基于单细胞测序的草酸钙肾结石大鼠髓袢细胞亚群基因表达谱特征分析

目的:探讨草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征。方法:应用乙二醇氯化铵诱导法构建草酸钙肾结石大鼠模型,通过Von Kossa′s组织染色验证模型构建成功。单细胞测序方法鉴定髓袢细胞,对比分析草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征,应用生物信息学方法进行差异表达基因的GO、KEGG以及GSEA富集分析。结果:相较于对照组,实验组大鼠肾脏组织中发现钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,表明草酸钙肾结石大鼠模型构建成功。单细胞测序分析发现,在实验组髓袢细胞亚群共有差异表达基因3 510个,其中880个表达上调,2 630个表达下调;其中LOC499584,白介素7(interleukin 7,Il7),双特异性磷酸酶1(dual specificity phosphatase 1,Dusp1)以及基质Gla蛋白(matrix Gla protein,Mgp)表达上调最为显著;HORMA结构域蛋白质2(HORMA domain containing 2,Hormad2),LOC361914,JUN二聚体蛋白2(Jun dimerization protein 2,Jdp2)以及生长抑素-B和血小板反应蛋白1型结构域蛋白(somatomedin-B and thrombospondin type-1 domain-containing protein,Sbspon)表达下调最为显著。KEGG分析发现实验组髓袢细胞亚群氧化磷酸化、代谢途径、丙酸代谢、自噬、溶酶体以及胞吞作用等信号通路发生显著改变。结论:本研究首次揭示了草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征,为肾结石的形成及其介导的肾损伤研究提供了一定的参考依据。

肾脏髓袢升支粗段钾离子通道的研究进展

肾脏髓袢升支粗段(thick ascending limb of the Henle'loop,TAL)具有重要的生理功能,它可以重吸收约20%～30%的Na+、K+、Cl-等物质,且在尿液稀释和浓缩机制中发挥着重要作用。而TAL上的钾离子通道在产生细胞膜电位、与Na+-K+-2Cl-及Na+-K+-ATPase相关的K+再循环、调整细胞容积中起重要作用。因此,对TAL中钾离子通道的研究具有较为重要的生理意义。本文对有关TAL中钾离子通道的类型、功能、调控及其相关疾病等问题的研究进展简要综述。

ATP对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道的调节

目的研究ATP对肾脏髓袢升支粗段管周膜钾通道活性的调控作用。方法应用单通道膜片钳技术记录管周膜钾通道电流,观察ATP作用前后钾通道开放概率的变化。结果在内面向外式记录模式下,1.0mmol·L-1的ATP对管周膜50pS钾通道有抑制作用,通道开放概率从加药前的0.46±0.28降至0.02±0.04;ATP对50pS钾通道的抑制作用具有剂量依赖性。结论髓袢升支粗段管周膜钾通道的活性受细胞内ATP的调控。

Ouabain对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活性的影响

肾脏髓袢升支粗段（thick ascending limb,TAL）对NaCl的主动重吸收启动了髓质渗透梯度的形成,其动力来自管周膜上的钠-钾泵。50pS钾通道是管周膜上分布最多的钾通道,在NaCl的主动转运中发挥重要作用。50pS钾通道的活性是否受钠-钾泵活动的影响，目前尚不清楚。本实验利用单通道膜片钳技术，观察钠-钾泵抑制剂ouabain对髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活动的影响，探讨50pS钾通道是否在功能上与钠-钾泵偶联。

肾髓质髓袢升支粗段小管的分离技术

肾髓质髓袢升支粗段小管的分离技术郑丰，周虹关键词肾小管；髓袢升支粗段；微分高肾单位由肾小球、近端小管、髓袢、远端小管、集合小管等部分构成。其中每一部分均有不同的功能，它们共同参与了机体内环境稳定的调节。要了解肾脏在生理和病理状态下离子转运、代谢等方面...

