基于Toll-MyD88信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中Toll-髓性分化因子88(My D88)信号通路炎性信号表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组织化学技术(IHC)实验、酶联免疫吸附测定(ELISA)实验、蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GD高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg^(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10^(-4)g·kg^(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,IHC检测受体Toll样受体-2(Toll-like receptor 2,TLR-2),TLR-4的表达,Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测定平均积分吸光度IA,ELISA测定环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)表达,Western blot检测My D88,核因子κB酶抑制剂-β(inhibitorκB kinaseβ,IκK-β),核因子κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitorα,IκB-α),过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,GA模型大鼠关节滑膜组织中TLR-2,TLR-4平均IA,My D88,IκK-β蛋白及COX-2表达水平明显增高(P<0.05);与模型组比较,GD中、高剂量组TLR-2,TLR-4平均IA,My D88,IκK-β蛋白及COX-2含量表达均明显低于模型组(P<0.05);而TGF-β_1含量及IκB-α,PPAR-γ蛋白表达水平明显增高(P<0.05);GD各剂量组IκK-β蛋白无明显变化。结论:GD治疗GA的作用机制可能与降低TLR-2,TLR-4受体及My D88蛋白表达,增加PPAR-γ,IκB-α表达,抑制NF-κB活化,降低Toll-My D88信号通路炎性因子表达有关。

桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响

目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P<0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P<0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P<0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P<0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P<0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。

MyD88在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨髓性分化因子88（MyD88）在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2000年8月至2010年2月在本院接受首次手术治疗的115例卵巢癌患者的肿瘤标本及癌旁正常卵巢组织标本，所有患者的诊断均经术后病理学检测结果证实，采用免疫组织化学方法检测MyD88蛋白在卵巢癌及癌旁正常组织中的表达，并探讨MyD88的表达量与卵巢癌患者临床病理特征和预后的相关性。结果卵巢癌肿瘤组织标本中MyD88的阳性表达率为70．4％，卵巢癌旁正常组织中的阳性表达率为23．5％，两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）；此外，MyD88的阳性表达量与卵巢癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、有无腹水和病理学分级无关（P〉0．05），而与患者的有无淋巴结转移及临床分期相关（P〈0．05）；MyD88阳性表达的卵巢癌患者五年生存率显著低于阴性表达的卵巢癌患者（P〈0．001）。结论MyD88在卵巢癌组织中的表达显著升高，其可能在卵巢癌的发生、发展和侵袭中发挥重要作用。

TLR9的特性及其介导的TLR9/CpG-DNA免疫信号通路

TLRs在天然免疫应答中发挥着重要作用,构成了机体抗感染的第一道防线,是沟通天然免疫和获得性免疫的桥梁。其中TLR9已经被证实能够识别细菌DNA中免疫刺激序列CpG,从而激活哺乳动物细胞的天然免疫机制,这一发现具有重要的生物学意义与应用价值。它不仅进一步推进了外源DNA激活哺乳动物抗感染天然免疫的进一步研究,更为CpG-DNA应用于抗感染、肿瘤和免疫缺陷疾病等的治疗提供新的思路,为改进DNA疫苗效果提供非常有益的帮助。

黄芩苷对缺氧/复氧小胶质细胞TLR4通路的影响

目的:模拟脑梗塞时脑组织内的缺氧/再灌注病理过程,探索缺氧/复氧对原代培养的小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)通路的影响和黄芩苷的干预作用;方法:原代培养小胶质细胞,采用缺氧/复氧的方式制备模型,用黄芩苷25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L3个浓度梯度进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测小胶质细胞TLR4 mRNA的表达,Western Blot检测TLR4、抑制因子(I-кB)、p38、ERK蛋白,免疫荧光双染观察髓性分化因子88(MyD88)和核因子кB(NF-кB)。结果:缺氧/复氧激活了TLR4通路,并通过MyD88依赖途径激活了TLR4和下游蛋白MyD88、NF-кB、ERK、I-кB和p38;黄芩苷高剂量组明显抑制了通路中TLR4、MyD88、NF-кB、ERK与p38蛋白的活性和I-кB蛋白的降解。结论:缺氧/复氧激活了小胶质细胞的TLR4通路,黄芩苷通过对TLR4通路蛋白的抑制降低了小胶质细胞的活性,发挥抗炎效应,促进脑缺血的恢复。