IL-17对髓鞘碱性蛋白诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的探讨IL-17对髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响。方法将大鼠分为5组,分别经鼻黏膜滴注PBS、MBP68-86、MBP68-86+IL-17(0.01μg/d)、MBP68-86+IL-17(0.05μg/d)和MBP68-86+IL-17(0.1μg/d)诱导其发生免疫耐受,并在此基础上建立EAE动物模型,观察各组大鼠发病情况;通过3H掺入试验检测特异性抗原MBP68-86多肽诱导T淋巴细胞增殖活性;HE染色观察脊髓淋巴细胞浸润情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17+细胞数。结果PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,大鼠免疫后出现进食减少、体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床症状,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组大鼠临床症状较轻或无症状。淋巴细胞增殖试验结果显示,PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,特异性淋巴细胞增殖反应显著增高,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组与MBP组相比,差异无显著意义,与IL-170.1μg/d组相比差异有显著意义;PBS组、IL-170.1μg/d组与MBP组、IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组相比,脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多,IL-17+细胞数也显著增多。结论MBP68-86特异性肽段可诱导EAE免疫耐受的形成,预防EAE的发生;鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP诱导的特异性免疫耐受,且存在剂量依赖性。

嗅鞘细胞移植实验性自身免疫性脑脊髓炎后髓鞘碱性蛋白的表达和小胶质细胞的捕获

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)后髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的表达及小胶质细胞捕获OECs情况。方法:用新生近交系Wistar大鼠嗅球培养出OECs,经荧光染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记后注入同系EAE Wistar大鼠侧脑室,免疫组化检测OECs髓鞘碱性蛋白(MBP)、单核巨噬细胞诱导分子1(ED1)和CFSE共表达情况。结果:培养OECs不表达MBP,经侧脑室移植后在EAE大鼠脑内出现多量MBP+CFSE+细胞,同时在大脑广泛区域及血管周围间隙出现多量ED1+CFSE+细胞,与对照组相比差异显著。结论:OECs在EAE环境下表达MBP分子,其抗原能被脑内小胶质细胞或巨噬细胞捕获。

经腹腔注射髓鞘碱性蛋白抑制自身免疫性脑脊髓炎的实验研究(英文)

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)动物模型 ,研究腹腔内注射可溶性髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导免疫耐受的作用机制。方法 将雌性豚鼠随机分为对照组、EAE组和腹腔注射MBP组。观察各组EAE的发病情况。结果 腹腔内注射MBP组的发病率明显低于EAE组 ,其神经组织病理变化明显改善。

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠治疗作用的观察

目的:探讨雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统(CNS)髓鞘及轴突损伤的影响。方法:用MOG35-55多肽诱发建立40只EAE小鼠模型后随机分为2组,各20只,治疗组予雌激素治疗,对照组予同等量的生理盐水灌胃处理。比较2组EAE小鼠的临床症状评分和体质量变化。取各组EAE小鼠脑和脊髓,行罗克沙尔固蓝(LFB)-HE染色及Bielschowsky染色观察髓鞘及轴突损伤情况;实时荧光定量PCR及Westernblot检测各组EAE小鼠CNS中髓鞘碱性蛋白(MBP)及生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达。结果:治疗组EAE小鼠较对照组临床症状评分、平均丧失的最大体质量降低;LFB-HE染色、Bielschowsky染色示治疗组较对照组脱髓鞘减轻,轴突损伤减轻,PCR及Westernblot结果显示治疗组MBP和GAP-43表达较对照组增加。结论:雌激素可通过减轻髓鞘损伤及促进轴突再生治疗EAE小鼠。

实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的比较

目的比较两种不同品系大鼠及不同免疫原诱发的EAE模型特点。方法应用MOG35-55、同种脊髓匀浆(DA-SCH)、MBP68-86、豚鼠-MBP为免疫原,分别免疫DA大鼠或Lewis大鼠制备EAE动物模型。观察比较大鼠发病过程、临床评分及病理变化。结果应用MOG35-55或DA-SCH为免疫原致敏的DA大鼠病程呈现缓解-复发的双相病程,应用MBP68-86、豚鼠-MBP致敏Lewis大鼠而诱发的EAE模型为急性单相病程。豚鼠-MBP诱发的EAE模型发病时间匀齐、发病率最高、病情也最重,应用DA-SCH诱发的EAE模型病情其次重但发病时间不匀齐,MOG及MBP肽段引发的病情相对较轻。各实验组在发病高峰期组织病理变化以炎症反应为主。DA大鼠两个实验组第二次发病期炎症反应相对较轻而脱髓鞘较明显。结论不同免疫原制备的EAE模型具有不同的特点,可根据研究目的不同选取所需模型。

