牙髓干细胞多向分化能力的研究进展

文中从牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)多向分化潜力、研究进展及应用方面进行探讨,综合分析了DPSC多向分化能力的研究进展。DPSC可向三胚层细胞分化,例如向成牙本质细胞、软骨细胞等细胞分化,这将有助于DPSC的鉴定、牙齿再生、牙体牙髓疾病及其他疾病的治疗。

髓芯减压、髂骨髓干细胞移植+中药治疗早中期股骨头缺血坏死的研究

目的研究髓芯减压、髂骨髓干细胞移植+中药治疗早中期股骨头缺血坏死的效果。方法对2007年4月至2011年3月收治早中期ONFH 52例(64髋),患者随机分为观察组和对照组,观察组采用髓芯减压、髂骨髓干细胞(BMSCs)移植+中药配合治疗,对照组采用传统中药+皮牵引治疗。结果两组患者治疗前后髋关节功能比较有统计学意义(P<0.05)。观察组患者疼痛得到明显缓解,站立行走正常,髋关节功能得到显著改善,无感染及血管神经损伤等并发症的发生,股骨头坏死区及坏死周围硬化带明显改善,无股骨头进一步塌陷现象。结论髓芯减压、髂骨髓干细胞移植+中药治疗早中期ONFH,尤其是坏死面积较小,股骨头无塌陷,效果良好,较传统疗法具有明显的优越性。

FVFG术与髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死的临床价值比较

目的对比分析吻合血管游离腓骨移植(FVFG)术、髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死(ONFH)的临床价值。方法收集南阳文和骨科医院2021年3月至2023年5月103例ONFH患者临床资料,依照手术方案差异分为两组,对照组(51例)行髓芯干细胞植入术治疗,研究组(52例)行FVFG术治疗,比较两组围术期情况、术后并发症发生率以及术前、术后3个月Harris髋关节功能评分、血液流变学指标、骨代谢指标。结果研究组手术时间为(98.41±10.37)min,长于对照组(47.62±5.19)min(P<0.05);术后3个月,研究组血清25羟基维生素D3[25-(OH)D3]、Harris髋关节功能评分、血清骨碱性磷酸酶(BAP)分别为(24.16±2.55)ng/mL、(91.28±4.57)分、(0.75±0.12)pg/mL,均高于对照组(20.38±2.14)ng/mL、(88.51±6.02)分、(0.64±0.09)pg/mL,全血高切黏度、血清Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)、血浆黏度、全血低切黏度分别为(4.27±0.65)mPa·s、(132.71±18.69)ng/L、(1.84±0.52)mPa·s、(7.36±1.80)mPa·s,均低于对照组(4.80±0.71)mPa·s、(161.80±21.43)ng/L、(2.16±0.47)mPa·s、(8.94±1.72)mPa·s(P<0.05);研究组术后并发症发生率5.77%较对照组19.61%低(P<0.05)。结论与髓芯干细胞植入术比较,FVFG术治疗ONFH的手术时间较长,但对患者髋关节功能、血液流变学指标、骨代谢指标水平的改善效果更好。

预见性护理干预在急性髓系白血病行异基因造血干细胞移植中的应用效果分析

急性髓系白血病行异基因造血干细胞移植患者采用预见性护理干预,研究预见性护理干预的护理效果。方法 在本次研究中,我们对2022年1月至2023年12月期间我院治疗的50位急性髓系白血病患者进行了观察,这些患者均接受了异基因造血干细胞移植。通过随机抽签分组的方式,将患者平均分为两组,每组各25人。甲组接受了标准的护理措施,而乙组则采用了预防性护理措施。旨在比较和评估这两种护理方法对患者恢复的影响。结果 护理后,乙组的生活质量情况显著优于甲组;乙组各项临床指标显著优于甲组;乙组患者不良反应发生率显著低于甲组患者;乙组护理满意程度显著优于甲组(P<0.05)。结论 对于接受异基因造血干细胞移植的急性髓系白血病患者,实施预防性护理措施显示出了显著的效果,这种方法显著提升了患者的生活品质,延长了他们的生存期,并增加了对护理的满意度,同时有效减少了不良反应的出现。这表明预防性护理措施对于提高患者福祉具有重要的临床价值,因而推荐在临床实践中广泛采用。

