骶髓后连合核接受盆内脏伤害性信息传入的形态学证明

为阐明投射至骶髓后连合核的盆内脏初级传入中是否含有传递伤害性信息成分，本研究综合运用特异性标记初级传入Ｃ纤维的ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ跨节追踪技术，神经干局部涂抹Ｃ纤维毒素ＣａＰｓａｉｃｉｎ并结合ＳＰ免疫组化方法，研究了猫投射至骶髓后连合核的盆神经初级传入纤维中是否含有传递伤害性刺激的成分；同时观察了秋水仙素处理的骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４标记的初级传入神经元与ＳＰ免疫阳性神经元的关系。结果如下：（１）向盆神经注入ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ，骶１～３后根节内出现平均直径３４μｍ的标记细胞，后连合核内出现密集的标记终末，电镜下证明通过Ｌｉｓｓａｕｅｒ氏束进入脊髓内的标记纤维均为无髓纤维；（２）对盆神经进行局部Ｃａｐｓａｉｃｉｎ处理，引起后连合核内的ＳＰ免疫阳性纤维和终末明显减少；（３）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＦＩＴＣ标记细胞有１７％同时呈ＳＰ免疫阳性；（４）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ标记的盆内脏初级传人神经元的３９％同时呈ＳＰ免疫阳性。本研究结果在形态学上证实了骶髓后连合核接受盆腔内脏伤害性信息的传入，它可能是中继和整合盆内脏伤害性信息的低级中枢。

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱大鼠凋亡相关因子Bcl-2、Bax的影响

目的观察电针次髎、中极、三阴交穴对骶髓损伤后神经源性膀胱(逼尿肌无反射型)大鼠膀胱组织中B淋巴细胞蛋白-2(bcl-2)及Bcl相关X蛋白(bax)表达的影响,以探讨电针治疗该病的可能机制。方法将SD雌性大鼠40只,随机抽取10只为空白组,其余造模成功后随机分为模型组、电针穴位组和电针对照点组,每组10只。术后第15天起电针穴位组、电针对照点组分别施以每日1次治疗,治疗7次后取膀胱组织行Elisa法检测bcl-2及bax在膀胱组织中的表达。结果电针治疗后各组膀胱逼尿肌组织中,模型组、电针穴位组和电针对照点组bcl-2及bax表达均较空白组高(P<0.01),电针穴位组和电针对照点组bcl-2表达较模型组升高(P<0.01),bax表达较模型组降低(P<0.01),且电针穴位组疗效明显优于对照点组(P<0.01)。结论电针次髎、中极、三阴交穴可提高骶髓损伤后NB大鼠膀胱组织中bcl-2的表达、抑制bax的表达。电针对骶髓损伤后神经源性膀胱的治疗作用可能是通过促进bcl-2、抑制bax的表达以部分抑制膀胱平滑肌细胞凋亡,从而保护受损膀胱逼尿肌组织。

周边γ-氨基丁酸通过GABA_B受体调控骶髓后联合核神经元谷氨酸能突触

目的研究突触周边γ-氨基丁酸(ambient GABA)通过GABAB受体调控骶髓后联合核(SDCN)神经元谷氨酸能突触的机制。方法在急性切取的骶段脊髓薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs),将GABAB受体用其特异性受体拮抗剂CGP52432阻断,观察谷氨酸突触终末上的GABAB受体被周边GABA作用的影响。结果在突触后GABAB受体被从胞内阻断的条件下,再灌流CGP52432阻断谷氨酸能突触前GABAB受体,可增加刺激引发的EPSCs(eEPSCs)幅度;改变配对刺激的两个EPSC比率(paired-pulse ratio,PPR),并激发沉默突触(silent synapse)。但CGP52432对微小兴奋性突触后电流(mEPSCs)无影响。结论位于SDCN神经元谷氨酸能突触前的GABAB受体受周边GABA调控。这种影响参与调节谷氨酸释放并可能参与痛觉信息在脊髓水平的传递。

