牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好早期成骨效果:基于动物模型研究

目的评估牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架的骨缺损再生修复效果。方法培养牙槽骨骨髓间充质干细胞(Al-BMSCs)膜片和长骨骨髓间充质干细胞(Lon-BMSCs)膜片,熔融沉积成型技术制作PCL/HA支架。取新西兰大白兔共9只,建立双侧下颌骨缺损模型,按植入材料将其分为PCL/HA支架组(A组)、Lon-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(B组)、Al-BMSCs膜片复合PCL/HA支架组(C组),3组共得到18个样本,6个/组。术后4周处死动物,取下颌骨组织,行大体观察、锥形束CT分析、HE染色和Masson染色,对各组成骨情况进行分析。结果锥形束CT结果显示C组骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于A组和B组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。HE和Masson染色显示C组成骨最为活跃,有较多的新生骨和血管形成。结论牙槽骨骨髓间充质干细胞膜片复合PCL/HA支架具有良好的早期成骨效果,为颌面部骨缺损再生修复提供了一种新的策略。

Wnt信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞膜片成软骨响应中的作用

目的:研究经典(Wnt/β-catenin,Wnt)信号通路在压力调控骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)膜片成软骨响应中的作用。方法:体外分离、培养兔BMSCs,经鉴定后用含有抗坏血酸的培养基构建BMSCs细胞膜片,并将其随机分2组;对照组在常规条件下培养4 d,实验组施以120 KPa静态压力,1 h/d、连续4 d。然后通过Western Blot检测经典Wnt信号通路相关蛋白的表达水平;Real-time PCR检测Wnt信号通路相关基因和成软骨基因的表达水平。结果:兔BMSCs传代后生长状态稳定,呈梭形;成骨成脂分化诱导实验结果阳性;Western Blot检测显示,实验组β-catenin和p-GSK3β蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05);Real-time PCR检测显示,实验组经典Wnt信号通路相关基因β-catenin、p-GSK3βmRNA以及成软骨相关基因Col-Ⅱ、Sox-9、Aggrecan mRNA的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路介导兔BMSCs膜片在一定的压力刺激下的成软骨响应过程。

骨髓间充质干细胞膜片复合磷酸三钙陶瓷构建工程化骨组织的体内成骨研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合磷酸三钙支架材料构建组织工程骨的可行性。方法:将兔骨髓间充质干细胞高密度接种于普通培养皿,在成骨诱导条件下连续培养2周,获得细胞膜片,修剪成长方形,并由一端卷起包裹圆柱状的磷酸三钙材料。静置孵育24h后将构建物移植到裸鼠背部皮下。术后6周取材,进行大体观察、组织学检查、组织定量学分析。结果:所获骨髓间充质干细胞膜片有多层细胞组成,保留了细胞外基质。实验组在材料表面及其孔隙内有较多的骨质形成;单一材料组空隙内为纤维组织,未见骨或软骨样组织;单一膜片组见片状编织骨形成。结论:骨髓间充质干细胞膜片在体内具有良好的成骨能力,可作为细胞释放载体与磷酸三钙支架复合构建骨组织。本研究为骨组织工程构建提供了新的方法。

骨髓间充质干细胞膜片复合珊瑚支架构建管状组织工程骨的实验研究

目的:应用细胞膜片复合管状珊瑚材料,移植自体体内,构建具备特定形态的组织工程骨。方法:构建兔来源骨髓间充质干细胞膜片,与珊瑚支架复合,静置孵育24h后,移植动物自体背部皮下,以单纯珊瑚植入作对照组。术后4周、8周分别取材,行大体观察、扫描电镜及组织学分析其成骨能力。结果:体内培养4周和8周后,证实实验组有新骨形成;而单纯材料组空隙内为纤维组织,未见骨样组织。结论:骨髓间充质干细胞膜片与珊瑚支架材料复合,在自体体内可构建管状组织工程骨。

骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究

目的:探索骨髓间充质干细胞膜片的体外构建简便方法,并评估其成骨分化潜能。方法:将兔骨髓间充质干细胞高密度接种,在成骨诱导条件下连续培养形成细胞膜片。通过组织学、碱性磷酸酶活性定量检测、透射电镜和扫描电镜等方法,检测细胞膜片的特性。结果:高密度连续培养及成骨诱导后形成骨髓间充质干细胞膜片。HE染色证实膜片是一种由多层细胞和细胞外基质组成的聚集体;茜素红染色呈阳性;碱性磷酸酶定量分析含量较高;扫描电镜及透射电镜检查均见基质中大量的矿化结节聚集。结论:通过体外简单的连续培养和成骨诱导后,可形成具有良好成骨能力的骨髓间充质干细胞膜片。

大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建及其特性

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建和基本生物学特性。方法:从GFP-SD荧光大鼠体内提取原代骨髓并培养骨髓间充质干细胞(BMMSCs),鉴定后用于体外构建BMMSCs细胞膜片,用荧光显微镜、倒置显微镜和HE染色对膜片进行形态学检测,并提取膜片RNA用于RT-PCR实验,检测相关促愈合因子的表达情况。结果:BMMSCs成功分离、培养和鉴定。体外诱导培养2周后获得白色膜状细胞膜片,并可用机械力刮下。显微观察显示细胞呈长梭形重叠生长,染色显示细胞间紧密连接并分泌大量细胞外基质(ECM)。RT-PCR结果显示,膜片细胞与正常培养的BMMSCs相比,高表达TGF-β、FGF、VEGF和ColⅠ等细胞因子和蛋白,但在诱导1周和2周时的表达量无显著差异。结论:本方法能够较为稳定的在体外构建BMMSCs膜片,该膜片显著高表达TGF-β等促愈合因子。

骨髓间充质干细胞膜片技术及应用的研究进展

骨髓间充质干细胞易于获得,贴壁生长,具备优良的成膜特性,是现代组织工程学中理想的种子细胞。由于具有良好的分化能力,骨髓间充质干细胞膜片被广泛地应用于组织再生工程。常用的骨髓间充质干细胞膜片包括单层细胞膜片、共培养细胞膜片、多层细胞膜片、三维培养细胞膜片、细胞膜片片段等。本文就近年来利用骨髓间充质干细胞构建细胞膜片的方法及其应用做如下综述。

TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞膜片成软骨分化

目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masson染色观察细胞形态、大体结构及组织学改变,阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色和RT-qPCR检测成软骨标志物ColⅡ和蛋白聚糖(PG)的mRNA表达及蛋白合成情况。结果:TGF-β3诱导成软骨分化14 d,镜下间充质干细胞生长良好,可用镊子钳夹起膜片状结构,可卷缩成团再展开成膜。HE染色显示细胞质及细胞外基质成分均被染成粉红色,其胞核为蓝色,细胞间呈分层状排列结构。Masson染色可见胞核染成蓝黑色,其细胞质染成粉红色,周围包绕着大量染成蓝色的胶原成分。阿利新蓝染色与ColⅡ免疫组化染色均为阳性,对照组阴性。实验组高表达软骨细胞特异性ColⅡ和PG的mRNA(P<0.05)。结论:抗坏血酸诱导构建的干细胞膜片经TGF-β3诱导,能成功向软骨分化及构建软骨细胞膜片。

碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨及成血管分化

背景:目前,细胞膜片技术已被推广应用于牙周膜、角膜、心脏、软骨、食管等多种组织器官修复。现阶段碱性成纤维生长因子对骨髓间充质干细胞膜片增殖、成骨分化的影响和作用机制还尚未可知,如何将生长因子与组织工程细胞膜片技术相整合,最终将其用于组织工程修复具有重要意义。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨分化过程中成血管相关因子的表达变化。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞,采用维生素C连续诱导法构建骨髓间充质干细胞膜片,然后分组进行成骨诱导分化,对照组加入成骨诱导液培养,碱性成纤维细胞生长因子组在成骨诱导液中加入20μg/L碱性成纤维细胞生长因子。成骨诱导分化7,14 d进行茜素红染色,成骨诱导分化10 d采用荧光定量PCR法检测成血管相关基因的表达量。结果与结论:茜素红染色结果显示碱性成纤维细胞生长因子组与对照组相比钙化结节明显,荧光定量PCR结果显示碱性成纤维细胞生长因子组转化生长因子β1的mRNA表达明显高于对照组,血管内皮生长因子、血管生成素1、血小板衍生因子BB的表达量明显低于对照组。结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞膜片在碱性成纤维细胞生长因子诱导下表现出较高的成骨分化潜能,并在成骨晚期可提高转化生长因子β1的表达水平。

骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的体内成骨

背景:马鹿角粉是一种生物相容性及机械性能良好的组织工程骨材料。采用细胞膜片技术、3D打印技术构建组织工程骨,可实现极限骨缺损的个性化治疗。目的:探讨骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇骨支架修复羊下颌骨极限缺损的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培养羊骨髓间充质干细胞,采用细胞膜片技术及3D打印技术构建骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨。取12只新疆阿勒泰大尾羊,随机分为术后1,2,3个月组,每组4只,于双侧下颌骨制备20 mm×3 mm×5 mm骨缺损,每组2只羊一侧植入细胞膜片复合3D打印鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵,每组另外2只羊,一侧植入细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇支架,另一侧植入细胞膜片复合明胶海绵。植入1,2,3个月末处死实验动物,取下颌骨标本进行大体观察、锥形束CT、组织学观察及RT-PCR检测相关成骨指标。结果与结论:①锥形束CT观察:第1,2个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区呈稀薄云雾状,支架吸收较多,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组吸收相对较少;第3个月末,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组有大量的新骨形成,密度接近周围骨质,但细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨缺损区未长满,骨密度较低。细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显,均没有新骨生成;②组织学观察:第3个月末,与其他两组相比,细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组支架材料吸收较多,可见骨小梁排列规则及成熟板状骨,细胞膜片复合纳米羟基磷灰石/丝素蛋白/聚乙烯醇组也有少量新骨形成,细胞膜片复合明胶海绵组3个月内变化均不明显;③RT-PCR检测:细胞膜片复合马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇组骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA表达水平均高于其他两组,在第3个月时成骨基因的表达量达到最高;④结果表明,骨髓间充质干细胞膜片复合3D打印马鹿角粉/丝素蛋白/聚乙烯醇支架的组织工程骨能够修复羊下颌骨极限骨缺损,可满足羊颌骨实验性缺损的修复重建。

骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨移植修复牙槽嵴裂

背景:临床上使用自体髂骨移植方法修复牙槽嵴裂,常常不能获得稳定的治疗效果,移植骨吸收率因人而异,受到许多因素的影响。目的:观察骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨松质骨块移植修复牙槽嵴裂术后的骨吸收情况。方法:制备实验犬双侧牙槽嵴裂模型,采用自体对照的办法,在实验犬上颌骨两侧的裂隙分别植入骨髓间充质干细胞膜片复合犬自体髂骨骨块(实验组)和单纯犬自体髂骨骨块(对照组)。通过颌骨CT及micro CT对植骨区的骨吸收率、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁分离度、骨密度进行比较。结果与结论:术后3,6个月时实验组的骨吸收率明显低于对照组,差异有非常显著性意义(P<0.01);术后6个月实验组骨体积分数、骨密度均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),实验组骨小梁分离度低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),而骨小梁厚度两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞膜片复合髂骨骨移植可减少植骨术后骨吸收率,同时可以促进新骨的生成。