淫羊藿苷调控髓核来源间充质干细胞凋亡修复椎间盘退变

背景:椎间盘退变是导致腰痛的最常见原因之一,内源性髓核来源间充质干细胞的数量减少及功能减退可能是导致椎间盘退变的重要原因,一定范围内的淫羊藿苷可能通过PI3K/Akt信号通路减少间充质干细胞凋亡。目的:探讨淫羊藿苷调控髓核来源间充质干细胞凋亡的可能机制。方法:获取SD大鼠退变椎间盘髓核来源间充质干细胞,以不同浓度淫羊藿苷干预第3代髓核来源间充质干细胞,CCK-8法检测细胞活力及增殖情况。将第3代髓核来源间充质干细胞分为对照组、淫羊藿苷组及LY294002组,干预1周后通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Tunel荧光检测Tunel染色阳性细胞数,RT-PCR及免疫荧光检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、p-Akt及p53的mRNA及蛋白表达水平。将16只椎间盘退变模型SD大鼠均分为淫羊藿苷组[淫羊藿苷灌胃50 mg/(kg·d)]及对照组(等量生理盐水灌胃),在治疗前、治疗后2周及4周时行大鼠尾椎X射线片、MRI检查及苏木精-伊红染色评估椎间盘退变。结果与结论:(1)一定浓度范围内的淫羊藿苷可促进髓核间充质干细胞增殖,在0.1μmol/L时细胞活力达到最佳(P<0.05);(2)与对照组比较,淫羊藿苷组的细胞凋亡率、Tunel染色阳性细胞数、Caspase-3、Bax及p53表达显著下降,p-Akt及Bcl-2表达显著增加(P<0.05);PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002干预后可以逆转淫羊藿苷的保护作用(P<0.05);(3)在动物模型水平,淫羊藿苷治疗后椎间盘退变程度得到延缓,与对照组比较,治疗4周时椎间隙高度指数及MRI评分及苏木精-伊红染色评分差异有显著性意义(P<0.05);(4)结果表明,在一定浓度范围内,淫羊藿苷以浓度依赖性方式促进退变椎间盘来源髓核间充质干细胞增殖,可通过PI3K/Akt信号通路调节髓核间充质干细胞凋亡,进而一定程度上改善椎间盘退变程度。

白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响

背景:内源性干细胞并未在椎间盘退变的进程发挥修复作用,作者推测可能与相关致病因素的异常作用有关,导致对髓核间质干细胞功能产生一定的抑制效应。目的:观察炎症因子白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响。方法:取3月龄雄性SD大鼠脊柱腰段椎间盘髓核组织,用胶原酶,胰酶序贯消化法分离并培养髓核间质干细胞。采用流式细胞术检测细胞免疫表型CD24,CD34,CD45,CD90,CD105表达;利用RT-PCR检测干细胞基因SOX2,Nanog的表达。观察髓核间质干细胞成脂、成骨、成软骨分化能力。利用流式细胞术检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后的凋亡率,荧光定量PCR检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原酶,caspase-3基因的表达变化。结果与结论:体外分离培养出的细胞表现为纺锤样长梭形;CD90、CD105表达阳性,CD45、CD34、CD24表达阴性,表达干细胞基因SOX2,Nanog,具有成骨和成软骨分化能力,无成脂分化能力。CCK-8检测白细胞介素1β可以抑制髓核间质干细胞的增殖活性,与作用时间、作用浓度存在一定的依赖关系,最佳作用时间为48 h,最佳作用浓度为50μg/L。流式细胞仪检测白细胞介素1β可以使髓核间质干细胞轻度凋亡;荧光定量PCR结果显示:SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原的mRNA表达下调,caspase-3表达上调。结果可见白细胞介素1β具有抑制髓核间质干细胞增殖活性并诱导其凋亡的作用,是导致椎间盘自身干细胞无法发挥修复作用的原因之一。

非清髓异基因外周血造血干细胞移植后嵌合体分析

本研究旨在探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植(NAPBSCT)后造血嵌合体的临床意义。采用FBC(氟达拉宾+白消安+环磷酰胺)±阿糖胞苷(Ara-C)预处理方案,对28例血液病患者进行NAPBSCT,采集供者和受者术前外周血及术后不同时间段的序列血样,用STR-PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色和凝胶成像分析技术半定量方法计算供体细胞嵌合率。结果显示:移植后1月,28例患者中1例移植失败,22例形成完全供者造血嵌合体(CC),5例形成混合造血嵌合体(MC);移植后7天时供者细胞即占优势(74.71%),较中性粒细胞(ANC)和血小板(Plt)的平均恢复时间均明显提前;CC组的aGVHD发生率高于MC组(P<0.05),两组cGVHD发生率无显著差异(P>0.05);1例MC患者发生早期移植排斥;CC组和MC组复发率无显著差异(P>0.05),1例在CC状态下复发。3例MC患者经早期临床干预治疗获得CC和完全缓解。结论:造血嵌合体的动态定量检测对判断早期植入,预测移植物排斥、复发和GVHD,以及指导临床干预治疗具有重要意义。