内脏和躯体初级传入冲动在猫骶髓后连合核的汇聚

用玻璃微电极细胞外记录的方法，观察了在电刺激猪盆神经和胫神经或机械性刺激会阴部时骶髓后连合核神经元自发放电频率的变化．共记录了80个单位放电神经元，其中13个为无关单位．电反应类型有3种：长潜伏期长串反应，短潜伏期长串反应，抑制性反应．在所观察的对刺激呈有效反应的67个单位中，30个（44．78％）对躯体和内脏刺激均起反应，其中，12个对盆神经和胫神经传入冲动都起反应；18个对盆神经和会阴部躯体感受野的传入呈汇聚性反应．对会阴部感受野施加各种机械性刺激，鉴定此汇聚神经元为WDR神经元．67个有效反应单位中还有5个（7.46％）只对内脏传入冲动，32个（47.76％）仅对躯体传入冲动做出反应．本研究从电生理学上验证了本教研室在形态学上发现的盆腔内脏（膀胱）初级传入和坐骨神经躯体初级传入在骶髓后连合核神经元的汇聚，并对汇聚的类型和意义进行了观察和讨论．

5-HT增强大鼠骶髓后连合核神经元牛磺酸激活的全细胞电流

应用制霉菌素穿孔全细胞记录方法，研究了５－羟色胺对急性分离的大鼠髓后连合核神经元磺酸激活的全细胞电流的调控。

盆神经和阴部神经传入在大鼠腰骶髓的相互作用

应用条件 检验刺激技术观察时间依赖性抑制现象是研究传入信息相互作用的方式之一。用 1 5～ 3倍阈刺激强度的电脉冲交替刺激麻醉、麻痹大鼠的盆神经 (Pe)和阴部神经 (Pu) ,以玻璃微电极在L6 S1节段脊髓背角会聚神经元上记录细胞外放电。条件输入可对深层 ( >30 0 μm)单位的检验反应产生时间依赖性抑制效应 ,产生抑制的刺激间期为 1～ 36 0ms,Pe为条件刺激时较长。浅层细胞 ( <30 0 μm)发生抑制的间期为 1～ 3ms,无明显时间依赖性抑制。C5 6水平冷冻阻滞神经传导可部分减弱深层单位的时间依赖性抑制 ,Pe为条件刺激时减弱更明显。结果提示 ,深层腰骶髓背角神经元中Pe传入对Pu传入的抑制更强 。

电针足三里穴对溃疡性结肠炎大鼠骶髓后联合核内神经元和胶质细胞形态学变化的影响

目的观察电针足三里穴对溃疡性结肠炎(UC)大鼠骶髓后联合核(SDCN)内神经元和胶质细胞形态学反应的影响,初步探讨SDCN内神经元和胶质细胞参与针刺调控UC的中枢神经机制。方法48只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(对照组)、溃疡性结肠炎组(UC组)、UC+电针足三里穴组(足三里穴组)和UC+电针非经穴组(非经穴组),足三里穴组根据针刺的时间又分为1、3、5d 3个亚组,每组8只大鼠。采用三硝基苯磺酸、乙醇液灌肠法诱导建立UC大鼠模型。实验结束后处死各组动物,取骶髓切片,采用抗Fos/抗GFAP双标记(分别标记神经元和星形胶质细胞)和抗OX42(标记小胶质细胞)的ABC法进行免疫组织化学染色。结果除对照组外,Fos阳性神经元、GFAP阳性星形胶质细胞和OX42阳性小胶质细胞的表达均集中对称分布于SDCN内。以UC组和非经穴组的神经元和胶质细胞的阳性免疫反应表达最高,而足三里穴组各时间点的阳性表达均较前两组明显减少(P<0.01)。电针足三里穴组各时间点比较,5d组较1d组阳性表达明显减少(P<0.05)。结论骶髓后联合核内免疫阳性神经元和胶质细胞参与了电针足三里穴对UC大鼠的抗炎作用过程;电针调节神经元和胶质细胞的功能活动与针刺时间有关。

