补髓生血丸对再生障碍性贫血小鼠造血功能及骨髓VEGF、TPO、VCAM-1水平的影响

目的 观察补髓生血丸(熟地黄、鹿角胶、黄芪、当归等)对再生障碍性贫血(AA)小鼠的防治作用,并从改善骨髓造血微环境角度分析相关作用机制。方法 将昆明种雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(再造生血片,2.70 g·kg^(-1))及补髓生血丸低、中、高剂量组(2.25,4.50,9.00 g·kg^(-1)),每组15只。采用白消安(10 mg·kg^(-1))及环磷酰胺(20 mg·kg^(-1))交替腹腔注射给药12 d,制备AA小鼠模型。造模同时灌胃给药,每日1次,连续30 d。检测小鼠外周血象;采用瑞士-姬姆萨染色法观察小鼠骨髓涂片;进行骨髓有核细胞计数;HE染色法观察骨髓病理变化;ELISA法检测小鼠血清及骨髓中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素(TPO)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)的水平。结果 各组间的血清及骨髓TPO水平无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)水平均明显下降(P<0.05);血清及骨髓中VCAM-1含量明显下降(P<0.05),血清中VEGF含量明显下降(P<0.05);小鼠的骨髓有核细胞数量显著减少(P<0.01),骨髓脂肪化明显,出现较大和特大的脂滴空泡,骨髓象损伤评分显著升高(P<0.01);小鼠骨髓腔明显空虚,造血细胞被大量的脂肪细胞代替,造血细胞数量明显减少,淤血、出血和间质水肿等现象显著,巨核细胞未见,骨髓病理损伤评分显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠的RBC、HGB水平均明显升高(P<0.05),补髓生血丸高剂量组小鼠的WBC、PLT水平明显升高(P<0.05);各给药组小鼠的血清及骨髓中VCAM-1含量均明显上升(P<0.05,P<0.01),补髓生血丸高剂量组小鼠血清VEGF含量明显上升(P<0.05);各给药组小鼠的骨髓有核细胞数量显著上升(P<0.01),骨髓增生活跃,有核细胞密布,脂滴明显减少、变小,补髓生血丸中、高剂量组小鼠的骨髓象损伤评分明显降低(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠骨髓可见有核细胞、巨核细胞逐渐增多,淤血、出血减轻,脂肪细胞减少,补髓生血丸中、高剂量组小鼠骨髓病理损伤评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 补髓生血丸能够改善AA小鼠的造血功能,可能与提高VCAM-1、VEGF水平,改善骨髓造血微环境有关。

基于“肾生髓、髓生血”理论治疗地中海贫血

地中海贫血是因先天性基因缺陷致使珠蛋白合成障碍引起的一种遗传性血液病,也叫珠蛋白合成障碍性贫血。它是世界上发病率高、危害最大的单基因遗传病,至今尚无有效的治疗方法。中国中医科学院广安门医院根据肾藏精生髓、髓生血理论,在广西高发区,用补肾益髓法治疗地中海贫血600余例,取得了肯定疗效。论文探讨了中药治疗地中海贫血的证治规律,总结了近30年的临床实践,提出了中医治疗地中海贫血的理论基础和中医核心病机假说,形成了系统的理论与有效治法。依托多项国家基金,从整体效应、基因突变与疗效关系、骨髓有效造血、红细胞结构与功能、调控珠蛋白mRNA表达等不同层面,探讨了中药治疗地中海贫血疗效特点和作用靶点的分子机制,使中药治疗地中海贫血整体水平达到新的高度。研究结果将从一个侧面揭示"肾藏精"及"与肾相关"疾病的内在关系。从"肾"论治地中海贫血的临床与基础研究成果,为阐释"肾藏精"脏象理论的科学内涵提供了有说服力的证据。

