骨髓间质干细胞培养上清液调控肝细胞的体外研究

目的探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)培养上清液对肝细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨BMSC治疗肝纤维化的旁分泌机制。方法采用密度梯度离心及贴壁细胞分离相结合提取BMSC。培养48h的BMSC细胞培养上清液按BMSC不同处理(培养)时间和含量两种方法建组。不同处理时间建组:取培养48hBMSC上清液处理肝细胞(完全培养),分为处理24h、48h、72h组,对照组为1640培养基处理24h的肝细胞。不同含量BMSC建组:实验1组为完全BMSC培养上清液(含肝细胞的6孔板中每孔加入BMSC上清液2ml)处理肝细胞;实验2组为部分BMSC培养上清液(每孔加BMSC上清液1ml+1640培养基1ml)处理肝细胞;对照组为完全细胞培养基(每孔加1640培养基2ml)处理肝细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测BMSC旁分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)情况及培养时间对其的影响;用流式细胞仪观察肝细胞细胞分期和检测凋亡细胞数;用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测样本上清液中白蛋白的表达。结果 BMSC分泌HGF,其含量变化具有时间依赖性。加入BMSC培养上清液后,与对照组相比,实验1组中的培养上清液可以明显促进肝细胞增殖、抑制其凋亡,并随着处理时间的延长而增加(处理72h>处理48h>处理24h,均为P<0.05);实验组(1组、2组)的白蛋白分泌较对照组上调,且随着处理时间的延长白蛋白含量增加。结论 BMSC有可能通过分泌HGF促进肝细胞增殖、抑制凋亡,促进白蛋白分泌,从而抑制肝脏纤维化。

骨髓间质干细胞培养液上清对肝星状细胞增殖及纤维化的影响

背景:利用骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的研究取得了一定的效果,但研究其培养液上清治疗肝纤维化的并不多。目的:观察大鼠骨髓间质干细胞培养液上清抑制肝星状细胞增殖及活化的可能性。方法:实验组1,2将骨髓间质干细胞培养液上清加入6孔板内处理肝星状细胞,分别为2mL培养液上清/孔,1mL培养液上清+1mL完全培养基/孔;对照组为肝星状细胞单独培养(2mL完全培养基/孔)。流式细胞仪分析细胞周期并观察抑制效果,RT-PCR检测肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达情况。结果与结论:加入骨髓间质干细胞培养液上清后,实验组1中的肝星状细胞增殖与对照组相比受到抑制,且抑制率随处理时间的延长而增多(处理72h>处理48h>处理24h,P<0.05);实验组的肝星状细胞内转化生长因子β、金属蛋白酶抑制因子2、胶原蛋白ⅠmRNA的表达较对照组均下调,且下调程度随培养液上清增多而增大(实验组1>实验组2>对照组)。

骨髓间充质干细胞培养上清液治疗支气管哮喘及对肺部炎症的影响

背景:医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病,目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,不仅具有增殖和多向分化能力,还具有低免疫原性和免疫调节能力。目的:探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对支气管哮喘小鼠肺部炎症的影响。方法:将20只实验小鼠随机分为对照组和实验组,每组10只,在第0天及第14天小鼠腹腔注射卵清蛋白溶液致敏,并在第24-26天雾化吸入卵清蛋白溶液激发。实验组从第24天开始,在每次激发前2 h,腹腔注射制备好的骨髓间充质干细胞培养上清液2 m L,对照组腹腔注射生理盐水。末次激发后麻醉致小鼠安乐死亡,采取血清、肺泡灌洗液及肺脏组织进行研究。结果与结论:1对照组小鼠肺组织结构发生异常,黏膜下层和肌层内能够看见大量嗜酸性粒细胞及单核细胞浸润,经骨髓间充质干细胞培养液治疗后,实验组小鼠肺部炎症较轻。2实验组白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比显著低于对照组(P<0.01)。3实验组肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素17水平显著低于对照组(P<0.05);肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素4水平与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。上述结果提示支气管哮喘小鼠腹腔注入骨髓间充质干细胞培养上清液能够减轻肺部炎性病理反应严重程度,降低肺泡灌洗液以及血清中相关的炎症指标水平。