骶髓后连合核内躯体初级传入粗纤维的证明及其意义探讨

近 2 0年来的研究表明 ,骶髓后连合核是接受和中继盆腔脏器初级传入信号的重要内脏感觉核团。通过盆神经传入脊髓的盆腔脏器初级传入神经纤维除一部分投射于中间带外侧核区参与排尿反射活动的调控外 ,其余部分基本上都投射于骶髓后连合核。本文作者等又曾发现躯体神经 (坐骨神经、阴部神经 )的初级传入粗纤维有一部分经后索投射于后连合核 ,推测这些躯体初级传入粗纤维可能与内脏传入细纤维汇聚于后连合核神经元并在此进行机能的整合、产生新的神经效应。但是投射于后连合区的躯体初级传入粗纤维 ,必须在电镜下直接证实。为此 ,本研究通过透射电镜及 HRP标记电镜技术探索了阴部神经躯体初级传入粗纤维在后连合核区的存在 ,并用 Philips CM-10 0电镜附件 Measuring装置测量了这种纤维的轴突直径和髓鞘厚度、通过计算求得了它们之间的比例 ( A/M值 ) 。

投射于腰骶髓后连合核的传递伤害性刺激的初级传入纤维的来源探索—c-fos表达方法

本课题组的既往研究曾发现 ,膀胱的初级传入投射纤维中有一部分传递伤害性刺激 ,投射于腰骶髓的后连合核。本研究的目的是通过比较盆腔内脏和后肢躯体性结构的伤害性刺激诱导 FOS阳性反应在大鼠后连合核的表达状况 ,藉以确定投射于后连合核的传递痛信号的初级传入的来源。本实验分别向盆腔内脏的膀胱和直肠以及坐骨神经支配的小腿外侧皮肤及腓肠肌等四个不同部位注入 2 %福尔马林溶液 ,用免疫组织化学方法观察了腰骶段脊髓内 FOS的表达状况 ;并向此四部位注射生理盐水作为对照。结果证明 ,将 2 %福尔马林溶液注入膀胱或直肠内腔后可主要诱导 L6,S1 ,S2 节段后连合核出现大量 FOS阳性细胞核( 2 5～ 95个 /片 ) ;向小腿外侧皮肤或腓肠肌注射福尔马林溶液 ,则主要在背角浅层出现浓密的 FOS阳性细胞核而在后连合核仅发现极少量的 FOS阳性细胞核 ( <5个 /片 ) ;在不给予福尔马林刺激的对照组 ,后连合核内也出现极少量散在的 FOS阳性细胞核 ( <3个 /片 )即后连合核内出现极少量的传递躯体伤害性刺激的传入成分与不给予福尔马林刺激的对照组结果无明显差别 ,这种极少量的神经元在神经机能的传递上不应有何作用。因而 ,本研究结果提示 。

大鼠腰骶髓中间带外侧核向臂旁核的投射──BDA顺行追踪研究

为了解盆内脏器感觉信息的传递道路，用结合生物素的葡聚糖胺（ＢＤＡ）作为顺行追踪剂，研究了大鼠腰骶髓中间带外侧核向脑桥臂旁核的投射。将ＢＤＡ注射于中间带外侧核后，顺行标记的轴突终末出现于双侧的臂旁核，同侧略多。大量的ＢＤＡ标记的轴突终末出现于臂旁外侧核的外侧内核和外侧中央核，少量分布于外侧背核。此外，在臂旁内侧核的中段及ＫＦ核内也发现有少量标记终末。上述结果说明，大鼠腰骶髓中间带外侧核的神经元主要投射至臂旁外侧核外侧内核和外侧中央核。

