RNA结合蛋白RBPMS调控急性髓系白血病细胞系THP-1增殖与迁移

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(RBPMS)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中RBPMS的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测RBPMS过表达效率;通过高通量测序检测RBPMS过表达后对THP-1细胞转录组的影响。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测RBPMS过表达对白血病细胞增殖以及迁移能力的影响。结果RBPMS在携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病干细胞中异常低表达。RBPMS过表达后THP-1细胞的增殖和迁移能力显著降低(P<0.0001,P<0.05)。结论RBPMS可以抑制携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系的细胞增殖与迁移。

人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义

本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库 ,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。提取U937细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ;XhoⅠ酶切后 ,丙烯葡聚糖凝胶 S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与λZAP表达载体连接 ,包装蛋白包装后建成cDNA文库 ;取出 1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1 Blue MRF′ ,测定文库大小、重组率 ;随机挑取 10个噬斑 ,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下 ,释放出PBK CMV噬菌粒 ;感染大肠杆菌XLOLR ,铺于卡那霉素抗性的LB平板 ;挑取克隆 ,37℃震摇过夜 ;抽提质粒 ,经EcoRI和XhoI酶切后 ,初步确定片段的大小及多样性。结果 :构建成含 2 .87× 10 6重组子的U937细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.7kb。结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。

c-myc反义寡脱氧核苷酸诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

为研究c myc硫代反义寡脱氧核苷酸对白血病细胞系HL 60诱导细胞凋亡的作用 ,将人工合成的长度分别为 18mer和 15mer的硫代反义寡脱氧核苷酸 (AspoⅠ和AspoⅡ )转染HL 60细胞 ,用流式细胞术检测c Myc蛋白及DNA倍体分析 ,RT PCR检测c mycmRNA水平 ,电镜观察凋亡细胞的超微结构 ,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA降解片段。研究结果发现 ,经AspoⅠ 5 μmol L和 10 μmol L作用后c Myc蛋白分别降低 2 3.8%和 4 5 .4 % ,经AspoⅡ 10 μmol L作用后下降38.4 % ,RT PCR显示AspoⅠ和AspoⅡ组c mycmRNA表达明显减少。DNA倍体分析AspoⅠ 10μmol L作用 4 8和 72小时细胞凋亡率分别为 2 3.97%和 5 2 .6% ;AspoⅡ 10 μmol L作用 4 8和 72小时后细胞凋亡率分别为 2 8.8%和 4 5 .19% ;而空白对照和正义寡脱氧核苷酸组均未出现凋亡细胞。电镜观察两个反义寡脱氧核苷酸 10 μmol L作用后均出现细胞固缩 ,染色质边集 ,胞浆浓缩等凋亡细胞的改变。反义寡脱氧核苷酸 10 μmol L作用 4 8小时后均出现典型的DNA降解片段。本研究结果说明 ,c myc反义寡脱氧核苷酸是高特异性的基因药物 ,对HL 60细胞抑制c mycmRNA的表达 ,减少c Myc蛋白合成 ,并诱导HL

p73基因在甲氨蝶呤诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

为了探讨甲氨蝶呤 (MTX)诱导U937细胞凋亡过程中p73mRNA的表达变化 ,用MTX诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法 ;采用半定量反转录PCR(RT PCR)检测 p73mRNA的表达变化。研究结果显示 :MTX可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的MTX作用于U937细胞 6小时 ,可见部分细胞体积缩小 ,染色质明显浓缩和核碎裂。DNA片段电泳 ,MTX处理组可见清晰的梯形条带。流式细胞仪检测发现MTX作用于U937细胞 6 ,8,10小时 ,细胞的凋亡率分别为 5 .15 % ,11.4 3%和 14 .7% ,并使细胞阻滞在G2 /M +S期 ,而对照组细胞不发生凋亡。半定量RT PCR结果显示在U937细胞凋亡前后 ,p73mRNA的表达无明显变化。结论提示 ,在MTX诱导U937细胞凋亡过程中 。