血管平滑肌细胞培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化

目的:探讨已经分化成熟的平滑肌细胞的培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化的影响,期望为组织工程膀胱提供种子细胞。方法:分离得到的大鼠MSCs和血管平滑肌细胞在体外扩增、传代。第4代MSCs用10%碱性成纤维生长因子预诱导1d后加入已分化成熟的血管平滑肌细胞的培养液和低糖培养基(1∶1)诱导培养2d,然后加入膀胱匀浆上清进行诱导分化7d。以未进行诱导的MSCs为阴性对照组,分化成熟的平滑肌细胞为阳性对照组,观察干细胞形态学的变化并运用免疫细胞化学检测特异性α-平滑肌肌动蛋白抗体的表达。结果:MSCs经诱导分化的细胞形态呈梭形平滑肌样,融合后形成峰谷状排列,并表达平滑肌特异性蛋白标志物α-肌动蛋白。诱导分化率为(25.6±3.5)%,与阴性和阳性对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:MSCs经体外诱导可分化为平滑肌样细胞,可作为膀胱修复的种子细胞进一步研究。

大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间质干细胞的诱导分化作用

目的 探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法 从大鼠骨髓中分离培养间质干细胞并传至第 4代 ,诱导前 2 4h加 1 0ng/ml碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促分裂 ,再以正常脊髓、损伤后 5d及损伤后 40d脊髓匀浆上清液作诱导剂 ,然后观察细胞形态的变化 ,并采用免疫组织化学法 ,对诱导后第 4d的细胞进行神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达的检测。结果 诱导后第 4d的部分细胞不仅在形态上表现为神经元样 ,而且呈NSE及NF阳性表达 ,GFAP阴性。

人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖

目的探讨人血小板裂解液(human platelet lysates,HPL)对骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖以及生物学特性的影响。方法通过对机采血小板反复冻融获得HPL,采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs,分别用10%胎牛血清(feotal calf serum,FCS)和LD-DMEM添加不同浓度的HPL进行培养,以确定最佳HPL浓度。分离6株人源MSCs,从原代开始分别用添加胎牛血清和最佳HPL浓度的LD-DMEM进行培养,对两种培养体系下6株不同来源的MSCs的增殖能力,表面标记表达量以及细胞周期进行研究,并利用t-test进行统计学分析,P<0.05视为有统计学差异。结果研究发现HPL中含有MSCs生长所必需的4种生长因子,PDGF-AB(人血小板衍生生长因子AB),bFGF(成纤维细胞生长因子),IGF-1(胰岛素样生长因子1),TGF-β1(转化生长因子β1),浓度分别为:(0.53±0.06)ng/ml,(37.5±4.31)pg/ml,(0.15±0.06)mg/ml,(5150±463)pg/ml。适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5%。两种培养条件下的细胞形态无明显区别,均为长梭形。8代以前,细胞增殖能力没有显著性差异(P>0.05),两种培养条件下的MSCs均表达CD105,CD106以及粘附分子CD29和CD44,不表达CD34,CD45,且其表达量没有显著性差异(P>0.05)。两种培养体系下绝大多数细胞处于G0-G1期,FCS培养的MSCs其G0-G1期占(96.97±0.95)%,7.5%的HPL培养的MSCs其G0-G1期占(94.58±1.56)%,两种培养条件下不同周期没有显著性差异(P>0.05)。结论本研究适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5%,HPL可以替代胎牛血清体外培养扩增人骨髓间质干细胞,并保持其生物学特性基本不变。

大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。结果细胞诱导后具有神经元或胶质细胞样细胞的形态,相应细胞表面标志NSE或GFAP阳性,以损伤后7d脊髓匀浆上清液诱导组NSE阳性和GFAP阳性率最高(P<0.05)。结论臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓匀浆上清液在体外能够有效地诱导骨髓MSCs分化为神经样细胞,伤后1w可以作为MSCs移植的最佳时间。

人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞诱导分化及相关基因时序表达的影响

背景:大量有关动物的体内外研究表明,骨髓间充质干细胞在心肌微环境或模拟心肌微环境的作用下可分化为心肌细胞。然而,类似的人类研究报道较少,同时相关的分化机制也不甚清楚。目的:探讨人类心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞诱导分化的影响及相关基因的时序表达。方法:体外分离培养人类骨髓间充质干细胞,传至第4代加入自体心肌匀浆上清液诱导骨髓间充质干细胞,持续作用2周。相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞形态变化,免疫荧光方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α和肌钙蛋白的表达,应用半定量RT-PCR技术分析Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC、肌钙蛋白等相关基因在分化过程中的动态时序表达。结果与结论:经心肌匀浆上清液诱导后,骨髓间充质干细胞体积变大,立体感增强,形态近似棒状。诱导2周时肌动蛋白α及肌钙蛋白阳性细胞比例分别为25.53%和23.48%。Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C基因在诱导后3d表达开始增强,其中GATA-4、MEF-2C诱导后5d达高峰,以后维持在较高水平,Nkx-2.5则随诱导时间逐渐增强;α-MHC、肌钙蛋白基因诱导前无表达,于诱导第3天出现表达,以后维持在高水平。结果提示,心肌匀浆上清液对骨髓间充质干细胞具有定向诱导作用,在此过程中,伴随着Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、α-MHC和肌钙蛋白基因的时序表达变化。