DC-CIK对急性髓细胞白血病干细胞的杀伤作用

目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对急性髓细胞白血病细胞株KG-1a中白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用。方法:分离健康人外周血单个核细胞,贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL-2、IL-1、IFN-γ和CD3 mAb诱导培养CIK。将KG-1a细胞冻融物作为抗原负载DC(即Ag-DC),与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK),无抗原负载的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK),单独CIK作为空白对照组,与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+CD38-CD123+白血病干细胞的比例。DC-CIK与KG-1a细胞共培养,流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+CD38-CD123+细胞的凋亡率。结果:外周血单个核细胞成功诱导DC。CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK组中CD3+CD56+细胞比例为(17.36±4.44)%、(28.22±3.66)%和(36.16±5.88)%,依次升高(P<0.05)。与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+CD38-CD123+细胞比例显著降低[(8.78±0.62)%vs(3.95±0.53)%、(3.03±0.62)%,P<0.01〗。DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡,凋亡率由(2.34±0.74)%上升至(12.27±1.01)%,但对其中CD34+CD38-CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用。结论:DC联合CIK能杀伤急性髓细胞白血病干细胞,但无明显的诱导凋亡作用。

大鼠骨髓间充质干细胞对细菌性前列腺炎抑制作用的研究

目的：研究外源性骨髓间充质干细胞（BMSCs）对大肠埃希菌致大鼠前列腺炎的抑制作用。方法：贴壁选择法分离、培养、扩增BMSCs。将sD大鼠50只随机分为急性细菌性前列腺炎（ABP）组、ABP＋BMSCs组、慢性细菌性前列腺炎（CBP）组、CBP＋BMSCs组和正常对照组，每组10只。在小动物超声引导下向大鼠前列腺两侧叶内注射大肠埃希菌建立前列腺炎症模型，注入细菌1～14d为急性炎症期，4—12周为慢性炎症期，对照组注入等量PBS。然后将BMSCs注入ABP＋BMSCs组和CBP＋BMSCs组大鼠前列腺内，观察移植BMSCs2周后大鼠前列腺病理学变化并做炎症评分，RT—PCR扩增前列腺组织中炎症因子IL—β、TNF—αmRNA，ELISA检测IL-1β、TNF-α蛋白含量，统计分析各组表达差异。结果：前列腺组织病理学提示炎症组前列腺组织呈典型炎症病理变化，腺管结构改变，间质水肿，炎细胞浸润，纤维组织增生，而BMSCs治疗组大鼠前列腺炎症明显减轻。PCR和ELISA分析显示ABP组IL-1βmRNA（0．829±0．121）、蛋白（271．75±90．59）pg／ml和TNF—αmRNA（0．913±0．094）、蛋白（105．78±19．05）pg／ml含量均显著高于对照组[（0．3424±0．087）、（45．76±17．99）pg／m1]、[（0．247±0．054）、（19．42±7．75）pg,／ml]（P均〈0．01）及BMSCs治疗组[（0．433±0．072）、（51．34±22．13）pg／m1]、[（0．313±0．076）、（28．38±8．78）pg／m1]（P〈0．01）；CBP组IL-1βmRNA（0．975±0．114）、蛋白（265．31±71．34）pg／ml和TNF-理mRNA（0．886±0．084）、蛋白（107．45±26．11）pg／ml含量也均显著高于对照组及BMSCs治疗组[（0．396±0．064）、（56．37±21．22）pg／m1]、[（0．417±0．068）、（29．21±10．22）pg／m1]（P均〈0．01）。结论：注入BMSCs能够减轻大肠埃希菌引起的前列腺炎症反应，其作用可能与减少炎细胞浸润，降低IL-1β、TNF-α水平有关。