骨髓间充质干细胞膜片和脐静脉内皮细胞共培养模型的构建及鉴定

背景:细胞膜片技术是近年来热门的组织工程学技术,但是膜片中间部位的营养供给和移植后血供问题易导致失败,所以预血管化是提高组织工程材料移植后存活率的关键。目的:比较在不同氧含量下,人骨髓间充质干细胞和脐静脉内皮细胞共培养形成预血管化骨髓间充质干细胞膜片的生物学性能。方法:实验分2组:常氧共培养组即常氧(体积分数20%O2)条件下形成人骨髓间充质干细胞膜片,常氧条件下加入人脐静脉内皮细胞共培养;低氧共培养组,即低氧(体积分数2%O2)条件下形成人骨髓间充质干细胞膜片,常氧条件下加入人脐静脉内皮细胞共培养。采用免疫荧光染色技术观察并比较共培养7d两组的微血管生成情况,并通过ELISA法比较不同氧含量下骨髓间充质干细胞膜片内血管内皮生长因子的水平。结果与结论:①与常氧共培养组比较,低氧共培养组的血管更长、血管密度更高、管间交互连接更多(P <0.05);②低氧共培养组的血管内皮生长因子水平高于常氧共培养组(P <0.05);③结果证实,低氧共培养组较常氧共培养组膜片更利于血管生长,对于建立优化的预血管化膜片具有可行性。

利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSCs细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4w和12w取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey’s纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可以较好地促进牙周膜再生。

成软骨诱导的骨髓间充质干细胞膜片修复肋软骨供区缺损的实验研究

目的采用兔胸廓损伤动物模型，观察成软骨诱导的骨髓间充质干细胞膜片对肋软骨供区再生修复的影响。方法将16只家兔随机分为4组，每组4只，分别为健康对照组，实验1、2、3组。健康对照组家兔无任何处理，对实验组的每组双侧第4—6肋软骨均采用不同的2种方法处理，同侧3根肋软骨采用同一种方法处理，3种方法在每组中两两配对。3种方法分别为：①直接缝合软骨膜；②骨髓间充质干细胞膜片折叠数层成圆筒状填塞人肋软骨缺损处缝合；③成软骨诱导的骨髓间充质干细胞膜片同法折叠数层成圆筒状填塞入肋软骨缺损处，缝合封闭缺损。3种方法在各实验组兔两侧肋软骨中两两配对，健康对照组不做处理。术后16周，处死家兔取材进行大体观察，常规HE染色，并行生物力学检测，测定所有肋软骨的抗压强度及弯曲强度。结果各实验组家兔的胸廓整体形态均较良好，各组及各处理方法间无明显差别。生物力学检测显示，3种处理方法之间均存在差异（P〈0．01），方法3处理的修复组织的抗压、弯曲强度与健康对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；方法1、2处理的修复组织的抗压、弯曲强度明显低于健康对照组（P〈0．01）；方法2处理的修复组织的抗压、弯曲强度优于方法1。组织切片HE染色病理观察，可见方法1、2处理的修复组织主要为纤维组织，方法3处理的修复组织内，可见新生的软骨细胞和大量的软骨细胞外基质。结论成软骨诱导的骨髓间充质干细胞膜片可以促进肋软骨供区软骨细胞的再生，修复肋软骨供区缺损，维持胸廓的正常形态和稳定性，从而降低术后胸廓畸形的发生率。

BMP-7对大鼠骨髓间充质干细胞膜片成骨分化的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)膜片的生物学性能以及骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)对BMMSCs膜片成骨分化的影响。方法:分离培养SD大鼠原代BMMSCs,采用维生素C诱导构建大鼠BMMSCs膜片,实验分为自然分化组、添加BMP-7的骨诱导组以及标准骨诱导组,采用HE染色观察,CCK-8检测膜片细胞增殖情况以及RT-PCR检测细胞膜片成骨分化水平。结果:分离大鼠BMMSCs诱导10~14 d后获得白色膜状细胞膜片。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌。CCK-8显示膜片细胞密度随时间递增。与BMMSCs膜片相比,BMP-7诱导的细胞膜片高表达ALP、Osteocalcin等成骨基因。结论:BMP-7诱导的大鼠BMMSCs细胞膜片成骨分化能力强,在骨组织工程中优势显著。