不同磷脂肽段诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎模型病理特征多样性的研究

目的:探索是否不同磷脂肽段可以诱导Lewis大鼠产生不同的病理学表现。方法:采用髓鞘碱性蛋白82-99(MBP82-99)、MBP68-86、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫Lewis大鼠,每天进行神经功能评分。免疫后取各组大鼠大脑、小脑、脑干和脊髓组织,观察炎性细胞浸润部位和浸润程度、有无脱髓鞘和轴索损害。结果:MBP68-86和MBP82-99两组大鼠的大脑、脑干、小脑和脊髓组织均有炎性细胞浸润,脊髓炎症程度重于其他部位;MBP68-86和MBP82-99诱导的脊髓炎症程度无统计学差异;MOG35-55组大鼠仅脊髓组织受累,且炎症程度明显低于MBP组,其余各组未见炎性细胞浸润。各组大鼠神经组织均未见脱髓鞘和轴索受累。结论:不同磷脂肽段诱导Lewis大鼠神经组织炎性细胞浸润的分布和程度不同。

氯马斯汀促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的再髓鞘化

目的探讨氯马斯汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法将50只C57BL/6雌性小鼠适应性喂养后按随机数字表法分成5组,即正常对照组、EAE模型组和氯马斯汀高、中、低剂量组[40、20、10mg/(kg·d)],每组10只。EAE模型组及氯马斯汀各剂量组采用抗原髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导EAE模型。氯马斯汀各剂量组每天腹腔注射氯马斯汀预防性给药,正常对照组和EAE模型组腹腔注射生理盐水,连续21d。建模后每天评判小鼠临床表现,进行神经功能障碍评分。21d后统一处死小鼠,观察各组小鼠脊髓组织病理切片的Luxol Fast Blue染色情况并进行脱髓鞘评分。观察各组小鼠脑组织匀浆中MBP及其mRNA表达的变化。结果正常对照组未发病。EAE模型组和氯马斯汀各剂量组从7~8d开始不同程度发病,在12~16d逐渐达到发病高峰,且随着干预剂量增大,小鼠发病高峰评分降低(P<0.01)。正常对照组小鼠脊髓组织未发生脱髓鞘改变;EAE模型组小鼠脊髓组织发生明显脱髓鞘改变;氯马斯汀各剂量组小鼠脱髓鞘程度明显改善,且改善程度呈剂量依赖性(P<0.01)。与正常对照组比较,EAE模型组与氯马斯汀各剂量组MBP蛋白及mRNA表达明显减少(P<0.05);与EAE模型组对比,氯马斯汀各剂量组MBP及其mRNA表达显著升高(P<0.05),呈剂量依赖性。结论氯马斯汀对MOG35-55诱导小鼠EAE模型具有防治作用,呈现剂量依赖性,其机制可能与促进MBP表达、改善再髓鞘化有关。

MBP68-86与MBP87-99诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的轴突损伤修复及其机制研究