视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞的分化

背景:骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化可为神经系统受损伤后的修复和再生带来了新的希望。目的:探讨骨髓间充质干细胞在视网膜干细胞培养上清液诱导条件下向神经元细胞分化。方法:采用全骨髓培养方法,用视网膜干细胞培养上清液诱导骨髓间充质干细胞,通过免疫荧光染色鉴定其分化的结果。结果与结论:诱导72 h,骨髓间充质干细胞表达神经干细胞的特异性抗体巢蛋白和神经元中的标志性微管相关蛋白微管相关蛋白2。视网膜干细胞培养上清液能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,提示视网膜干细胞可能分泌神经生长因子。

骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制

目的观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组。模型制作24h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数。结果脑梗死后7d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化。

脑脊液体外培养骨髓间充质干细胞

背景:细胞移植是脊髓损伤的一种有效治疗手段,但目前尚缺乏脑脊液对细胞影响的实验依据。目的:动态观察体外脑脊液培养骨髓间充质干细胞的变化。方法:采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,并传代扩增。选择生长良好的第3,4代细胞接种于脑脊液中,通过细胞免疫化学染色法鉴定脑脊液对细胞表型的影响。取生长良好的第5代细胞,分别用含小牛血清的L-DMEM和脑脊液培养。结果与结论:运用密度梯度离心结合贴壁培养法能成功有效地分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,表型鉴定结果为CD90、CD106、CD71、CD29阳性,CD45阴性。脑脊液培养后细胞仍为骨髓间充质干细胞形态,并可见少量小圆细胞,表现为神经样细胞,表形鉴定结果为CD90、CD106、CD71、CD29阳性,CD45阴性,神经元特异性烯醇化酶呈弱阳性(<1%)。细胞具有相似的S形生长曲线,生长曲线基本相似。提示骨髓间充质干细胞在脑脊液培养基中可继续生长和增殖,无诱导分化作用,且细胞对生长环境有高度的适应性。

骨髓间充质干细胞上清液对大鼠佐剂性关节炎防治作用的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)上清液对大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)的治疗、干预作用。方法收集培养48 h的SD大鼠骨髓MSCs上清液,健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只造模,造模成功后行MSCs上清液治疗及干预。造模后第1、7、14、21和28天测量大鼠体质量、踝关节周长和后足爪体积,同时观察大鼠生存状况。治疗后第21天,行四肢关节X线检查及病理检查。结果模型大鼠经MSCs上清液治疗后关节肿胀明显减轻,X线示骨质破坏明显修复。病理HE染色见关节滑膜病变和炎症细胞浸润明显减少,组织水肿减轻。干预组经MSCs上清液治疗,原发性炎症和继发病变均不明显,关节X线和病理检查均未见明显异常,与模型组大鼠相比,体质量、足爪体积以及踝关节周长差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs上清液治疗可有效减轻并逆转弗氏完全佐剂诱导的大鼠AA的进展。其作用机制可能为MSCs分泌了可溶性细胞因子到达患部修复受损组织,具体成分还有待进一步研究。

