颞下颌关节骨关节病髁状突软骨细胞体外培养及细胞生物学特性研究

目的 :从兔的颞下颌关节骨关节病模型动物获得髁状突软骨细胞并行体外培养。方法 :采用部分关节盘手术切除的方法制造颞下颌关节骨关节病模型 ,组织大体观察、超微结构观察和组化检测方法确定骨关节病的存在。在此基础上 ,通过机械分离、胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法从骨关节病髁状突软骨组织中获得软骨细胞 ,进行体外环境下的贴壁培养 ;通过软骨细胞特异性蛋白的免疫组化方法进行细胞鉴定。四甲基偶氮唑盐法比较病理模型细胞与正常细胞的增殖能力差异。结果 :上述颞下颌关节骨关节病模型全面地模拟了骨关节病变关节软骨组织的特征 ;利用机械分离、胰蛋白酶胶原酶联合消化的方法成功地从骨关节病髁状突软骨组织中分离出软骨细胞并在体外贴壁条件下培养成活 ;应用特异性的Ⅱ型胶原多克隆抗体和聚合性糖胺多糖单克隆抗体对培养细胞进行免疫组化检测鉴定 ,均显示阳性。骨关节病髁状突软骨细胞的增殖能力高于正常细胞。结论 :成功地建立了骨关节病髁状突软骨细胞的体外模型 ;骨关节病早期的髁状突软骨细胞表现出增殖活跃的特性。

压力对体外培养下颌髁状突软骨细胞基质中蛋白多糖合成的影响

【目的】探讨机械压力对体外培养兔下颌髁状突软骨细胞基质中蛋白多糖合成的影响。【方法】利用自制压力装置对体外培养兔下颌髁状突软骨细胞施以不同压力,收集细胞基质中的蛋白多糖,以硫酸咔唑法测定蛋白多糖代谢产物葡萄糖醛酸的含量,间接反映软骨细胞基质中蛋白多糖合成变化情况。【结果】-0.05 MPa组中葡萄糖醛酸含量高于其余各组(P< 0.05),持续作用10min后,葡萄糖醛酸含量最高;而0.1 MPa组葡萄糖醛酸含量低于其余各组(P<0.05)。【结论】-0.05 MPa的压力持续作用10 min,能促进兔下颌髁状突软骨细胞蛋白多糖的合成代谢,可用于软骨组织工程种子细胞的培养。

兔下颌骨髁状突软骨细胞体外培养及生物学特性的研究

为探讨兔下颌骨髁状突软骨细胞的体外培养方法及其生物学特性 ,用胰酶及胶原酶联合消化法获取软骨细胞 ,并在DMEM培养基中进行原代及传代培养 ;通过形态学观察及免疫组织化学染色对软骨细胞的贴壁率、生长曲线及表型等细胞生物学特性进行了研究 .结果 :所获软骨细胞主要呈多角形 ,第 3代软骨细胞 12h贴壁率达 95% ,软骨细胞倍增时间约 55 1h ,6代以内软骨细胞的II型胶原蛋白稳定表达 .结果表明 :本方法所获软骨细胞具有稳定、良好的生长特性 .

静压力对新生SD大鼠髁状突软骨细胞增殖影响的体外实验研究

目的:探讨不同静压力对髁状突软骨细胞增殖的影响.方法:对培养到第三代的新生SD大鼠髁状突软骨细胞加载0、12、24、36 kPa的静压力1 h后立即收集样本,用流式细胞仪分析各样本各增殖周期DNA含量变化,计算细胞增殖活性指数.结果:12、36 kPa静压力能降低髁状突软骨细胞的增殖活性.24kPa静压力能增加髁状突软骨细胞的增殖活性.结论:静压力对髁状突软骨细胞的增殖活性具有双重效应,即压力过大过小均不利于软骨细胞的增殖,适当静压力能促进软骨细胞的增殖.

rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF

髁突软骨细胞受压力刺激前后的差异蛋白质电泳分析

目的:建立体外培养的髁突软骨细胞加载压力刺激前后双向电泳差异表达谱。方法:利用已建立的髁突软骨细胞的体外培养模型,抽提各组细胞总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立压力刺激前后髁突软骨细胞双向电泳差异表达谱。结果:加压组的体外培养的髁突软骨细胞蛋白质双向电泳表达谱与对照组的相比具有显著性的差异,主要表现为图谱斑点的增减以及部分斑点的染色面积和染色深浅发生了明显变化,本实验共发现了10个加压后差异表达蛋白点,其中3个在加压培养后表达消失,1个在加压培养后出现表达,4个在加压培养后表达减弱,有2个蛋白点呈进行性表达增强。结论:压力刺激髁突软骨细胞细胞会造成其表达差异性的蛋白质。

大鼠下颌前导后髁突软骨组织中BMP-2的含量变化研究

目的探讨下颌前导对大鼠髁突软骨细胞骨形成蛋白-2(BMP-2)含量的影响。方法 64只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组大鼠全天佩戴自制的前导装置,对照组不佩戴矫治器。于第0、1、3、5天及第1、2、4、8周分别处死各组大鼠,应用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测、分析大鼠髁突软骨内BMP-2的含量变化。结果 (1)与对照组比较,实验组大鼠髁突软骨BMP-2含量增高,差异有统计学意义(P=0.000)。随加力时间进展,BMP-2含量也随之改变,各时间点BMP-2含量比较差异有统计学意义(P=0.011)。(2)下颌前导加载后髁突软骨细胞BMP-2含量与时间呈二次项(抛物线)模型趋势,体现一定的时间节律(P=0.000)。结论下颌前导能够促进髁突软骨细胞BMP-2的释放含量,从而可能参与髁突软骨的骨改建过程。