cmpl在真性红细胞增多症患者骨髓CD34阳性细胞及血小板上的表达

本研究了解真性红细胞增多症(PV)患者血小板膜及骨髓CD34阳性细胞表面TPO受体(c-mpl)蛋白及骨髓造血细胞c-mpl mRNA表达情况。应用双色流式细胞术检测13例PV患者及15名正常对照者骨髓CD34阳性细胞表面c-mpl蛋白表达;应用单色流式细胞术检测15例PV患者及15名正常对照者血小板表面c-mpl蛋白表达;应用RT-PCR方法检查PV患者及正常对照者骨髓造血细胞c-mpl mRNA的表达情况。结果表明:CD34阳性细胞c-mpl蛋白表达在PV患者为0.99%±0.14%,与正常对照(0.92%±0.12%)相比无差别(p>0.05);血小板c-mpl蛋白表达在PV患者为20.33%±4.84%,与正常对照(23.50%±3.64%)相比无差别(p>0.05);骨髓造血细胞c-mpl mRNA与正常组相比也无明显差别(p>0.05。)结论:PV患者骨髓CD34阳性细胞、血小板膜c-mpl蛋白及骨髓造血细胞c-mpl的mRNA表达无明显异常。

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在MDS患者骨髓CD34阳性细胞中的表达

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34^+细胞表面胰岛素样生长因子I型受体(IGF-IR)的表达状况。方法:采用流式细胞术检测18例正常对照及100例MDS患者CD34^+细胞表面IGF-IR的表达。结果:100例MDS患者骨髓CD34^+细胞IGF-IR的平均表达率为(41.0±28.1)%,明显高于正常对照中的IGF-IR表达率(4.3±1.8)%(P<0.0001),其中22例高危组患者CD34^+细胞IGF-IR表达率较低危组(78例)明显增高[(66.5±27.8)%vs(34.5±24.9)%](P<0.0001);23例有染色体异常患者的CD34^+细胞的IGF-IR表达率较染色体正常组患者(77例)明显增高[(56.0±30.9)%vs(36.9±26.2)%](P<0.01)。结论:IGF-IR在MDS患者CD34^+细胞中过度表达,提示IGF-IR可能参与MDS的起源、发生及发展。IGF-IR在高危组及染色体异常组增高更明显,提示IGF-IR可能与细胞的恶性克隆增殖有关,有望为MDS患者的预后与转归的评估提供依据。

骨髓增生异常综合征CD34阳性细胞的免疫表型特征

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34阳性(CD34+)细胞免疫表型特征。方法应用一组系列相关单克隆抗体和四色流式细胞术二次设门策略,对20例MDS患者的骨髓细胞悬液CD34+细胞进行免疫表型分析。结果随着MDS的进展[难治性贫血/难治性贫血伴环状铁粒幼细胞→难治性贫血伴原始细胞增多→转化型原始细胞增多性难治性贫血(RA/RAS→RAEB→RAEBT)],在原始细胞群中的CD34+细胞比例逐渐增高(7.6%→40.1%→71.3%),各亚型之间有显著性差异(P<0.05)。在CD45 vs CD34散点图上二次设门取CD34+原始细胞行抗原表达的分析,异常表达HLA-DR及髓系抗原CD13、CD33和CD117、CD15比例减低。CD34在各亚型间有显著性差异(P<0.05)。结论二次设门策略能反映MDS原始细胞的免疫表型特征。

原子力显微镜观测CD34阳性细胞的形貌结构

目的用原子力显微镜观测正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面的形貌结构,并比较两者的异同。方法从健康人和M2b型白血病患者各3例骨髓标本中分离出单个核细胞,利用免疫磁柱法纯化CD34+细胞,流式细胞仪检测其纯度。用光学显微镜和原子力显微镜进行观测。结果光学显微镜下两种来源的CD34+细胞形貌相似。原子力显微镜下可观测到细胞表面有许多微绒毛突起,表面粗糙度在不同来源细胞内部呈正态分布,正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面在平均粗糙度、均方根粗糙度方面有显著差别。结论M2b型CD34+白血病细胞较正常CD34+细胞表面皱折程度显著降低。