骨髓间充质干细胞与上清液治疗大鼠脑梗死的疗效

目的探讨骨髓间充质干细胞与上清液治疗大鼠脑梗死的疗效。方法将40只脑梗死大鼠模型用随机数字表法分为氯化钠注射液组(9 g.L-1氯化钠注射液2 mL)、骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植组(2.0×109L-1BM-SCs悬液2 mL)、上清液移植组(BMSCs上清液2 mL)及混悬液移植组(上清液与BMSCs混悬液2 mL),每组10只。在模型再灌注24 h后,用10 g.L-15-溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液标记,连续标记28 d,并于最后1次注射后2 h处死大鼠。观察各组病灶增殖期神经前体细胞的数目变化及神经损伤严重程度(NSS)评分。结果治疗后28 d BrdU、Br-dU+抗人神经元特异性烯醇化酶、BrdU+胶质纤维酸性蛋白标记的阳性细胞数BMSCs移植组、上清液移植组和混悬液移植组较氯化钠注射液组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);上清液移植组和混悬液移植组较BMSCs移植组增多,差异有统计学意义(P<0.05);混悬液移植组较上清液移植组增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与移植前比较,各组大鼠动物模型移植后第7、14、28天的神经功能情况均有不同程度的恢复,NSS评分逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);从第7天起,与氯化钠注射液组比较,BMSCs移植组、上清液移植组和混悬液移植组NSS评分均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);混悬液移植组NSS评分明显低于BMSCs移植组和上清液移植组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论上清液与BMSCs混悬液能够诱导病灶区内源性神经前体细胞的增殖、分化,这可能与上清液内的神经营养因子及细胞分化诱导因子诱导BMSCs分化为神经细胞有关。

人脐带间质干细胞培养上清液可下调肝星状细胞转化生长因子β的表达

背景:人脐带间质干细胞有望成为治疗肝纤维化新的种子细胞,但目前相关的体外实验报道较少。目的:探讨人脐带间质干细胞培养液上清对大鼠肝星状细胞纤维化形成生物学活性的影响及可能的作用靶点。方法:将肝星状细胞以1.0×108L-1接种于六孔板内,无血清培养24h后,加入2mL脐带间质干细胞培养液上清处理肝星状细胞,设为实验组;对照组为加入等量完全培养基处理肝星状细胞;RT-PCR法检测肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达;Western blot法检测肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达。结果与结论:实验组中肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达较对照组明显下调,且随处理时间的延长,mRNA表达的下调程度亦随之增强(实验组72h>实验组48h>对照组);实验组肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达较对照组下调,同时具有时间依赖性(对照组>实验组48h>实验组72h,P<0.05)。提示脐带间质干细胞可抑制肝星状细胞纤维化形成的生物学活性,并可能是通过针对转化生长因子β靶点及其下游基因产物起作用。

混合血小板裂解液对人骨髓间充质干细胞原代培养、增殖和成骨分化的影响

目的研究混合血小板裂解液(pHPL)对体外培养的人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)原代培养、增殖和成骨分化的影响。方法使用临床过期的多份浓缩血小板混合,多次冻融激活后制备pHPL,分别使用胎牛血清(FBS)和pHPL加基础培养液原代培养hBMMSCs,比较两组中的细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期和增殖率,并在加入经典成骨诱导液后检测两组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量和矿化结节形成,比较其成骨分化能力。结果FBS和pHPL培养组均能较好地支持hBMMSCs的原代培养,两组中细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期均无明显差异,但pHPL组在5、7d时的细胞增殖率明显高于FBS组(P<0.05);在成骨诱导后,pHPL组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量也明显高于FBS组(P<0.05),两组中细胞均可以形成成熟的矿化结节。结论pHPL能够很好支持hBMMSCs的原代培养、增殖和成骨分化,且较FBS能更好地促进其增殖和成骨分化。

骨髓间充质干细胞培养上清液在未成熟鼠脑损伤中的免疫调节作用

目的:观察骨髓间充质干细胞上清液对未成熟鼠脑损伤模型炎症因子白细胞介素-6(IL-6)及转化生长因子-β(TGF-β)的影响,探讨骨髓间充质干细胞旁分泌作用干预未成熟鼠脑损伤的机制。方法:采用健康SD大鼠的24只新生3 d乳鼠建立早产儿脑损伤模型,分为对照组、磷酸缓冲溶液(PBS)干预组和细胞培养上清液干预组。模型制作成功后,各组侧脑室立体定向移植PBS及上清液,制备侧脑室HE染色病理切片,采用酶联免疫吸附测定法检测各组1、3、5 d IL-6及TGF-β的分泌趋势及分泌浓度。结果:早产儿脑损伤模型分泌IL-6随天数递增而增多,上清液干预组分泌IL-6的量明显少于对照组及PBS干预组,分泌TGF-β的量明显高于对照组及PBS干预组。结论:骨髓间充质干细胞上清液可以改善未成熟鼠脑损伤的预后,降低促炎因子,增加保护性因子的分泌量。