髓系白血病细胞系HLA-Ⅱ基因型的探讨

目的检测髓系白血病细胞系HLA-Ⅱ基因型。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对4种髓系白血病细胞系(U937、K562、HEL、MEG)的HLA-Ⅱ基因型进行DNA分型。结果该4种白血病细胞系的HLA-Ⅱ基因型分别是,U937细胞:DRB1*0301/*0301,DQB1*0201/*0201,DPB1*0402/*0402;K562细胞:DRB1*0301/*0301,DQB1*0201/*0201,DPB1*0402/*0402;HEL细胞:DRB1*1302/*1302,DQB1*0201/*0201,DPB1*1401/*1401;MEG细胞:DRB1*1406/*0410,DQB1*0401/*0401,DPB1*0501/*0501。结论该4种细胞系虽然来源于不同个体,但均属于髓系肿瘤细胞,国际FAB分类均属于急性髓系白血病细胞。然而,分子免疫遗传学类型有所差异。通过本研究提高了髓系白血病细胞系HLA-Ⅱ基因型认识,对今后髓系白血病分子免疫遗传学的研究,提供了初步资料。

肝素对人髓性白血病细胞系K562生长的影响

目的 :探讨肝素对髓性白血病细胞系K5 6 2增殖及凋亡的影响。方法 :采用细胞直接计数法和MTT法检测肝素对K5 6 2细胞增殖的影响 ,应用流式细胞术和Hoechst 33342荧光染色法检测肝素对长春新碱诱导的K5 6 2细胞凋亡的影响。结果 :5～ 2 0 0U/ml的肝素既不促进也不抑制K5 6 2细胞的增殖 ,且能抑制长春新碱诱导的K5 6 2细胞凋亡。抑制长春新碱诱导的K5 6 2细胞凋亡作用 ,并与肝素呈量效关系。结论 :肝素对K5 6 2细胞增殖无影响 ,但具有抑制长春新碱诱导的K5 6

姜黄素诱导髓系白血病细胞凋亡的分子途径

目的研究姜黄素诱导白血病细胞系NB4、K562、THP-1凋亡的分子途径。方法培养上述3种细胞系,用不同浓度的姜黄素(25,12.5,6.25,3.125,0μmol/L)作用24 h和25μmol/L姜黄素作用不同时间(0,12,24,48 h),流式细胞仪测定细胞凋亡率及Fas抗原(CD95)表达,Western blot测定凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达变化。结果①姜黄素以时间和浓度依赖的方式诱导白血病细胞系NB4、K562、THP-1凋亡,25μmol/L姜黄素作用48 h凋亡细胞超过50%。②25μmol/L姜黄素作用24 h后Fas抗原表达明显升高(P<0.01)。③25μmol/L姜黄素作用24 h后凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达明显增高(P<0.01)。结论姜黄素诱导白血病细胞凋亡涉及死亡受体参与的外源性途径和线粒体参与的内源性凋亡途径。

STI571耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性初步研究

为了探讨STI5 71耐药机制和体外诱导建立甲磺酸伊马替尼 (imatinibmesylate ,又称STI5 71)耐药的白血病细胞系 ,采用STI5 71递增给药的方法诱导裸鼠高致瘤性人慢粒红白血病变细胞系K5 6 2 n和多药耐药细胞系K5 6 2 n VCR对STI5 71耐药 ,比较它们与各自亲本细胞系间基本生物学特性的异同。结果显示 ,建立多药耐药基础上对STI5 71耐药的白血病细胞亚系K5 6 2 n VCR STI,对STI5 71耐药倍数为 2 3.4 1,对长春新碱 (VCR)耐药倍数为 6 6 2 .2 6 ,对高三尖杉酯碱 (HHT)具有交叉耐药性。K5 6 2 n经STI5 71诱导后对多种药物耐受性有所提高 ,命名为K5 6 2 n STI。K5 6 2 n STI和K5 6 2 n VCR STI细胞内DNR积聚量分别为 33.2 4和 18.76 ,低于各自亲本细胞系。K5 6 2 n STI与K5 6 2 n VCR STI均检测到mdr 1基因的mRNA转录。K5 6 2 n STI和K5 6 2 n VCR STI与亲本细胞系相比 ,倍增时间延长 ,增殖指数增高。结论 :体外小剂量STI5 71递增给药的方法能够提高K5 6 2 n细胞系对STI5 71的耐受性 ,同时mdr 1基因表达阳性 ,表现一定程度的多药耐受 ,提示STI5 71耐药机制与多药耐药机制之间可能存在相关性。由于K5 6 2 n为裸鼠高致瘤的人白血病细胞系 ,K5 6 2 n STI和K5 6 2 n VCR STI5

