丹参总酚酸联合anti-PD-L1调控髓源性巨噬细胞浸润抑制乳腺癌发生发展

目的探究丹参总酚酸(total salvianolic acid,TSA)联合anti-PD-L1通过调控髓源性巨噬细胞瘤内浸润抑制乳腺癌的发生发展。方法构建E0771乳腺癌皮下肿瘤模型。25只小鼠随机分为空白组、模型组、TSA组(TSA 10 g·kg^(-1)),anti-PD-L1组(anti-PD-L110 mg·kg^(-1)),TSA联合anti-PD-L1组(TSA 10 g·kg^(-1)+anti-PD-L110 mg·kg^(-1))。TSA组每日灌胃给药,anti-PD-L1每3天1次腹腔注射,连续给药14 d。记录小鼠肿瘤体积变化及肿瘤、肝脏及脾脏重量。ELISA检测小鼠血浆中IL-6,MCP-1的含量,qPCR检测cxcl1,cxcl2,cxcl3,ccl2,gm-csf mRNA的表达,流式、免疫组化检测小鼠肿瘤、淋巴中髓源性巨噬细胞浸润情况,流式检测淋巴、脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞数量变化。结果与模型组相比,TSA,anti-PD-L1,TSA联合anti-PD-L1均可抑制E0771乳腺癌生长,减少IL-6、MCP-1分泌,降低cxcl1,cxcl2,cxcl3,ccl2,gm-csf mRNA表达,抑制髓源性巨噬细胞向肿瘤的募集,增加淋巴及脾脏内CD4+T细胞、CD8+T细胞数量,TSA联合anti-PD-L1治疗效果更佳显著。结论TSA联合anti-PD-L1显著抑制E0771乳腺癌皮下瘤发生发展进程,可能通过抑制髓源性巨噬细胞向肿瘤浸润,增强机体免疫效应发挥作用。

骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed基因的新方案

探索了在骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中有效地敲除floxed基因,更好地研究基因敲除引起的表型的新方案。由于传统方法往往导致floxed基因不能被Lys M-cre酶高效地敲除,阻碍了BMDMs在一些遗传学方面的应用。通过调整培养基的更换时间,及时补充新鲜的M-CSF,使用胰酶消化分盘,有效地提高了细胞得率,并增强了基因在BMDM中的敲除效率。与传统方法相比,新方案将BMDMs得率增加了1倍,每只小鼠能获得接近5×107个BMDMs。新方案也显著性地提高了巨噬细胞中m TOR基因的敲除效率,从36.77%±5.07%提高到了76.9%±7.83%。新方案获得的Lys M-cre/m TORfl/fl BMDMs与m TORfl/fl BMDMs相比,在应答LPS刺激方面出现了显著的表型差异,表达了更多的细胞因子IL-6和IL-12。在小鼠来源受限和需要提升巨噬细胞中特定基因敲除效率的情况下,本方案具有极为突出的优势,用少量的小鼠获得可靠的实验数据,也符合动物实验的"3R"原则。

表没食子儿茶素没食子酸酯对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞极化的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠骨髓细胞,经100 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导分化为骨髓巨噬细胞(BMDM),加入50 ng/ml干扰素γ(IFN-γ)和1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激,并同时暴露于12.5~50μmol/L EGCG处理48 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巨噬细胞促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和i NOS的mRNA表达水平和蛋白含量。结果:IFN-γ和LPS处理可刺激巨噬细胞IL-1β、TNF-α和i NOS表达显著上调,而EGCG则能抑制IFN-γ和LPS刺激的IL-1β、TNF-α和i NOS表达,且存在剂量依赖性。结论:EGCG能够减弱IFN-γ和LPS刺激的髓源性巨噬细胞的促炎作用。