腺苷类似物CHA对大鼠肾脏髓袢升支粗段中PKA及PLA_2蛋白表达的影响

目的:探讨腺苷类似物CHA(环己基腺苷)对大鼠肾脏髓袢升支粗段(Thick ascending limb of Henle’s loop,TAL)中PKA(蛋白激酶A)及PLA2(磷脂酶A2)蛋白表达的影响。方法:在髓袢升支粗段组织中加入10μmol/L的CHA,分别作用5min、15min、30min和1h,采用Western blot(免疫印迹)技术观察CHA对PKA及PLA2蛋白表达的影响。结果:CHA未能明显改变大鼠肾脏髓袢升支粗段中PKA及PLA2的蛋白表达(P>0.05)。结论:CHA在实验所用时间内不能改变PKA和PLA2的蛋白合成。

桂竹糖芥苷对肾小管功能及髓袢升支粗段管周膜50pS钾通道活性的影响

目的:探讨桂竹糖芥苷对肾小管功能及髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道活性的影响。方法:采用导尿法及细胞贴附式膜片钳技术测定尿量变化及对通道活性的影响。结果:桂竹糖芥苷可明显增加尿量,也可抑制髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道的活性(P<0.01)。结论:桂竹糖芥苷有利尿作用,而且这种利尿作用可能是通过抑制髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道活性实现的。

肾髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道研究进展

肾小管的钾通道分布于肾小管各段,既分布于管周膜,也分布于管腔膜,由于管周膜的膜片钳封接难度较大,故相关研究较少。但髓袢升支粗段(thick ascending limb,TAL)管周膜钾通道在肾小管的重吸收过程中是重要环节,对其研究具有重要意义。50 pS钾通道是近年来在肾髓袢升支粗段管周膜上发现的主要K+通道,本文对其功能、特点及调控等方面进行简要综述。

髓袢升支粗段管周膜钾通道电流特性的研究

目的研究肾脏髓袢升支粗段管周膜钾通道的类型及其电流特征。方法应用单通道膜片钳技术记录大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜钾通道电流。结果在髓袢升支粗段上皮细胞的管周膜可记录到多种单通道钾电流。其中,50pS、70pS和100pS 3种钾通道占90%以上,不同类型钾通道的电流大小、开放概率及开放时间和关闭时间不同。结论髓袢升支粗段管周膜存在不同类型的钾通道,这些通道具有不同的电流特性。

桂竹糖芥苷对大鼠肾髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道活性的调控机制

目的:探讨桂竹糖芥苷对肾髓袢升支粗段(thick ascending limb,TAL)管周膜50 p S钾通道活性的调控机制。方法:采用细胞贴附式膜片钳技术及免疫印迹技术测定桂竹糖芥苷对50 p S钾通道活性的调控机制。结果:桂竹糖芥苷可明显抑制50 p S钾通道的活性(P<0.01);PKC阻断剂存在时,桂竹糖芥苷不再增加50 p S钾通道的活性(P>0.05)。结论:桂竹糖芥苷可能是通过激活PKC依赖途径抑制50 p S钾通道活性的。

TNF-α对大鼠肾髓袢升支粗段中PKA及其磷酸化水平蛋白表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对大鼠肾髓袢升支粗段中PKA(蛋白激酶A)及其磷酸化水平蛋白表达的影响。方法:在髓袢升支粗段组织中加入10n M的TNF-α作用5min,采用免疫印迹技术观察TNF-α对PKA及其磷酸化水平蛋白表达的影响。结果:TNF-α未能明显改变大鼠肾髓袢升支粗段中PKA及其磷酸化水平的蛋白表达(P﹥0.05)。结论:TNF-α不能改变PKA的蛋白合成及其磷酸化水平的表达。

TNF-α对肾髓袢升支粗段钾通道活性的调节

肾髓袢升支粗段(thick ascending limb,TAL)对Na Cl的主动重吸收是髓质渗透梯度建立的直接动力,在尿液浓缩和稀释方面发挥重要作用。髓袢升支粗段钾通道在该段肾小管对Na Cl主动重吸收过程中扮演重要角色,而TNF-α可对髓袢升支粗段钾通道的活性进行调节,进而影响Na Cl的转运。

肾脏髓袢升支粗段CLC-K氯通道与巴特氏综合征

随着膜片钳和分子生物学等技术的应用,在肾髓袢升支粗段(thick ascending limb,TAL)发现了三种氯通道,但相关研究证实,在TAL表达最多且在该部位离子转运过程中起主要作用的是CLC-K2,编码人类肾脏TAL的氯通道CLC-Kb的基因CLCNKB也被列为高血压候选基因之一,且与巴特氏综合征的发病密切相关,因此该通道已成为近年来的研究热点。本综述主要从CLC-K其功能、结构、电生理特性、调控以及与相关疾病巴特氏综合征之联系,介绍肾髓袢升支粗段CLC-K氯通道的研究进展。