足底伤害性刺激条件下大鼠腰骶髓背根节内SP mRNA和α-CGRP mRNA的表达

将Formalin注入大鼠一侧后肢足底，分别于术后不同时间（0．5、1、2、4、8、12、24、48h和5d）将动物断头取材，用放射性同位素[α－(35)S]dATP标记的寡核苷酸探针进行原位杂交组织化学实验，检测大鼠腰骶髓（L5、L6和S1）背根节内SPmRNA和α－CGRPmRNA表达阳性细胞占整个背根节细胞的百分率。结果显示：注射后2h背根节内SPmRNA和α－CGRPmRNA表达阳性细胞百分率即明显增高；分别于12h（α－CGRPmRNA阳性细胞表达率增加了3．3％，P＜0．01）和24h（SPmRNA阳性细胞表达率增加了3．5％，P＜0．01）达到高峰，其中SPmRNA可持续到48h后，而α－CGRPmRNA则在12h后逐渐回落；5d时二者的表达阳性率均降至术前水平．提示SP和α－CGRP的mRNA的表达水平与伤害性刺激的施加有关，从而进一步证明了SP和CGRP在伤害性刺激信息的传递过程中具有重要作用．

大鼠腰骶髓后连合核SP受体免疫阳性神经元与SP免疫阳性终末的突触联系

应用免疫组织化学双重反应的方法研究了大鼠腰骶髓后连合核内ＳＰ受体免疫阳性神经元在光、电镜下的特征及其与ＳＰ免疫阳性终末的突触联系。结果证明，ＳＰ免疫阳性终末和ＳＰ受体阳性胞体及树突均密集分布于后连合核区。在光镜下双重免疫反应阳性结果显示二者重叠分布，且可见大量的ＳＰ样免疫阳性终扣与ＳＰ受体阳性胞体或树突紧密接触。电镜下证明ＳＰ受体免疫阳性产物不仅位于突触后部位而且分布于胞体和树突的非突触部位，有４２％的ＳＰ受体阳性树突与ＳＰ阳性终末形成突触连接。在此未发现ＳＰ受体免疫阳性终末。通过一系列实验证明：腰骶髓后连合核神经元接受由ＳＰ介导的外周伤害性信息的传入，且其主要为盆腔脏器内脏初级传入成分。

家兔躯体(坐骨神经)和内脏(膀胱)初级传入神经元向骶髓后连合核区的投射—HRP跨越神经节追踪观察

本文作者研究了膀胱(内脏)及坐骨神经(躯体)初级传入纤维向脊髓的投射。发现内脏传入纤维和躯体本体觉粗纤维都向S_(2)—S_(4)节段后连合核区投射,两者的投射区有重叠。推测内脏传入和躯体本体觉传入的纤维在后连合核可能有汇聚。另外,根据躯体本体党纤维在髓内跨节段分布的范围和位置以及盆腔脏器初级传入的投射位置,结合文献分析和讨论了脊髓后连合核的位置和形态。提出在脊髓内存在着一个和脑部的孤束核在形态及功能上酷似的脊髓后连合核的见解。它在吻侧以对称的狭细细胞带起于胸髓下段,向尾侧逐渐扩大位于Ⅵ层内侧部,到骶髓成为位于中央管背外方的核团,S_(3)以下两侧者合并形成位于中央管背侧后连合区的较大核团,一直可追踪到尾髓。