鹿茸对大鼠下肢缺血模型CD_(34)^+、FLK-1^+阳性细胞比例影响

目的:观察鹿茸对大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞比例的影响。方法:将54只SD大鼠随机分为3组:鹿茸组18只、模型组18只、假手术组18只。鹿茸组和模型组均采用左下肢股动脉结扎及分支剔除术,造成大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支。鹿茸组术后按0.571 g·kg-1·d-1剂量灌服,连续14 d。检测各组术前1d、术后第1、3、7、14天5个时间点大鼠外周血酶肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平变化及双荧光阳性细胞(CD34+、FLK-1+)比例。结果:术后模型组外周血酶学指标CK、AST、LDH水平较假手术组均显著上升,术后第7、14天鹿茸组各项酶学指标水平较模型组及术后第1、3天均显著下降(P<0.05)。术后鹿茸组和模型组CD34+、FLK-1+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且鹿茸组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸可增加大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞的比例,改善下肢缺血状态,促进血管新生,其作用可能与其能增加外周血血管内皮祖细胞(EPCs)数量有关。

多发性骨髓瘤患者骨髓CD19阳性细胞数值与疗效的相关性

本研究分析多发性骨髓瘤(MM)骨髓中CD19(+)细胞与骨髓瘤细胞数目及疗效的关系,探讨MM骨髓CD19(+)细胞变化特点。采用流式细胞术检测63例初诊MM患者骨髓中CD19(+)细胞、CD38(++)CD45(-)细胞、CD38(++)CD45(-)CD56(+)细胞的比值,分析不同分期、不同分型上述细胞比值的差异,以及它们之间的相互关系;分析43例初治时骨髓中CD19(+)细胞、CD38(++)CD45(-)细胞、CD38(++)CD45(-)CD56(+)细胞的比值变化与经过VADM、VD方案治疗4个疗程后疗效的关系。结果表明,63例初治患者骨髓中CD19(+)细胞比值Ⅱ期高于Ⅲ期,CD38(++)CD45(-)CD56(+)细胞比值Ⅲ期高于Ⅱ期;IgA组CD19(+)细胞比值明显高于IgD组且有高于其他组的趋势,IgA组CD38(++)CD45(-)、CD38(++)CD45(-)CD56(+)明显低于其它组;63例初治患者骨髓中CD19(+)细胞与CD38(++)CD45(-)、CD38(++)CD45(-)CD56(+)细胞的比值均呈负相关关系(分别为r=-0.3304,p=0.0052;r=-0.2414,p=0.0441)。分析43例患者(总治疗组)及VD方案治疗组(VD组)中的有效组CD19(+)细胞比值均分别高于无效组,VD组中有效组CD38(++)CD45(-)比值明显低于无效组,CD38(++)CD45(-)CD56(+)有低于无效组的趋势;总治疗组中有效组CD38(++)CD45(-)、CD38(++)CD45(-)CD56(+)均有低于无效组的趋势。结论:MM患者骨髓中CD19阳性细胞的比值与病情、分期有关,对于判断MM预后可能有一定价值。

CD34阳性骨髓干细胞归巢兔栓塞肺组织

目的观察骨髓干细胞(BMSCs)动员后向栓塞肺组织归巢的情况,初步探讨BMSCs归巢栓塞肺组织的可能机制。方法选取30只健康的中国大耳白兔,雌雄不拘,随机分成2组:肺血栓栓塞症(PTE)组(模型组)、PTE+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员组(实验组),每组15只。经股静脉穿刺置管注入自体血栓,建立兔急性PTE模型。其中,模型组仅建立PTE模型;实验组在建立模型前4d每天及建立模型后即刻按10μg/(kg·d)皮下注射G-CSF,共5d。两组均于建立模型后24h处死动物,观察大体标本,行HE染色进行病理检查,用免疫组化法检测肺组织栓塞区、边缘区、正常区CD34及SDF-1的表达,使用医用图像处理系统对肺组织CD34和SDF-1的免疫组化染色切片进行图像分析,计算其相对含量。结果 (1)大体标本观察:两组兔肺组织均存在损伤性改变,表现为片状出血灶、局部肺组织苍白区、肺组织膨胀不全等。(2)光镜下病理观察:两组兔肺组织栓塞区均表现为肺间质水肿充血、肺泡腔出血渗出,其中实验组栓塞区肺间质中可见较多体积较大的单个核细胞浸润。(3)肺组织CD34免疫组化染色与图像分析结果:CD34主要表达在栓塞区,边缘区少量表达,正常区很少表达。实验组栓塞区CD34的表达高于模型组(P<0.01),且实验组栓塞区内浸润的CD34阳性单个核细胞较多,而模型组少见。(4)肺组织SDF-1免疫组化染色与图像分析结果:SDF-1主要表达在栓塞区,边缘区、正常区均无表达。实验组栓塞区SDF-1的表达高于模型组(P<0.01)。结论 PTE发生后存在CD34阳性BMSCs向栓塞肺组织归巢现象;PTE发生后肺组织栓塞区SDF-1表达加强可能是吸引CD34阳性BMSCs归巢栓塞肺组织的机制之一;使用G-CSF动员后能加强PTE后肺组织栓塞区SDF-1的表达,从而吸引更多的CD34阳性BMSCs归巢到栓塞肺组织。