益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血156例临床观察

目的研究益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血临床效果及安全性。方法在广西高发区用益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血,疗程3个月,观察治疗前后临床症状、Hb、RBC、网织红细胞(Ret)、抗碱血红蛋白(HbF)水平变化并进行停药后3～6个月随访及不良反应的观察。结果治疗组患者自疗程第1个月起至3个月结束,Hb、RBC、Ret、HbF等各项血液学参数均有提高,与治疗前比较差异有显著性(P<0.01);中医临床症状改善及动态观察与血液参数提高相一致,与治疗前比较差异有显著性(P<0.01);156例中有效145例,无效11例,总有效率达92.9%。未见明显的不良反应。停药后随访结果显示,疗效维持时间3～4个月。结论益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血疗效显著,未见明显的不良反应。为中医药辨证治疗β-地中海贫血提供了一定的依据。

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞黏附作用影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(chronicaplasticanemia,CAA) 患者骨髓造血细胞相关黏附分子表达水平的影响。方法:采用免疫荧光法及流式细胞技术分 别对使用该颗粒治疗前后的CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c kit、CXCR4、骨髓基质 细胞的淋巴细胞归巢受体(HCAM/CD44)、细胞间黏附分子(ICAM 1/CD54)表达进行检 测,并与再障生血片对照组(简称对照组)及正常组做比较研究。结果:两组患者治疗前 c kit/CD117表达明显高于正常组,而CXCR4、HCAM/CD44、ICAM 1/CD54水平明显低于正常 组,治疗后两组患者CXCR4、HCAM/CD44、ICAM 1/CD54表达均有所升高,并且补髓生血颗 粒实验组(简称实验组)CXCR4水平优于对照组,治疗后c kit/CD117与正常组比较无显著 差异,亦优于对照组。结论:CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c kit、CXCR4、骨髓基 质细胞HCAM/CD44、ICAM 1/CD54表达异常,补髓生血颗粒可能是通过提高CXCR4、 HCAM/CD44、ICAM 1/CD54的表达以及降低c kit/CD117的表达而促进骨髓造血的。

益髓生血颗粒对不同发育阶段小鼠α-血红蛋白稳定蛋白表达的影响

目的:探讨益髓生血颗粒对不同发育阶段小鼠α-血红蛋白稳定蛋白(alpha-hemoglob in stabilizing pro-te in,AHSP)表达的影响。方法:分别提取正常成年小鼠骨髓、孕鼠(孕21 d)和胎鼠(孕14 d)胎肝胎脾有核细胞总RNA,采用real-time RT-PCR方法检测中药益髓生血颗粒干预后对不同发育阶段小鼠的α-珠蛋白稳定蛋白基因表达的影响。结果:中药干预后,胎鼠(孕14 d)、孕鼠(孕21 d)的AHSP基因表达无明显改变,而成年鼠骨髓AHSP基因表达明显上调。结论:益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的可能分子机制之一,是通过促进AHSP基因的表达,减少游离α-珠蛋白的沉积,遏止其对红细胞的毒害作用,减少溶血发生而达到治疗效果。

益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血患者自身对照比较研究

目的观察补肾益髓法的代表方益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血临床效果。方法以高发区患者为观察对象,采用自身对照方法,30例重型、中间型β-地中海贫血患者先口服安慰剂再口服益髓生血颗粒,疗程均为3个月。观察服药前后患者临床症状、中医证候变化,并做血液指标血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、胎儿血红蛋白(Ret)、网织红细胞(HbF)动态检测;中医临床证候表现按评分量表观察,记录不良反应。结果患者自服安慰剂1个月至疗程结束,主要疗效性指标Hb、RBC均无升高,Hb在口服安慰剂第1个月有明显降低(P<0.05),而改服益髓生血颗粒自第1个月起至疗程结束患者Hb、RBC与服安慰剂第3个月比均有非常明显提高(P<0.001);中医临床证候量表统计分析显示:口服安慰剂3个月后,患者临床中医证状无任何改善;经益髓生血颗粒治疗3个月后,患者除“面色萎黄”一项无明显改善外,“头晕目眩”、“心悸”、“气短”、“食少纳呆”、“倦怠乏力”等症状均有明显改善(P<0.05);无任何不良反应。结论患者服安慰剂后改服益髓生血颗粒3个月后,血液指标Hb、RBC、Ret、HbF与服安慰剂第3个月比均有非常明显提高。两个阶段β-地中海贫血患者疗效比较有非常显著性差异。