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱尿潴留大鼠尿动力学的影响和机制研究

目的研究电针对骶髓损伤后神经源性膀胱尿潴留大鼠尿动力学的影响及作用机制。方法选择30只健康雄性大鼠,按照随机数字表法分为模型组、对照组、电针组,每组10只,对照组不建模、不治疗,模型组仅建模、不治疗,电针组建模后接受电针治疗,治疗后检测三组大鼠尿动力学变化及其他相关指标水平。结果模型组、电针组顺应性、漏尿点压力、膀胱基础压、膀胱最大容量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);电针组上述指标均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、电针组大鼠脊髓组织热休克蛋白20(HSP-20)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)的mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);电针组大鼠脊髓组织HSP20的mRNA水平高于模型组,而PTEN的mRNA水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、电针组B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、蛋白激酶B(Akt)水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),模型组、电针组BCL2-Associated X蛋白质(Bax)、叉头框蛋白O1(FOXO1)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);电针组Bax、FOXO1、Caspase-9水平均低于模型组,Bcl-2高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),电针组、模型组Akt比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针治疗骶髓损伤后神经源性膀胱尿潴留大鼠能改善其尿动力学,具体作用机制分析与抑制PTEN表达、促进HSP20磷酸化与表达,并进一步抑制凋亡通路、提高Akt活性具有相关性。

大鼠腰骶髓内一氧化氮合酶阳性结构与接受膀胱伤害性刺激神经元的关系

本文应用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法和FOS免疫组化法相结合的双重反应技术，研究了大鼠腰骶髓内的NOS阳性结构的分布及其与膀胱伤害性刺激诱发的FOS表达神经元的关系。结果发现NOS阳性纤维和终末密集分布于后角Ⅰ层和Ⅱ层，其它部位稀少；NOS阳性神经元胞体与膀胱伤害性刺激诱发的c-fos原癌基因蛋白表达的阳性神经元在腰骶髓（L6～S1）分布区域校相似，主要分布于与伤害性信号传递过程密切相关的后角Ⅱ层、中央管周围灰质（包括骶髓后连合核）和中间带外侧核．在此三部位分别有18．7％、11．6％和22．6％和NOS阳性神经元同时呈FOS阳性；有5．56％、2．67％和3％FOS阳性神经元同时是NOS阳性。结合文献和本文结果讨论了NO可能参与脊髓伤害性信号传递和调控的作用．

SKF97541抑制大鼠骶髓后联合核神经元

目的研究GABAB受体特异性激动剂SKF97541对骶髓后联合核(SDCN)神经元的作用。方法在大鼠骶段脊髓横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元。电流钳记录模式下,观察SKF97541对神经元膜电位和动作电位发放的影响。电压钳模式下,观察谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs)对SKF97541处理的变化。结果SKF97541(0.5μmol.L-1)通过作用于GABAB受体,减少SDCN神经元动作电位发放,同时促进细胞膜超极化。SKF97541在电压钳模式下,减少谷氨酸介导的微小EPSCs的频率,但对振幅无影响,提示SKF97541通过作用于突触前GABAB受体抑制谷氨酸释放。突触前刺激引起的突触后电位,也被SKF97541抑制。结论在骶髓后联合核,SKF97541通过作用于突触后GABAB受体,直接抑制神经元的兴奋性和动作电位发放;并通过突触前GABAB受体,抑制谷氨酸的释放。以上结果提示SKF97541的抑制作用可能抑制骶髓后联合核神经元对伤害性信息的传递。

P物质对大鼠骶髓后连合核神经元甘氨酸激活的氯电流的调控(英文)

采用制霉菌素穿孔膜片箝技术， 研究了Ｐ物质（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ，ＳＰ） 对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元士的宁敏感性甘氨酸（ｇｌｙｃｉｎｅ ，Ｇｌｙ） 反应的调控作用。在箝制电压为－ ４０ ｍＶ时，ＳＰ在１ ｎｍｏｌ／Ｌ～１ μｍｏｌ／Ｌ之间呈浓度依赖性地增强３０ μｍｏｌ／Ｌ甘氨酸激活的氯电流。ＳＰ既不改变ＩＧｌｙ 的翻转电位， 也不影响Ｇｌｙ 与其受体的亲和力。Ｓｐａｎｔｉｄｅ 和选择性ＮＫ１ 受体拮抗剂，Ｌ６６８ ，１６９ ， 可阻断ＳＰ的增强作用， 而选择性ＮＫ２ 受体拮抗剂，Ｌ６５９ ，８７７ 则不能阻断ＳＰ对ＩＧｌｙ 的增强作用， 提示ＳＰ对ＩＧｌｙ 的增强作用是由ＮＫ１ 受体介导的。在不同的神经元上，ｃｈｅｌｅｒｙｔｈｒｉｎｅ 或ＫＮ６２ 可去除ＳＰ对ＩＧｌｙ 的增强作用， 提示蛋白激酶Ｃ或钙离子／ 钙调素依赖性的蛋白激酶Ⅱ可能参与了ＳＰ对ＩＧｌｙ 增强作用的胞内机制。以上结果提示，ＳＰ可能通过增强Ｇｌｙ 的反应而抑制脊髓伤害性信息的传导。