小鼠非清髓外周造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注的实验研究

目的:探讨受者皮肤致敏后的供者淋巴细胞输注对受者嵌合状态的影响及供者嵌合比率与混合淋巴细胞反应(MLR)和受者重建的T细胞亚群间的关系。方法:受鼠C57BL/6小(H-2b)第0天接受X射线全身照射,4小时内移植经rhG-CSF动员后的BALB/c小鼠(H-2d)外周血干细胞2×107个,第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106个。结果:移植后第21天模型组小鼠PCR检测结果均呈混合嵌合(MC)状态;致敏后DLI的受鼠60天时转变为完全供者嵌合(CC),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值早期下降,60天时有所升高,仍略低于正常水平,MLR呈现供者特异性低反应性;未致敏的DLI受鼠嵌合率虽稍有上升,仍为MC,CD4+/CD8+比值早期升高,后期降至正常水平,MLR供者反应性亦有所下降。结论:经rhG-CSF动员后可以成功建立非清髓性allo-PBSCT小鼠MC模型;经受者皮肤致敏后的DLI能够诱导稳定的CC,高比率嵌合与供者CD4+/CD8+比值下降及MLR的特异性免疫低反应性间具有良好相关性。

低浓度雷公藤甲素增强去甲氧柔红霉素杀伤急性髓细胞白血病干细胞的能力

目的探讨低浓度雷公藤甲素(triptolide,TPL)能否增强去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)杀伤急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)干细胞的能力及与Nrf2通路的关系。方法流式细胞仪从KG1a细胞株中分选CD34+CD38-亚群,将其作为AML干细胞模型;MTT检测TPL单药组、IDA单药组、TPL+IDA组处理AML干细胞72 h后细胞抑制率和CI指数;Western blot检测IC20浓度的TPL(5 nmol/L)、IC50浓度的IDA(27 nmol/L)单药及上述浓度的TPL联合IDA作用AML干细胞后Nrf2蛋白表达水平的变化;实时荧光定量PCR检测各组处理后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR、HO-1的mRNA表达水平的变化。结果 MTT结果显示TPL和IDA单药对AML干细胞具有一定的增殖抑制作用,72 h的IC50值分别为(20.48±1.60)nmol/L和(285.20±13.74)nmol/L;而小剂量TPL(IC20值,5 nmol/L)与不同浓度IDA联合作用于AML干细胞后的增殖抑制作用显著高于IDA单药,IC50值也从IDA单药的(285.20±13.74)nmol/L下降到双药联合(27.01±0.73)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。联合作用指数CI值提示两药合用具有强协同作用。Western blot检测结果显示TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrf2蛋白表达水平降低。定量PCR检测结果显示,TPL联合IDA处理AML干细胞后Nrf2及其下游基因NQO1、GSR及HO-1的mRNA表达水平均显著下降(P<0.01)。结论低浓度TPL能显著增强IDA对AML干细胞的杀伤作用,其机制可能与下调Nrf2通路相关。

人髓核间充质干细胞的分离提纯方式及生物学活性鉴定

目的 ：探索人髓核间充质干细胞（nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs）的提纯方法并鉴定其生物学活性。方法：收集3例腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织（Pfirrmann分级均为Ⅳ级）,利用酶消化法分离细胞。采用两种方法分离提纯NPMSCs,一组细胞采用贴壁法培养（贴壁组）,另一组通过流式细胞分选技术利用NPMSCs表面阳性标志物CD73、CD90、CD105获得NPMSCs（流式组）。将两种方法获得的NPMSCs进行体外培养扩增,分别进行形态学观察,细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit,CCK-8）检测增殖能力。贴壁组NPMSCs采用流式细胞分选仪在进行分选之前检测免疫表型,流式组NPMSCs在生长达80%~90%融合时进行免疫表型的检测。向成骨、成脂、成软骨诱导分化,诱导28d后分别进行茜素红染色观察其成骨能力、油红O染色观察其成脂能力、甲苯胺蓝染色观察其成软骨能力,利用Imag J软件计算染色区域所占的面积百分比。比较两组NPMSCs在形态学、免疫表型及增殖和分化能力的差异。结果：形态学观察发现,两组NPMSCs均呈漩涡状生长,贴壁组NPMSCs可见散在的单个细胞生长;流式组NPMSCs长梭形形态更长,排列更加紧密,少见散在的单个贴壁生长细胞。流式细胞分选后所得的NPMSCs占细胞总数的（89.67±2.52）%,可以进行体外培养扩增,细胞为典型的长梭形特征,漩涡状生长,在接种后12~15d达80%~90%融合,增殖能力在接种后5~13d明显高于贴壁组NPMSCs（P〈0.05）。流式组NPMSCs的CD73、CD90、CD105的表达率明显高于贴壁组NPMSCs（P〈0.05）,并且低表达CD34、CD45及HLA-DR。两种方法获得的NPMSCs均能完成三系诱导分化,流式组成骨、成脂、成软骨染色区域百分比均明显高于贴壁组（P〈0.05）。结论：利用流式细胞分选技术从人退变髓核组织中可获得较高纯度的NPMSCs,并能进行后续培养扩增。与贴壁法获得的NPMSCs相比,流式细胞分选的NPMSCs具有更强的增殖与分化能力。