CD34阳性细胞内部结构观察

目的利用电子显微镜以及原子力显微镜观察比较健康人和初发急性髓细胞白血病患者来源的CD34阳性细胞内部结构。方法将健康人和初发急性髓细胞白血病(M2b)患者各1例骨髓中提纯出来的CD34阳性细胞制成树脂包埋块,利用超薄切片机切成厚度为60nm的薄片,分别进行透射电子显微镜和原子力显微镜观察。结果研究对象纯化前CD34阳性细胞平均比例为(1．63±0．25)％,纯化后的平均比例为(95±2．4)％。电子显微镜和原子力显微镜均可观察健康人和初发急性髓细胞白血病患者的CD34阳性细胞内部结构,不能发现两种来源细胞有特异性差别。当原子力显微镜成像范围在10μm×10μm时,可分辨出核仁和部分细胞质内线粒体等细胞器;当原子力显微镜成像范围在2μm×2μm时,细胞内部结构变模糊,被细小的树脂颗粒所掩盖,不能分辨细胞结构。结论电子显微镜和原子力显微镜均可观察细胞的内部结构,不能发现健康人和初发急性髓细胞白血病患者两组来源的CD34阳性细胞内部有特异性差别,原子力显微镜观测细胞内部结构效果并不优于电子显微镜。

细胞因子在CD34阳性骨髓细胞中的表达(英文)

CD34^+细胞包含有造血干/祖细胞,而造血干/祖细胞能被IL-3,GM-SCF,G-CSF等诱导分化与增殖。正常的CD34^+细胞是否参与一些细胞因子的产生尚未被阐明。我们采用逆转录-聚合酶链反应分析了经流式细胞仪分选出的正常骨髓CD34^+细胞IL-1β,IL-3,IL-4,IL-6,GM-CSF,TNF-α,TNF-β及c-kit基因的表达,并且分析了重组IL-1β,IL-3,IL-7,GM-CSF,PIXY321(IL-3/GM-CSF融合蛋白)及干细胞因子(SCF)对这些细胞因子的调节作用。结果发现新分选出的CD34^+细胞表达较高水平的IL-1β,c-kit mRNA及低水平的IL-3,TNF-α,TNF-βmRNA。经外源性的细胞因子刺激后,IL-1β,TNF-α及TNF-βmRNA均有不同程度的上调,唯IL-7能使GM-CSF mRNA的表达变为阳性,IL-7亦能显著增强IL-6基因的表达。所有这些细胞因子对c-kit及IL-3基因表达均无明显作用。

CD34阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用

ＣＤ３４阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用尉达民，赵昕，祝阳北京医科人学第三医院血液科安秀云，王良绪自体外周血干细胞移植（Ａｕｔｏ－ＰＢＳＣＴ）需要多次分离外周血干细胞。达到足够重建造血功能的干细胞量。ＣＦＵ－ＧＭ集落培养是测定造血干细胞数的常规方...

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^+细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。

胃癌微环境对大鼠骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响

背景:临床胃癌组织及裸鼠体内致瘤组织分离得到的胃癌间质干细胞(GC-MSCs),其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,并证明是肿瘤微环境的重要组成部分,可促进肿瘤的生长,作者推测骨髓间充质干细胞在胃癌微环境中生物学特性可能发生变化。目的:观察胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响。answell方法:设立骨髓间充质干细胞单独常规培养为对照组,实验组采用tr小室将人胃癌BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养建立胃癌微环境,倒置相差显微镜观察骨髓间充质干细胞形态的变化、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察骨髓间充质干细胞的增殖率、流式细胞术(FCM)检测骨髓间充质干细胞周期及表面抗原CD34、CD44的表达。结果与结论:(1)实验组骨髓间充质干细胞排列紊乱,不规则,细胞间连接疏松,细胞变细、变长,胞核变小,呈团生长,与人胃BGC-823癌细胞形态有相似之处;(2)G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加(P<0.01)、G2/M期细胞比率显著增加(P<0.05);(3)实验组骨髓间充质干细胞的CD44阳性表达率显著降低,CD34阳性表达率显著降升高(P<0.01);(4)结果表明,将人胃癌BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养模拟胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长增殖及CD34、CD44表达有显著影响,有向胃癌细胞恶性转化的趋势。