髓袢利尿药在高血压治疗中的应用

治疗高血压病,作为第一线药物的噻嗪类利尿剂,由于它们的副反应使其广泛使用受到限制,传统的速尿类袢利尿剂又很少作为第一线降压药。新研制的袢利尿剂,特别是低剂量的Torasemide,是替代噻嗪和速尿类有希望的利尿降压药物。

TNF-α对糖尿病肾病大鼠髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的调控

目的:探讨TNF-α对糖尿病肾病形成中髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的调控。方法:取SD雄性大鼠随机分成4组,正常对照组(NC)、糖尿病模型组(DM)、NC+TNFR:Fc组和DM+TNFR:Fc组,20天后用Western blot方法检测髓袢升支粗段中TNF-α、KCNJ10、PLA2和PTK的蛋白表达情况。结果:DM组TNF-α蛋白表达显著增加;DM组KCNJ10蛋白表达降低,而PLA2和PTK蛋白表达增加;DM+TNFR:Fc组KCNJ10蛋白表达增加,而PLA2和PTK蛋白表达降低。结论:在糖尿病肾病形成中,TNF-α通过激活PLA2和PTK依赖途径抑制髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的活性。

肾脏髓袢的物质转运功能

肾髓质的渗透压梯度,在浓缩尿的形成中,起着关键作用。而髓袢和直小血管的解剖排列,则构成逆流系统,在形成和维持渗透压梯度至关重要。渗透压梯度的形成又与髓袢各段的物质转运功能密切有关。本文着重讨论髓袢各段如何转运水、NaCl、尿素这些与形成渗透压梯度密切有关的几种物质,尤其是髓袢升支粗段,主动重吸收NaCl。

蛋白激酶A激活和磷脂酶A_2抑制参与腺苷对大鼠肾髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道的易化效应(英文)

本文旨在研究蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)和磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)在腺苷对髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道刺激过程中的作用。解剖显微镜下分离髓袢升支粗段,膜片钳技术记录50 pS钾通道电流,免疫印迹技术测定PKA及PLA2磷酸化水平的蛋白表达情况。结果显示,环己基腺苷(cyclohexyladenosine, CHA,一种腺苷类似物)可增加50 pS钾通道的活性(P<0.05)。在PKA阻断剂H8的存在下,CHA不再增加50 pS钾通道的活性。在PLA2阻断剂AACOCF3存在下,CHA不再增加50 pS钾通道的活性。CHA可以增加髓袢升支粗段中PKA的磷酸化水平,而抑制PLA2的磷酸化水平(P<0.01)。在AACOCF3存在下,CHA依旧可以增加PKA的磷酸化水平(P<0.01);在H8存在下,CHA不再抑制PLA2的磷酸化水平(P>0.05)。以上结果提示,腺苷对髓袢升支粗段管周膜50 pS钾通道的刺激作用是通过先激活PKA,而后再抑制PLA2途径而实现的。

高剂量利尿治疗对射血分数降低和保留射血分数的急性心力衰竭患者的影响

目的 评估高剂量利尿治疗对射血分数降低(HFrEF)和保留射血分数(ejection fraction)的急性心力衰竭(AHF)患者的影响。方法 选取AHF患者137例,依据入组前射血分数(LVEF)将其分为HFrEF组70例和HFpEF组67例,两组均接受高剂量呋塞米治疗,对比治疗72h后两组肾功能恶化情况[血肌酐(Scr)、胱抑素C]、体液清除(体液清除量、体重变化)及不良事件(无充血性AHF、恶化或持续性AHF、病死、心衰住院、计划外门诊)发生情况。结果 经过治疗,HFrEF组血Scr、胱抑素C较治疗前无明显变化(P>0.05);HFpEF组血Scr、胱抑素C较治疗前显著增加(P<0.05);HFrEF组72h体液丧失量、72h体重变化幅度显著高于HFpEF组(P<0.05);两组不良事件发生对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高剂量利尿治疗策略增强了HFrEF的液体清除,但肾功能恶化风险升高,而对HFpEF没有明显优势,临床应针对HFrEF和HFpEF进行个体化治疗。

阿佐塞米的合成

以 2 -氟 - 4 -氯苯甲酸为起始原料 ,经氨磺酰化、酰胺化、氰化、与 2 -噻吩甲胺缩合 ,最后与叠氮化钠和氯化铵进行 1,3-环加成合成阿佐塞米 ,总收率 2 2 %。