YAP表达抑制对髁突软骨干细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究YAP表达抑制对髁突软骨干细胞(FCSC)增殖和凋亡的影响,为深入理解颞下颌骨关节炎(TMJOA)病理机制提供线索。方法:分离鉴定大鼠FCSC,利用小干扰RNA(siRNA)体外转染FCSC抑制YAP表达,利用CCK-8法、流式细胞分析分别检测YAP表达抑制对FCSC增殖、细胞周期及凋亡率的影响。建立大鼠TMJOA模型,关节腔注射YAP抑制剂维替泊芬或不做处理,利用免疫荧光共染检测TMJOA下YAP表达抑制对FCSC数量的影响。结果:抑制YAP表达后CCK-8检测结果显示FCSC增殖活性显著抑制(P<0.05);细胞周期检测结果显示FCSC在G0/G1期比例增多(P<0.05),S期比例减少(P<0.05);凋亡检测结果显示FCSC凋亡率显著增加(P<0.05)。免疫荧光染色显示TMJOA下髁突软骨FCSC数量减少,且YAP抑制组比疾病对照组减少更显著,干细胞池损耗进一步加重。结论:YAP表达抑制可导致FCSC增殖活性降低,细胞周期改变,凋亡加剧,由此加重的干细胞池损耗可能是TMJOA病变不断进展的重要原因。

Dnmt3b对髁突纤维软骨干细胞多向分化调控作用的实验研究

目的:探究DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b enzyme,Dnmt3b)对大鼠髁突纤维软骨干细胞(fibrocartilage stem cells,FCSCs)成脂、成骨、成软骨向分化能力的影响。方法:体外分离培养大鼠髁突FCSCs,构建Dnmt3b过表达慢病毒,感染FCSCs建立过表达Dnmt3b的FCSCs细胞模型,并对其进行成脂、成骨、成软骨诱导培养,检测Dnmt3b过表达对大鼠髁突FCSCs成脂、成骨、成软骨相关基因表达的影响。结果:大鼠髁突纤维软骨干细胞具有间充质干细胞特性。与对照组相比,Dnmt3b过表达组成脂相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,Ppar-γ)的表达显著降低,成骨相关基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达显著升高,成软骨相关基因SRY相关转录因子9(SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的表达显著升高。结论:Dnmt3b能促进大鼠髁突纤维软骨干细胞成软骨向分化和成骨向分化,抑制其成脂向分化。