骨髓间充质干细胞上清液对2,5-己二酮致PC12细胞损伤的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞上清液(BMSCs-CM)对2,5-己二酮(2,5-HD)致PC12细胞损伤的保护作用。方法体外培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),收集第5代BMSCs的上清液。PC12细胞暴露于2,5-HD,并将大鼠分为4组,正常对照组:细胞培养体系中不加入任何药物和上清液;BMSCs-CM对照组:在细胞培养体系加入终体积分数40%的BMSCs-CM;2,5-HD损伤组:3种不同浓度(5、10、20 mmol/L)2,5-HD作用PC12细胞24 h,制备2,5-HD细胞损伤模型;BMSCs-CM保护组:20 mmol/L 2,5-HD作用细胞的同时,分别加入终体积分数10%、20%、40%的BMSCs-CM。以上各组HE染色后在光镜下观察,并利用MTT法检测细胞活性。结果 5 mmol/L 2,5-HD损伤组细胞丧失原有形态,呈圆形、椭圆形,细胞活性下降,细胞损伤程度随2,5-HD浓度的增加而下降,20 mmol/L 2,5-HD损伤组细胞损伤最严重(P<0.05)。10%BMSCs-CM保护组异常形态细胞减少,细胞活性高于20 mmol/L 2,5-HD组(P<0.05);40%BMSCs-CM保护组保护效果最好,细胞形态趋近正常,细胞活性明显优于20 mmol/L 2,5-HD组(P<0.05)。结论 2,5-HD暴露导致PC12细胞损伤,BMSCs-CM对2,5-HD致细胞损伤具有明显的保护作用。

不同分离液和培养基对骨髓间充质干细胞原代培养的影响研究

目的:试图分别用不同抽取骨髓方法、不同分离液和培养基,来筛选提高收集骨髓MSCs数量的因素.方法:取大鼠左、右肢长骨近端红骨髓为实验材料,分两组.用穿抽骨髓同时破坏部分红骨髓、Ficoll-paque分离液和IMDM培养基为实验组;穿抽骨髓不再破坏红骨髓,Percoll分离液和DMEM培养基为对照组.分别计数不同抽取骨髓方法的单个核细胞数量,计算不同分离液细胞密度,以及不同培养基的细胞贴壁率、铺展面积的平均值.结果:实验组的各项检测指标明显优于对照组.结论:穿抽破坏骨髓结构的内容物,Ficoll-paque分离液以及IMDM培养基的原代培养,都能分别提高收集单个核细胞数量.

炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基修复小肠黏膜急性辐射损伤

背景:间充质干细胞条件培养基被认为是干细胞移植的良好替代方案。既往研究表明,炎症因子的诱导激活能增强间充质干细胞多种生物学潜能,而正常状态的间充质干细胞可能由于免疫活性和迁徙能力不足,无法有效修复损伤组织。目的:探讨炎症预激活前后骨髓间充质干细胞条件培养基对急性辐射损伤小肠上皮治疗作用的差异。方法:分离、培养、鉴定SD幼鼠骨髓间充质干细胞,分别与正常对照和辐射损伤的小肠隐窝细胞株IEC-6在Transwell培养板中共培养24 h,预刺激的骨髓间充质干细胞继续单独培养48 h,收集到的上清液分别为正常状态间充质干细胞条件培养基(MSC-CM NOR)和辐射炎症预激活间充质干细胞条件培养基(MSC-CM IR)。将成年SD大鼠随机分为4组,正常对照组、辐射损伤组、MSC-CM NOR治疗组和MSC-CM IR治疗组,以14 Gy剂量一次性腹部局部照射制备急性小肠辐射损伤大鼠模型,模型制备后尾静脉注射和植入式胶囊渗透压泵腹腔植入联合给药。于治疗后第1,3,7天取小肠组织检测短回路电流和血清木糖水平观察小肠分泌、吸收功能变化。治疗后第3天取小肠组织行电镜观察超微结构改变,治疗后第1,3,5,7,14天取小肠组织行苏木精-伊红染色观察小肠黏膜组织学改变。记录各组大鼠生存状态及生存时间。结果与结论:输注MSC-CM IR后,大鼠小肠短回路电流差值、血清木糖水平较辐射损伤组升高,差异有显著性意义(P<0.05)。苏木精-伊红染色和电镜观察显示从治疗后第3天起MSC-CM IR组小肠黏膜病理改变明显减轻,上皮厚度、紧密连接间隙明显优于辐射损伤组。生存分析显示MSC-CM IR组生存率和平均生存时间明显改善(P<0.05),而MSC-CM NOR组的各项指标与辐射损伤组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明炎症激活状态下的骨髓间充质干细胞条件培养基可促进辐射损伤小肠结构和功能的修复。