二甲双胍抑制急性髓系白血病细胞增殖

目的探讨降糖药物二甲双胍对人急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖的作用。方法将浓度梯度的二甲双胍(0、5、10、20、40、60 mmol·L^(-1))分别作用于U937细胞24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测U937细胞活力,Annexin-V/PI assay试剂盒检测U937细胞凋亡率,JC-1检测U937细胞线粒体膜电位下降水平。同时基于细胞活力试验检测结果,将上述浓度梯度的二甲双胍分别作用于U937细胞48 h,采用Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果二甲双胍作用24 h对U937细胞增殖抑制作用较弱、无明显杀伤作用;作用48 h对U937细胞有抑制细胞生长、促进凋亡、降低线粒体膜电位作用,同时显著降低U937细胞Bcl-2蛋白水平。结论二甲双胍可杀伤人急性髓系白血病细胞系U937细胞。二甲双胍抗白血病作用可能与其下调线粒体膜电位、抑制Bcl-2蛋白表达有关。

4-HPR促髓母细胞瘤细胞凋亡的机制

目的探讨4-羟苯维胺酯对髓母细胞瘤细胞株的促凋亡的效应,及其对抗凋亡相关基因BclxL表达的影响。方法将2.5μM的4-羟苯维胺酯作用于髓母细胞瘤D283MED细胞株,用MTT实验,克隆形成实验检测4-羟苯维胺酯对细胞增殖的抑制作用,TUNEL法检测瘤细胞的凋亡率。采用RT-PCR及Western blot方法检测Bcl-xL的mRNA和蛋白的表达。结果4-羟苯维胺酯可显著抑制D283MED瘤细胞的增殖,明显促进瘤细胞凋亡(P<0.05);RT-PCR及Western blot结果显示Bcl-xL的mRNA和蛋白均明显减少。结论4-羟苯维胺酯通过下调Bcl-xL基因及其蛋白的表达,从而抑制髓母细胞瘤D283细胞的增殖,促进瘤细胞凋亡。

复方中药制剂对急性髓系白血病细胞诱导分化与增殖的作用

目的:研究复方中药制剂对白血病细胞的作用及其机制。方法:用复方中药制剂处理体外培养的髓系白血病细胞株,用CCK8的方法观察中药制剂对白血病细胞增殖的影响,瑞氏染色法观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞凋亡并测定细胞表面分化抗原CD11b的表达水平。结果:与单纯的4种白血病细胞系HL-60,MOLM-13,MV4-11,AML-M5相比较,不同中药浓度处理的这4种白血病细胞增殖能力减弱(P<0.05)且其增殖抑制作用呈剂量依赖性(r=0.9236;r=0.7488;r=0.8889;r=0.8119);与单纯的HL-60和AML-M5白血病细胞系相比,药物处理的这2种白血病细胞有明显的分化形态改变;与单纯的HL-60白血病细胞系相比,IC50中药浓度处理的HL-60细胞表面抗原CD11B增加85%±7.13%;与单纯的AML-M5白血病细胞系相比,1.5μl和2μl剂量中药制剂处理的AML-M5细胞的凋亡率增加(P <0.05)。结论:复方中药制剂对白血病细胞具有抑制增值作用,其机制可能与诱导白血病细胞分化和凋亡作用相关。

CYP3A5*3多态性与髓系白血病风险关系的Meta分析

目的综合评价细胞色素P4503A5（CYP3A5＊3）基因多态性与髓系白血病发生风险的关系。方法全面检索PubMed、中国生物医学文献数据库（CBM）、中文期刊全文数据库（CNKI）和万方数据库，收集探索CYP3A5＊3多态性与髓系白血病风险关系的病例对照研究，纳入符合人选标准的文献，应用RevMan5．2软件对纳入研究进行异质性检验和效应值OR合并，漏斗图评估发表性偏倚。结果共纳入5篇文献，包括患者929例，对照1080例。异质性检验结果表明纳入研究间存在显著异质性，采用随机效应模型合并数据。Meta分析结果示：CYP3A5基因＊1／＊3、＊3／＊3、（＊1／＊3＋＊3／＊3）的合并OR及95％c1分别为1．45（0．91-2．32）、1．60（0．89-2．85）和2．69（0．86-8．38），对应P值分别为0．12、0．11和0．09。结论CYP3A5＊3多态性与髓系白血病发生风险无相关性。

