髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35~55肽段诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎疾病表型

目的利用6~8周龄雌性C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并对其疾病表型进行探讨,以期建立更接近多发性硬化(MS)的动物模型。方法通过皮内注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55肽段免疫50只雌性C57BL/6小鼠,建立EAE模型。每日按15分评分评估其疾病进展情况,观察90d,进一步通过病理学观察小鼠脑组织病变情况。结果EAE模型小鼠疾病表现为慢性病程(3只)、复发缓解病程(7只)和单相病程(11只)。部分小鼠(28只)虽然神经功能评分为0,但它们的毛色、精神和活动都发生了变化,在其脑组织中也观察到了炎性脱髓鞘病变。结论用C57BL/6雌性小鼠建立的EAE模型表现出与MS相似的疾病表型,可作为研究MS的良好动物模型。

黄芪甲苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞免疫调节的影响

背景:多发性硬化初始阶段,中枢免疫细胞激活并释放大量炎症因子,引起白质脱髓鞘甚至累及灰质神经元。CD4^(+)T细胞不同亚群之间的分化平衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的病程进展中发挥着重要作用。课题组前期研究结果表明黄芪内有效成分黄芪甲苷能够调节EAE小鼠体内免疫反应,其是否对T细胞亚群分化具有调节作用尚未明确。目的:探究黄芪甲苷对EAE小鼠治疗效果及其对T细胞的免疫调控机制。方法:将C57BL/6雌性小鼠分为正常对照组、EAE疾病模型组和黄芪甲苷治疗组,每组8只,后2组使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)制备EAE模型,免疫后第10-28天,黄芪甲苷治疗组以40 mg/(kg·d)灌胃给药。免疫当天至第28天,记录各组小鼠的体质量及临床评分;免疫后第28天取小鼠脊髓制成冰冻切片行苏木精-伊红染色、固蓝染色观察脊髓病理改变,流式细胞术检测脾脏T细胞亚群百分比,Western blot法检测脊髓组织中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6的蛋白表达,ELISA检测脾细胞上清液中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6、白细胞介素4水平。结果与结论:(1)与EAE疾病模型组相比,黄芪甲苷治疗能够减少EAE小鼠体质量丢失(P<0.05),缓解临床症状(P<0.05),减轻脊髓炎症细胞浸润及髓鞘脱失病理改变(分别为P<0.01和P<0.05);(2)与EAE疾病模型组相比,黄芪甲苷治疗可抑制表达γ干扰素和白细胞介素17的CD4^(+)T细胞亚群比例(分别为P<0.001和P<0.001),上调表达白细胞介素10和转化生长因子β的CD4^(+)T细胞亚群百分比(分别为P<0.001和P<0.01);(3)黄芪甲苷可下调脊髓和脾脏中γ干扰素(分别为P<0.05和P<0.01)、白细胞介素17(分别为P<0.05和P<0.05)、白细胞介素6(分别为P<0.05和P<0.05)的表达,上调脾脏中抑炎因子白细胞介素4的表达(P<0.01);(4)结果说明,黄芪甲苷可以减轻EAE小鼠的临床症状,其机制与调节脾脏免疫细胞亚群进而抑制炎症细胞向中枢浸润、减少髓鞘脱失有关。

CD-1遗传背景小鼠EAE模型:遗传背景对临床表现的影响

目的:制作不同基因背景小鼠自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,比较不同遗传背景小鼠发病、神经功能评分和病理变化的差异。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗原(MOG35-55)免疫C57BL/6和CD-1基因背景小鼠,用完全弗氏佐剂作为抗原载体,并在不同时间点用精制百日咳毒素增强免疫效果,建立自身免疫性脑脊髓炎模型;记录小鼠发病时间与表现,每天进行神经功能评分,并取其脑和脊髓组织进行病理学检查和以CD4、IL-17为靶标的免疫组化染色。结果:C57BL/6组小鼠发病高峰期出现于初次免疫后17～25 d,表现典型的拖尾、单侧或双侧后肢瘫痪等改变,神经功能评分在3分左右;CD-1组小鼠发病高峰期较C57BL/6组推迟,出现于免疫后35～40 d,可见相似的拖尾及偏瘫表现,神经功能评分在2.8分左右。病理检查可见C57BL/6模型小鼠脑、脊髓出现炎症性细胞浸润,而CD-1小鼠的炎性改变相对较轻、且主要出现于脊髓;罗克沙尔固蓝染色法鉴定显示,模型小鼠脑脊髓组织出现脱髓鞘病变,以C57BL/6小鼠更为严重。免疫组织化学法显示2种模型小鼠发病高峰期均存在不同程度的CD4+及IL-17+炎性细胞的浸润。结论:不同的遗传背景对EAE模型发病、临床表现和病理改变有明显影响;CD-1小鼠亦可运用于制作慢性迁延性EAE模型,更符合人类多发性硬化的特点。

NG2^+胶质细胞在Th1-EAE和Th17-EAE中的不同作用

NG2^+胶质细胞在EAE中的作用还不清楚。课题组应用PDGFRα-CreER特异地诱导白喉毒素在NG2^+胶质细胞中表达,成功地在小鼠中枢神经系统中部分剔除NG2^+胶质细胞。研究发现部分剔除NG2^+胶质细胞的小鼠CNS中在诱导Active-EAE和Th1-EAE的发病过程中,表现为临床症状减轻、髓鞘蛋白脱落减少以及炎症细胞浸润减少,说明NG2^+胶质细胞能够增强胶质细胞的作用以加重Active-EAE和Th1-EAE的发病程度。与此相反,在Th17-EAE小鼠中,NG2^+胶质细胞能够抑制EAE的发生。这些结果提示NG2^+胶质细胞在不同诱导方式EAE发生中的作用是不同的,因此在治疗方法上也应该区别对待。这一结果将帮助多发性硬化患者的治疗提供新的靶点。