补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血患者血清可溶性Fas、肿瘤坏死因子、白细胞介素2表达作用的影响

为探讨补肾中药补髓生血冲剂抑制慢性再生障碍性贫血(CAA)细胞凋亡的疗效机理,分析了30例CAA患者血清可溶性Fas(sEas)、肿瘤坏死因子(TNF—α)、白细胞介素2(IL—2)水平在用药前后的变化规律,并用再障生血片进行对照研究。结果,患者疗前血清sEas、TNF—α、IL—2表达均明显高于正常组(P<0.05或P<0.01),疗后sEas、TNF—α水平接近正常组(P>0.05),而IL—2水平仍高于正常组(P<0.05)。表明:(1)CAA患者血清存在着细胞凋亡相关因子的表达异常;(2)补髓生血冲剂是通过调节TNF—α水平来调控CAA患者细胞表面Fas分子的表达,并影响血清sEas的表达,而并非通过调节IL—2表达水平来影响CAA细胞凋亡。

益髓生血灵治疗β—地中海贫血症29例临床观察

根据中医肾生髓的理论,用中药益髓生血灵在广西高发区治疗β—地中海贫血41例,其中益髓生血灵胶囊治疗29例,28例有效,用益髓生血灵新剂型(冲剂)治疗12例,全部有效。并与西药马利兰治疗β—地中海贫血作了比较分析,表明中药治疗的显著疗效和优势。并对治疗的患者进行了系统的基因分析,从基因突变与疗效关系,基因表达与调控等方面研究了疗效的分子机理,提出了中药治疗β—地中海贫血的可能机制,提出了中医肾生髓的理论是中医药治疗β—地中海贫血的理论核心的假说,并验证了它的客观性,为传统中医药治疗β—地中海贫血理论和实践提供了科学依据。

中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者骨髓α血红蛋白稳定蛋白及红系转录因子GATA-1基因表达的影响

目的：研究中药益髓生血颗粒对β地中海贫血患者α血红蛋白稳定蛋白（alpha-hemoglobin stabilizing protein,AHSP）及红系转录因子GATA-1表达的影响,探讨中药治疗β地中海贫血的临床疗效及分子机制.方法：2004年9月～2005年2月收治中间型β地中海贫血患者12例,采用益髓生血颗粒治疗3个月.比较治疗前后患者血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞、网织红细胞等血液学参数的变化;提取其中8例患者用药前后骨髓有核细胞总RNA,采用实时PCR技术检测AHSP mRNA和转录因子GATA-1 mRNA的表达.结果：治疗后患者临床症状明显改善,其血红蛋白、胎儿血红蛋白、红细胞和网织红细胞等血液学参数较治疗前明显升高,差异有统计学意义.其中8例患者骨髓有核细胞AHSP和GATA-1 mRNA的表达量与治疗前比较有明显升高,差异有统计学意义.结论：中药益髓生血颗粒治疗β地中海贫血的可能机制之一为通过调节β地中海贫血患者体内骨髓有核细胞转录因子GATA-1 mRNA的表达,使GATA-1与其他转录因子协同作用,上调AHSP mRNA的表达,使AHSP合成增加以结合地中海贫血患者体内游离的相对过剩的α珠蛋白,阻止其在活性细胞中的沉积,遏制其对红细胞的毒害作用,从而减少溶血的发生.