SP,CGRP,ENK样阳性纤维终末在猫骶髓后连合核内的分布特征及超微结构

本实验用免疫组化电镜技术对骶髓后连合核中SP祥、CGRP样、L-ENK样阳性终末进行了观察,结果表明:SP样阳性终末主要含圆形清亮小泡,间有少量颗粒囊泡,主要与中、小树突形成不对称型轴-树突触(93%);还可见到不对称型轴-体突触(5%);也可见到少量的轴-轴突触(2%),SP样阳性终末为突触后成分。CGRP样阳性终末以含圆形清亮小泡为主,有的终末内混有颗粒囊泡。大多数终末(89%)与树突构成轴-树突触,但以远侧树突为主;也有少数(6%)的CGRP样阳性终末与胞体形成轴-体突触;还观察到由阴性终末与CGRP样阳性终末构成的轴-轴突触。L-ENK样阳性终末以含圆形清亮小泡为主,有时可见散在的颗粒囊泡,多与中、小树突形成不对型轴-树突触(92%);也观察到轴-体突触(5%)和轴-轴突触(3%)。

辣椒素受体参与骶髓后联合核神经元突触传递

目的研究辣椒素受体对大鼠骶髓后联合核(SDCN)神经元突触传递的影响。方法在脊髓骶段横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs)和γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性突触后电流(IPSCs),比较激动辣椒素受体后上述突触电流的变化;观察激动辣椒素受体对SDCN神经元动作电位发放的影响。结果辣椒素受体被其特异性激动剂辣椒素(1μmol.L-1)激动后,自发EPSCs(sEPSCs)的频率和振幅均有明显增加(P<0.05,n=17)。在河豚毒素(0.5μmol.L-1)存在的条件下,辣椒素明显增加微小EPSCs(mEPSCs)的频率(P<0.01,n=13),但对mEPSCs的振幅无影响(P>0.05,n=13),提示辣椒素的作用在突触前。辣椒素也明显增加动作电位发放(P<0.05,n=19)。上述作用均可被辣椒素受体特异性拮抗剂capsazepine(10μmol.L-1)阻断。辣椒素也增加GABA能的自发IPSCs(sIPSCs)的频率(P<0.05,n=20),但对其不依赖动作电位的微小IPSCs(mIPSCs)的频率或振幅均无作用(P>0.05,n=9)。结论在SDCN,辣椒素受体主要表达于兴奋性突触终末;激动辣椒素受体影响兴奋性和抑制性突触活动,并可能参与痛觉信息在脊髓水平的传递和调制。

锌离子对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元GABA_A受体介导电流的抑制作用(英文)

采用制霉菌素穿孔膜片箝技术，研究了锌离子（Zn2+）对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元GABAA受体介导电流的作用。结果表明：（1）在箝制电压为-40mV时，GABA可通过GABAA受体介导产生内向电流；（2）此电流可被Zn2+呈非电压依赖性可逆地阻断；（3）在Zn2+存在的情况下，GABA的浓度-效应曲线平行右移。上述结果提示，Zn2+可能通过变构调控机制对GANAA介导的反应产生抑制作用。