强力霉素抑制丝裂霉素诱导的MTEC1细胞凋亡及其蛋白质组初步分析

目的:探讨强力霉素(doxycycline,Dox)保护胸腺上皮细胞的作用及其机制,为进一步研究Dox的免疫调节作用奠定基础。方法:利用光学显微镜观察Dox对丝裂霉素(mitomycin,MMC)诱导MTEC1凋亡的影响,同时采用Hochest33342、PI单染、Annexin V和PI双染确认其作用,最后利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析了SAX2芯片捕获的Dox作用前后的差异蛋白质。结果:通过形态学观察、Hochest33342、PI单染及Annexin V和PI双染发现Dox确实能保护MTEC1抵抗丝裂霉素诱导的细胞凋亡。随后采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析SAX2芯片捕获蛋白,发现Dox能调控15种蛋白,其中上调8种,下调7种。结论:Dox具有保护MTEC1,抑制MMC诱导的细胞凋亡作用,并对MTEC1的蛋白表达有调控作用。

转染反义VEGF_(121) cDNA恢复K562细胞β1整合素的活化功能

为了探索血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在K5 6 2细胞 β1整合素活化功能中的作用 ,利用转染正义 (S)、反义 (As)VEGF12 1cDNA及空载体 (V ,pcDNA3 )的不同K5 6 2细胞株 ,通过流式细胞术检测其粘附分子VLA 4(CD4 9d/CD2 9)和VLA 5 (CD4 9e/CD2 9)表达及 β1整合素的可活化性。结果显示 :K5 6 2 /V ,K5 6 2 /S和K5 6 2 /As细胞 β1整合素VLA 4 (CD4 9d/CD2 9)与VLA 5 (CD4 9e/CD2 9)的表达率均在 92 %以上 ,但经 β1整合素活化剂 8A2抗体激活后 ,K5 6 2 /As细胞可活化表位 9EG7表达率较K5 6 2 /V细胞明显提高 (75 .6± 10 .5vs 4 1.2± 2 .1% ,P <0 .0 1)。结论 :转染反义VEGF12 1cDNA能增加K5 6 2细胞

维甲酸诱导HL-60细胞分化与细胞周期的关系

研究全反式维甲酸 (RA)在体外诱导人髓系白血病细胞系 (HL 60 )分化过程中细胞周期的改变。利用流式细胞术动态测定RA在体外诱导HL 60细胞分化过程中细胞周期的改变。结果发现 :①在RA与HL 60细胞共培养 4 8小时内 ,S +G2 /M期比例无明显变化 ,但S期细胞的比例改变与RA的浓度有关 ,在 10 - 6 mol/LRA浓度S期细胞比例先出现一过性升高 ,继而持续下降 ,在 10 - 5mol/L浓度S期细胞比例表现为持续性下降 ;②重培养试验证明 :S +G2 /M和S期细胞比例的下降与成熟分化细胞的增加相一致 ;③RA诱导HL 60细胞成熟分化并不是在一个时间点上同时进入分化状态 ,而一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 ,细胞仍能分化至成熟。结论提示 :RA与HL 60细胞必须相互作用一定时间后才能触发细胞成熟分化 ,S期细胞的比例改变与RA药物浓度有关 ,一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 。

胸腺上皮细胞中雌激素诱导lncRNA的鉴定分析及表达载体构建

为研究胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)中雌激素(estradiol,E2)对长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1(medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1),经50 nmol/L E2作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E2对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E2能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E2处理组细胞的D450 nm值极显著降低(P<0.01),表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E2作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调(P<0.01),约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E2作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。

汉黄芩苷或可治疗急性髓系白血病

中国药科大学药学院郭青龙教授带领的科研团队发现,中药黄芩的有效单体成分——汉黄芩苷,能抑制急性髓系白血病的细胞增殖,相关研究论文近日发表在国际杂志《血液》上。汉黄芩苷是从中药黄芩中提取的单体成分,是具有自主知识产权的国家抗肿瘤一类新药汉黄芩素的主要代谢产物之一。中国药科大学科研团队针对急性髓系白血病细胞系和来自患者的急性髓系白血病细胞展开了研究，发现汉黄芩苷在体外和体内都表现出了抗细胞增殖的特性，