STZ建立2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)SD大鼠模型,对大鼠后肢进行手术,制作DFU模型,大鼠分为正常对照(normal control,NC)组、糖尿病对照(diabetes mellitus control,DM-C)组、MSC-CM组和间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)组共4组,每组各6只。MSC-CM组在溃疡周围注射大鼠骨髓MSC-CM,MSC组给予大鼠骨髓MSC注射治疗,其他两组给予PBS注射治疗。治疗后,对创面部位皮肤愈合、再上皮化(通过HE染色检测皮肤颗粒层的厚度)、细胞增殖(通过免疫组化法检测ki-67)、血管生成(通过免疫荧光法检测CD31)、自噬(通过免疫荧光法和Western blot法检测LC3B,电镜观察自嗜溶酶体)和细胞焦亡(通过Western blot法检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、GSDMD和GSDMD-N)进行评估。结果治疗后,MSC-CM组创面面积与IL-1β、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N均低于DM-C组;MSC-CM组皮肤颗粒层厚度、ki-67、CD31和LC3B均高于DM-C组。对DFUs大鼠注射MSC-CM能够加速创面愈合、促进细胞增殖和血管生成、增强细胞自噬和减少创面中的细胞焦亡。结论MSC-CM可用于治疗大鼠DFU,加速伤口愈合过程,有望成为一种新的无细胞治疗方法。 展开更多
关键词 糖尿病足溃疡 条件培养 充质干细胞 治疗
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人骨髓间充质干细胞通过YAP影响人脂肪肉瘤SW872细胞的生物学行为
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作者 陈华 沙娜 +2 位作者 刘宁 李阳 胡海军 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1000-1008,共9页
目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)条件培养基(CM)与人脂肪肉瘤SW872细胞共培养后对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响,探讨hMSCs CM对脂肪肉瘤细胞的作用及可能的作用机制。方法:体外培养hMSCs,采用慢病毒方法分别转染慢病毒空载体shNS(... 目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)条件培养基(CM)与人脂肪肉瘤SW872细胞共培养后对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响,探讨hMSCs CM对脂肪肉瘤细胞的作用及可能的作用机制。方法:体外培养hMSCs,采用慢病毒方法分别转染慢病毒空载体shNS(对照组)和慢病毒shRNA Yes相关蛋白(YAP)(shYAP-hMSCs组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组hMSCs中YAP mRNA和蛋白表达水平,提取CM。体外培养SW872细胞,分为对照组(正常培养)、hMSCs CM组和shYAP-hMSCs CM组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中YAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,shYAP-hMSCs组hMSCs中YAP mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),表明成功构建了shYAP-hMSCs稳定转染细胞株。CCK-8法,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞增殖活性升高(P<0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞增殖活性降低(P<0.01);流式细胞术,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞凋亡率无明显变化(P>0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞凋亡率升高(P<0.01);细胞划痕实验,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞划痕愈合率升高(P<0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞划痕愈合率降低(P<0.01);Western blotting法,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞中YAP、MMP-9和cyclin D1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),shYAP-hMSCs组SW872细胞中YAP、MMP-9和cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hMSCs参与调控人脂肪肉瘤SW872细胞增殖和迁移,其机制可能与YAP表达有关。 展开更多
关键词 骨髓充质干细胞 条件培养 脂肪肉瘤 细胞增殖 细胞迁移 Yes相关蛋白
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补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用
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作者 王成龙 杨志烈 +10 位作者 常君丽 赵永见 赵东峰 戴薇薇 吴宏进 张婕 王利波 谢颖 唐德志 王拥军 杨燕萍 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期16-23,共8页
背景:补骨脂素具有很强的抗骨质疏松活性,可能对化疗导致的骨质疏松具有恢复作用。目的:探讨补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用及机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,以MTT法检测补骨脂素对... 背景:补骨脂素具有很强的抗骨质疏松活性,可能对化疗导致的骨质疏松具有恢复作用。目的:探讨补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用及机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,以MTT法检测补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力的影响,以成骨诱导结合碱性磷酸酶染色确定补骨脂素对环磷酰胺抑制骨髓间充质干细胞成骨分化恢复作用的最佳剂量。采用RT-qPCR法检测补骨脂素干预不同时间点成骨分化标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt1、Wnt4、Wnt10b、β-catenin、c-MYC的mRNA表达;采用Western blot法检测补骨脂素干预不同时间点成骨特异性转录因子Runx2及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Activeβ-catenin、DKK1、c-MYC、Cyclin D1的蛋白表达。结果与结论:(1)不同浓度补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力没有显著影响;200μmol/L补骨脂素干预后对环磷酰胺诱导骨髓间充质干细胞成骨分化抑制的恢复作用最佳;(2)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞成骨标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素mRNA表达和Runx2蛋白表达的降低;(3)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin通路相关基因Wnt4、β-catenin、c-MYC mRNA表达和Activeβ-catenin、c-MYC、Cyclin D1蛋白表达的降低以及DKK1蛋白表达的升高;(4)结果表明,环磷酰胺能抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,补骨脂素对其具有恢复作用,且200μmol/L补骨脂素干预效果最佳,而这种保护作用可能与补骨脂素激活Wnt4/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 环磷酰胺 骨髓充质干细胞 成骨分化 补骨脂素 Wnt4 Β-CATENIN
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