STR-PCR定量分析非清髓性干细胞移植后造血嵌合体

目的 建立对非清髓性造血干细胞移植术后造血嵌合体的 STR- PCR定量检测技术 ,初步探讨该技术在监测非清髓性造血干细胞移植术后植入状态中的应用。方法 对 3例非清髓性异基因造血干细胞移植术后的患者序列血样 ,在可区分供受者基因的 STR位点上 ,应用凝胶图像分析技术进行供受者特异性等位基因的定量分析。结果 定量分析结果与 DNA电泳条带法的定性分析结果 ,以及临床移植效果一致。在电泳条带已表现为供者源造血时 ,通过定量分析仍可检测出受者特异性等位基因。结论 STR- PCR定量分析技术较单纯电泳鉴定植入可观察到更为细微的变化 。

视网膜色素上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞(英文)

目的:检测视网膜色素上皮细胞对骨髓间充质干细胞分化的调节作用。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞(BMSC)和视网膜色素上皮(RPE)细胞。RPE细胞采用紫外线照射处理,而后与CFSE标记的BMSC共培养14d。并在共培养体系中加入牛眼视网膜提取物(BRE)以研究视网膜成分对此分化过程的影响。采用NSE,Nestin和GFAP抗体标记检测BMSC分化前后的表达特征。结果:BMSC在与RPE细胞共培养后,能够分化成为神经样细胞,并表达神经性细胞的特异性标记NSE,Nestin和GFAP。BRE能够显著促进共培养体系中BMSC向神经样细胞的分化。结论:RPE和BRE能够诱导BMSC分化为神经样细胞。

清髓性和非清髓性干细胞移植后树突状细胞亚群的动态观察

探讨不同预处理方法移植后树突状细胞亚群早期重建情况。采用三色流式细胞仪动态检测不同移植方法后早期患者外周血树突状细胞亚群DC1(Lin-HLA-DR+CD11c+)、DC2(Lin-HLA-DR+CD123+)水平。结果:清髓性干细胞移植组包括同胞全相合干细胞移植和HLA半相合移植,移植后14dDC1分别为0.093%±0.091%,0.090%±0.064%,DC2为0.056%±0.026%,0.130%±0.036%,二者差别无统计意义。非清髓性干细胞移植组移植后14dDC1为0.223%±0.084%,DC2为0.360%±0.023%,非清髓性干细胞组DC1、DC2略低于正常对照组,和清髓性移植组相比,非清髓性干细胞组明显增高,P<0.05,二者差别有统计学意义。移植前的预处理方案强度影响树突状细胞亚群重建。

辛伐他汀对大鼠髓核间充质干细胞增殖及分泌功能的影响

目的:观察大鼠髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cell,NPMSC)的生物学特性和辛伐他汀对髓核间充质干细胞增殖及分泌功能的影响。方法:取8周龄SD大鼠尾椎髓核组织,采用胶原酶及胰酶序贯消化法分离NPMSC并进行体外扩增培养,观察细胞形态并通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。通过流式细胞仪检测细胞免疫表型及逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测干细胞基因表达进行NPMCS的鉴定。取第3代NPMSC施加不同浓度辛伐他汀干预(0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L),在干预1d、3d、7d、14d、21d后通过CCK-8法检测细胞活力,RT-PCR检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA表达。结果:原代细胞早期可形成葵花样细胞集落,克隆样生长,传代后细胞生长较原代细胞明显加快,细胞形态以纺锤形为主。第3代细胞高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD73、CD90及CD105,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子CD45及CD11b,与骨髓间充质干细胞具有相似的干细胞转录因子Sox2、Oct-4及Nanog表达水平。适当浓度的辛伐他汀(0.01μmol/L^0.1μmol/L)可促进NPMSC增殖及HIF-1α、GLUT-1、VEGF的mRNA表达,且浓度为0.1μmol/L时达到最强,而高浓度辛伐他汀(1μmol/L)对细胞增殖能力及HIF-1α、GLUT-1、VEGF的mRNA表达有明显抑制作用。辛伐他汀可使NPMSC中出现并促进Ⅱ型胶原及蛋白多糖m RNA的表达,0.1μmol/L浓度达到最强。结论:大鼠的髓核组织培养出的NPMSC能够表达骨髓间充质干细胞特异性的干性基因,适当浓度(0.01μmol/L^0.1μmol/L)的辛伐他汀可促进NPMSC增殖和细胞外基质的分泌。

