深低温冷冻保存对脐血细胞的影响及机制

目的:判断深低温冷冻保存对于脐血单个核细胞和CD34+细胞集落形成能力及凋亡率的影响,从而选取能准确反映冷冻损伤的指标以及优化脐血冷冻保存的方式。方法:从脐血中分离出单个核细胞及CD34+细胞,对这两种形式的细胞进行深低温冷冻保存,保存30 d后复温,并分别进行冷冻前后的粒-巨噬细胞集落形成单位(colony formingunit-granulocyte/monocyte,CFU-GM)和髓系多向造血干细胞(colony formingunit-granulocyte,erythrocyte,monocyte and megakaryocyte,CFU-GEMM)的培养,比较冷冻前后的细胞集落产率,同时AnnexinV–FITC-PI染色后流式细胞仪检测两种保存形式的细胞冷冻前后的细胞凋亡率。结果:冷冻保存对于以单个核细胞形式保存的细胞其集落形成能力和以CD34+细胞形式保存细胞的CFU-GM产率均无明显影响(P=0.31),而对以CD34+细胞形式保存的细胞其CFU-GEMM的产率却有明显影响,冷冻后的CFU-GEMM的产率明显低于冷冻前(P<0.05),且冷冻前即发现两种形式的细胞均有凋亡,冷冻后以单个核细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率稍有所上升,但以CD34+细胞形式保存的细胞其细胞凋亡率更高。结论:冷冻前细胞即存在凋亡,冷冻对于以CD34+细胞形式冷冻保存的细胞中的较早期的祖细胞CFU-GEMM存在一定的损伤,其损伤可能主要为诱导细胞凋亡所致,而对于以单个核细胞形式保存的细胞的影响较小。