中药益髓生血颗粒治疗地中海贫血的临床研究

目的观察中药益髓生血颗粒治疗地中海贫血的临床疗效。方法以益髓生血颗粒治疗血红蛋白H病(HbH病)25例,β地贫156例(重型β地贫45例,重型β地贫复合血红蛋白E18例,中间型β地贫58例,中间型β地贫复合血红蛋白E35例),用药方法为每次1包,每包10g,6岁以下儿童2/d,6岁以上3/d,3个月为1个疗程。结果25例HbH病中21例有效,治疗后有效病例Hb增加5～31g/L,增加>10g/L者16例(其中增加21～31g/L者6例)。156例β地贫中145有效,治疗后有效病例Hb增加5～32g/L,增加>10g/L者97例(其中增加21～32g/L者29例),总有效率91.71%,中药为颗粒冲剂,服用方便,无毒副作用。结论益髓生血颗粒对α地贫和β地贫均有较好的疗效,可以提高患者的Hb水平,使贫血症状得到缓解。

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓VLA-4和VLA-5 mRNA表达的影响

【目的】观察补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的骨髓极迟活化抗原4(VLA-4)和极迟活化抗原5(VLA-5)mRNA表达的影响及其可能的作用机制。【方法】选取30例CAA肾阴阳两虚型患者为试验组,另招募10例无血液疾病及免疫系统疾病的健康志愿者为正常对照组。试验组患者给予补髓生血颗粒治疗,疗程6个月。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓VLA-4和VLA-5 mRNA表达水平,并与正常对照组作比较。【结果】治疗前,CAA患者骨髓VLA-4 mRNA呈低表达状态,VLA-5 mRNA呈高表达状态,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);应用补髓生血颗粒治疗后,试验组患者VLA-4 mRNA表达水平较治疗前升高,VLA-5 mRNA表达水平较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05),但均未恢复到正常对照组水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】CAA患者VLA-4和VLA-5 mRNA的异常表达可能参与CAA的发病过程;补髓生血颗粒可能通过调节VLA-4和VLA-5 mRNA的表达来改善CAA患者骨髓造血功能和恢复造血微环境的状态。

中药益髓生血颗粒对β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿基因表达的影响

目的探讨益髓生血颗粒治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的作用机制。方法观察20例患儿治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞计数(Ret)和胎儿血红蛋白(HbF)的改变;选取3例有效病例,通过mRNA差异显示技术(DDRTPCR)研究益髓生血颗粒对β珠蛋白生成障碍性贫血患儿骨髓有核细胞的基因表达差异。结果与治疗前比较治疗后患儿各项血液学参数均有提高(P<0.05或P<0.01);患儿骨髓有核细胞的铁蛋白基因表达明显降低。结论益髓生血颗粒可以改善患儿的临床症状,明显降低患儿铁蛋白基因的表达,有效缓解患儿体内铁的蓄积,这可能是益髓生血颗粒治疗本病的分子机制之一。

益髓生血颗粒对β-地中海贫血患者SCF及EPOR mRNA表达的影响

目的 :探讨益髓生血颗粒对造血刺激因子SCF及受体EPOR的mRNA表达的影响 ,以阐述益髓生血颗粒的疗效机制及中医肾益髓生血的分子基础。方法 :收集、观察临床资料 ,并于治疗前、给药 4、8、12周分别记录和常规血检 1次。于治疗前和治疗后现场取样 ,采用RT -PCR法检测造血刺激因子SCF及EPORmRNA表达。结果 :治疗后 ,外周血EPOR、SCFmRNA表达明显增强 ,电泳带明显变亮。结论 :益髓生血颗粒可能是通过影响造血刺激因子SCF以及EPORmBNA表达来促进骨髓造血 ,提高Hb、RBC的水平 ,达到治疗 β -地中海贫血的目的 ;造血刺激因子SCF以及EPORmRNA表达的变化 ,为中医肾藏精、主骨。

“益髓生血灵”对不同发育阶段小鼠血红蛋白珠蛋白表达的影响

目的:探讨益髓生血灵对不同发育阶段小鼠珠蛋白表达的影响。方法:分别提取正常成年小鼠骨髓、孕鼠(孕21d)和胎鼠(孕14d)胎肝胎脾有核细胞总RNA,采用real-time PCR方法检测中药益髓生血灵干预后对不同发育阶段小鼠的βminor基因(类似于人γ-珠蛋白基因)表达的影响。结果:中药干预后,胎鼠(孕14d)的βminor珠蛋白基因的表达没有明显改变;孕鼠(孕21d)和正常成年鼠造血组织βminor珠蛋白基因的表达量明显提高,与对照组相比存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论:益髓生血灵治疗β-地中海贫血的分子机制之一,是可能改变珠蛋白程序性表达,开启在出生前本应关闭的γ-珠蛋白基因,增加HbF的合成而达到治疗效果。