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原表达的影响

目的探讨四物汤对60 Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原分子表达的影响。方法用60 Coγ射线全身照射小鼠或腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型 ,实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组 ,荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪测定CD 34+ 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,同时做小鼠骨髓细胞集落培养。结果与结论四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生 ,增加CD 34抗原分子的表达 。

冠状动脉自体骨髓CD34^+干细胞移植治疗心绞痛:随机对照临床分析

背景:大量基础和临床研究结果提示,骨髓CD34+干细胞具有明显的促进血管新生作用。经作者查新检索,目前国际上仅有1篇小样本心腔内注射骨髓CD34+干细胞治疗心绞痛的报道。目的:评价冠状动脉内CD34+干细胞移植治疗心绞痛的安全性和有效性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2007-07/2008-07解放军北京军区总医院心内科住院的32例心绞痛患者,按患者意愿分为治疗组和对照组,移植前1个月内均无急性心肌梗死病史,心绞痛加拿大心血管学会分级为Ⅱ～Ⅳ级,两组患者基线资料比较无统计学差异(P>0.05)。方法:治疗组患者在接受最佳药物治疗的基础上,于常规PCI术后,行冠状动脉内自体骨髓CD34+干细胞移植,于冠状动脉病变近端注入CD34+干细胞悬液15mL,细胞数为(1.0～6.1)×106。对照组患者仅接受最佳药物治疗和导管置入。主要观察指标:移植后两组患者的疗效指标比较及心肌血液灌注情况。结果:骨髓干细胞移植后,治疗组心绞痛发作频率、硝酸甘油的用量、运动时间及加拿大心血管学会心绞痛分级等各项疗效指标均明显优于对照组(P<0.001～0.05),且移植后6个月时的治疗效果优于移植后3个月。移植后6个月,治疗组患者心肌灌注缺损面积明显小于对照组(P<0.01)。随访6个月内,未观察到因冠状脉动脉内注射而导致的心肌梗死、心肌酶升高、心肌穿孔、心包积液、室性心动过速或室颤等严重不良事件发生。结论:冠状动脉内注射自体骨髓CD34+干细胞后,可显著改善心绞痛患者心肌血液灌注,安全有效。

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34^-和CD34^+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响(英文)

本研究分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例、CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34+细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明:①MDS高危组患者骨髓CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为(80.36±1.82)%,明显高于CD34+细胞的(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34+细胞的增殖率为(50.67±3.37)%,明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);④CD34+、CD34-细胞的A/P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A/P值在MDS高、低危组均明显高于CD34+细胞的A/P值(P<0.05)。此外,CD34+细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34+细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。

银屑病患者骨髓CD34^＋细胞定向分化的T细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨家族史阳性的银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞对表皮角质形成细胞(KC)增殖调控蛋白表达的影响。方法:将银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞经链球菌超抗原活化后与KC共培养,分别采用免疫组化法及ELISA法检测KCC-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达及培养上清白介素(IL)-8、干扰素(IFN)-γ水平。结果:①受银屑病患者CD34+细胞定向分化T细胞作用的KCC-myc及Ki67蛋白表达与自然增殖组及正常人CD34+细胞定向分化的T细胞作用组相比显著增强(P<0.05),而bcl-xL及p53蛋白表达3组间的差异无统计学意义(P>0.05);②受正常人CD34+细胞定向分化T细胞作用的KCC-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达与自然增殖组比较差异亦无统计学意义(P>0.05);③银屑病CD34+细胞定向分化的T细胞作用组培养上清IL-8及IFN-γ水平显著高于正常对照组(P<0.01)。结论:银屑病患者骨髓造血细胞定向分化的T细胞可影响KC增殖状态,显示类似银屑病外周血T细胞的活性特点。