非清髓性异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病

为了研究非清髓性异基因造血干细胞移植 (non myeloablativeallogeneicstemcelltransplantation ,allo NST)治疗恶性血液病的疗效及相关技术 ,对 2 6例恶性血液病患者 (急性白血病 10例 ,慢性髓性白血病 14例 ,多发性骨髓瘤 2例 )中 14例采用FAC预处理 (Fludara +ATG +CY) ,12例采用MAC预处理 (马法兰 /马利兰 +ATG +CY) ,用G CSF 6 0 0 μg/d或G CSF 30 0 μg/d +GM CSF 30 0 μg/d进行外周血干细胞动员 ,第 5天开始采用CobeSpectra血细胞分离机连续采集 2 - 3次 ;环孢菌素A联合短程甲氨蝶呤预防GVHD ;移植后第 4周开始供体淋巴细胞输注 ,首剂 1×10 7/kg ,之后依据临床反应及嵌合体形成情况 ,每 4周 1次 ,剂量逐级递增 ;以微卫星短串联重复序列 (STR)分析、Bcr/Abl融合基因、Ph染色体、HLA位点分析、性染色体及ABO血型等为植活检测指标。结果表明 ,植入率 84 .6 2 % ,其中 18例已转为完全供体型 ;aGVHD发生率 11.5 4 % ,cGVHD发生率 2 3 0 7% ;感染、出血等毒副反应发生率低、反应轻。结论 :非清髓性异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病疗效确切 ,毒副作用小 ,但相关技术 ,如适应证的选择、预处理方案、移植过程中的免疫治疗等需要进一步深入研究。

低氧培养促进大鼠髓核间质干细胞增殖

目的研究低氧培养对大鼠髓核间质干细胞(NPMSCs)增殖的影响。方法分离大鼠尾椎髓核获得NPMSCs并进行体外扩增培养,观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞免疫表型。取第3代NPMSCs分为常氧组和2%低氧组,分别培养7 d及14 d,观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞活力和RT-q PCR检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、沉默信息调节蛋白1(SIRT1)及SIRT6的mRNA表达情况。结果原代NPMSCs细胞早期可形成葵花样细胞集落,传代后细胞增殖明显加快,细胞形态以纺锤形为主。第3代细胞高表达干细胞相关阳性表面抗原分子,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子。低氧组细胞形态以多角形为主,细胞更容易聚集成团块,且细胞增殖速度明显加快(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。低氧组HIF-1α、VEGF、GLUT-1、SIRT1及SIRT6表达量明显高于常氧组(P<0.05)。结论 2%O2的低氧环境促进髓核间质干细胞增殖,其机制可能与SIRT1及SIRT6介导的HIF-1α信号通路有关。

小儿骨髓间充质干细胞的培养及多向分化潜能的研究

目的研究小儿骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学特性及多向分化能力,为小儿MSCs的临床应用提供实验依据。方法经Percoll梯度分离接种获得小儿MSCs,观察其形态、排列分布情况,用MTT法检测细胞增殖情况,并绘制生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期,诱导剂干预细胞,观察细胞的成骨、成脂肪、成神经等多向分化能力。结果小儿MSCs贴壁容易,呈细长梭形,增殖能力强,融合后旋涡状分布。MSCs分别经各诱导剂诱导后,细胞形态均发生相应的变化,用化学染色、PCR、免疫细胞染色等方法检测成骨标志物(碱性磷酸酶、骨钙素mRNA、钙结节)、脂肪标志物(脂滴、PPARγ-2mRNA)、以及类神经标志物(尼克氏体、NSE、NF-200)有明显的阳性。结论小儿MSCs能稳定增殖、传代,具有成骨、成脂肪、成神经等多方向的定向分化潜能,可以作为多方面组织工程的种子细胞。