利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可较好地促进牙周膜再生。

兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(r BMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势。方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养r BMMSCs,采用简单制备方法构建r BMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察,MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况。结果:成功分离r BMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的r BMMSCs;RT-PCR结果显示,与r BMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn。结论:r BMMSCs细胞膜片相比普通培养的r BMMSCs,在组织工程应用中更具优势。

骨髓间充质干细胞膜片结合冻存自体骨瓣修复兔颅骨极限缺损

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞（BMSCs）构建成的细胞膜片结合低温保存的自体骨瓣修复兔颅骨极限缺损的效果. 方法 采集兔新鲜骨髓进行BMSCs的分离培养,并应用维生素C培养液诱导其生长成细胞膜片,同时对颅骨缺损模型取下的自体骨瓣进行无菌-80℃低温保存.将12只新西兰大白兔按随机数字表法分为实验组和对照组（每组各6只）,其中实验组将细胞膜片结合冻存自体骨瓣回植于原缺损部位,对照组单纯植入冻存自体骨瓣.术后12周时对2组兔进行活体颅骨CT扫描,并颅骨取材HE染色观察组织形态学变化,以评价骨修复效果. 结果 实验组兔骨缝边缘愈合良好,形成致密骨质,质地较硬,回植骨瓣活动度极差,CT见颅骨全层高密度影;对照组兔骨缝愈合较差,可见明显软组织及未愈合缺口,质地较弱,回植骨瓣活动度较好,CT见骨缝处有明显低密度影.HE染色见实验组断端局部愈合,形成新的骨层结构,并可见其中分散的骨细胞及滋养血管;对照组未形成完整骨层. 结论 BMSCs膜片能更有效地促进冻存自体骨瓣与缺损边缘的愈合,修复颅骨缺损.

人骨髓间充质干细胞复合人脐静脉内皮细胞构建预血管化成骨细胞膜片

背景:如何使工程化骨组织移植后能够成活并发挥功能,前提条件是必须含有充足有效的血液供应,而这也正是工程化组织应用于临床的主要障碍之一。目的:探索新的体外构建血管网络的方法以解决工程化骨组织预血管化的问题。方法:人骨髓间充质干细胞以9×10^4/cm^2高密度接种,经成骨诱导连续培养14 d形成细胞膜片,镜下观察细胞形貌,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。然后将培养的人脐静脉内皮细胞以5×10^4/cm^2密度接种到上述细胞膜片上,继续培养至7 d。通过镜下观察、CD31免疫荧光染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色评估血管网形成情况及膜片特性。结果与结论:①经连续培养可获得完整的成骨诱导细胞膜片,茜素红染色和碱性磷酸酶染色呈阳性;②倒置相差显微镜观察发现人脐静脉内皮细胞接种在成骨诱导细胞膜片上逐渐重排,CD31染色显示进行性管腔形成;③接种人脐静脉内皮细胞后构建的预血管化成骨诱导细胞膜片Ⅰ型胶原染色阳性;④结果表明,经成骨诱导后可形成具有成骨特性的细胞膜片,将人脐静脉内皮细胞培养在该膜片上可体外形成预血管化成骨细胞膜片,为优化构建预血管化的骨组织提供了新的理论指导。

血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片的构建

背景:研究发现充足的血供是骨组织修复与再生必不可少的条件。目的:应用血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞构建出复合细胞膜片。方法:体外分离培养SD大鼠血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞,将两种细胞直接共培养,经成膜诱导10 d后构建出复合细胞膜片并对获得的膜片进行大体、倒置显微镜及苏木精-伊红染色观察。将血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞分别应用荧光标记液标记后,观察膜片诱导过程中两种细胞的分布及交流情况。对复合细胞膜片进行碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色,观察其成骨分化能力。结果与结论:血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞直接共培养成膜诱导10 d后可成功获得复合细胞膜片,两种细胞在成膜诱导过程中存在细胞间接触。获得的膜片由多层细胞及细胞外基质构成,经碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色结果证实该膜片具有较强的成骨分化能力,为进一步将血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片应用于骨缺损的修复提供了条件。