补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血患者骨髓CD_(34)^+、F_(as)^+及CD_(34)^+mP_(53)表达细胞影响的实验研究

目的 :探讨补髓生血冲剂对慢性再生障碍性贫血 (慢性再障 )患者骨髓CD34 + 、Fas+ 及CD34 + mP53 表达细胞的影响及意义。方法 :应用免疫组化技术 ,检测治疗前后慢性再障患者 36例 ,正常对照 12例。用单染法标记骨髓CD34 + 和Fas+ 细胞 ,用双染法标记骨髓CD34 + mP53 表达细胞。结果 :慢性再障患者CD34 + 和CD34 + mP53 表达细胞治疗前后均低于正常对照 (P <0 .0 5 ) ,疗后高于疗前 (P <0 .0 5 ) ;Fas+ 细胞治疗前后均高于正常对照 (P <0 .0 5 ) ,疗后低于疗前 (P <0 .0 5 )。结论 :补髓生血冲剂可能通过降低Fas抗原表达 ,提高mP53

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞碱性成纤维细胞生长因子及其受体的影响

目的观察补髓生血颗粒对治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者的临床疗效及骨髓基质细胞相关细胞因子的影响。方法将124例CAA患者按随机数字表法分为两组,试验组(61例)使用补髓生血颗粒治疗,对照组(63例)使用再造生血片治疗,疗程均为6个月,并设立10名健康人作为正常对照组。观察患者治疗前后症状积分、疗效判定与外周血象的变化,采用RT-PCR法检测CAA患者治疗前后骨髓基质细胞中碱性成纤维细胞生长因子(b-fibroblast growth factors,bFGF)及碱性成纤维细胞生长因子受体(b-fibroblast growth factors receptor,bFGFR)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达变化。结果试验组总有效率(75.0%,45/61)明显优于对照组(58.7%,37/63),其症状积分及外周血象明显改善,也明显优于对照组(P<0.05)。CAA患者骨髓基质细胞bFGF及bFGFRmRNA表达水平较正常对照组明显降低(P<0.05),治疗后两组bFGF与bFGFRmRNA表达水平均有所提高(P<0.05,P<0.01),且试验组优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论补髓生血颗粒具有较好的临床疗效,能改善CAA患者症状积分以及外周血象,提高临床疗效,且对细胞因子bFGF与bFGFRmRNA表达水平有调节作用,通过调控CAA骨髓基质细胞的增殖和定向分化以及促进骨髓新生血管的形成改善了造血微环境,促进骨髓造血功能的恢复。

益髓生血灵对小鼠骨髓造血干/祖细胞的影响

目的 :观察中药益髓生血灵对小鼠骨髓造血祖细胞的刺激作用 ,以探讨其治疗 β地中海贫血的疗效机理。方法 :以益髓生血灵 1 .9、3 .8和 7.6g· kg· d- 13个剂量分别给小鼠灌胃 ,并分别以生理盐水、环磷酰胺和生血丸对照组 ,1 0天后应用半固体琼脂克隆形成法及微量甲基纤维素法 ,研究小鼠骨髓粒单系祖细胞( CFU-GM)和早期红系祖细胞 ( BFU-E)和晚期红系祖细胞 ( CFU-E)的生长情况。结果 :益髓生血灵灌胃的 3个剂量组的小鼠骨髓 CFU-GM、BFU-E和 CFU-E集落数都明显增多 ,与生理盐水对照组比较 CFU-GM和 CFU-E集落数的增多有统计学意义 ( P<0 .0 1 ) ,1 .9g· kg· d- 1和 3 .8g· kg· d- 1剂量组的 BFU-E集落数增多也有统计学意义 ( P<0 .0 5和 P<0 .0 1 )。结论 :益髓生血灵对小鼠骨髓 GM-CFU、 BFU-E和 CFU-E均有促进增殖分化作用。