目的观察髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)68-86及MBP87-99诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型中淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)及生长相关蛋白(growth-associatedprotein,GAP)-43mRNA表达及其环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶(protein kinase,PKA)的变化,探讨EAE大鼠发病过程中轴突损伤修复及其可能的分子机制。方法应用不同肽段的MBP68-86或MBP87-99与不完全福氏佐剂及结核杆菌混合制成抗原,皮下注射于大鼠双后足垫,建立大鼠EAE模型。观察其神经功能评分、脑组织病理变化,酶联免疫测定大鼠脑组织cAMP含量,实时荧光定量RT-PCR法测定大鼠脑组织APP、GAP-43及PKA mRNA表达。结果与MBP87-99组大鼠比较,MBP68-86所致EAE病情进展快,神经功能评分较高,炎细胞浸润重并形成袖套状改变。中剂量MBP68-86免疫大鼠第14天,脑组织GAP-43 mRNA表达较正常组明显降低(P<0.05);第28天,APP mRNA表达明显升高(P<0.05)。MBP87-99免疫大鼠第28天,APP mRNA表达较正常组和小剂量MBP68-86明显上升(P<0.05);GAP-43 mRNA表达较大、小剂量MBP68-86明显升高(P<0.05)。大、小剂量MBP68-86与MBP87-99免疫大鼠第28天,脑组织cAMP水平均较正常组明显增高(P<0.01或P<0.05),中剂量MBP68-86与MBP87-99组大鼠脑组织PKA mRNA表达明显升高(P<0.01)。结论 MBP68-86或MBP87-99均可诱导Lewis大鼠产生EAE。可引起脑组织的炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等,且损伤有一定的自我修复功能,其机制可能与调节cAMP-PKA信号途径有关。综合分析研究结果发现,MBP68-86中剂量(每只50μg)可作为探索EAE发病特点及药物观察的实验模型。

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的 研究用牛的髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导Wistar大鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)。方法 一次性给Wistar大鼠双后腿足垫皮内注射牛MBP 福氏完全佐剂 (CFA)混合乳剂 ,同时辅以百日咳杆菌。结果 实验组大鼠全部发病 ,对照组无一发病。结论 用牛脊髓MBP的粗提品可成功地诱导Wistar大鼠发生EAE。

全脊髓匀浆建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型

目的:用全脊髓匀浆(粗制髓鞘碱性蛋白)建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法:Wistar大鼠全脊髓匀浆+完全福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变。结果:实验豚鼠均表现典型的EAE症状;光镜观察见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘改变。结论:全脊髓匀浆加完全福氏完全佐剂成功的诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物廉价易得的优点,是研究多发性硬化理想的动物模型。

瘦素对实验性自身免疫性脑脊髓炎的促发作用

实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）是中枢神经系统炎性脱髓鞘白质脑病如多发性硬化的动物模型。用致脑炎的相关抗原免疫敏感动物可制造EAE模型。致EAE的相关抗原有许多，主要有全脊髓匀浆（spinal cord homogenate，SCH）、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）、髓鞘少突胶质糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein，

托法替尼对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的抑制作用及其机制

目的探讨托法替尼对模型大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的抑制作用及其机制。方法将50只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,托法替尼小、中、大剂量组,每组10只。除正常对照组外,其他各组采用髓鞘碱性蛋白(MBP)及完全弗氏佐剂制备EAE模型。从造模前3 d开始,正常对照组与模型对照组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,托法替尼小、中、大剂量组分别给予托法替尼1,2,4 mg·kg^-1·d^-1灌胃,连续10 d。观察各组大鼠发病情况,记录大鼠发病潜伏期、进展期及发病高峰期神经功能障碍评分(NDS)。于发病高峰期处死大鼠,未发病大鼠饲养8周后处死,取脑组织。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察脑组织病理改变;免疫组化法检测各组大鼠脑白质脱髓鞘及星型胶质细胞活化情况。结果与模型对照组比较,托法替尼小、中、大剂量组大鼠发病潜伏期延长,进展期缩短,NDS降低,脑组织炎性细胞浸润程度减轻,MBP染色阳性表达平均吸光度值增加,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞平均吸光度值降低(P<0.01,P<0.05);且呈剂量依赖性,剂量越大作用越明显。结论托法替尼对模型Wistar大鼠EAE具有抑制作用,且呈剂量依赖关系,其作用机制可能与减轻大鼠脑组织炎性细胞浸润、减轻脑白质脱髓病变、抑制脑组织星型胶质细胞活化有关。

用髓鞘碱性蛋白建立豚鼠变态反应性脑脊髓炎模型

目的 :用髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)豚鼠模型。方法 :提取MBP并经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定后 ,用MBP +完全弗氏佐剂 (CFA)免疫豚鼠 ,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统 (CNS)的病理改变。结果 :实验组豚鼠均表现出典型的EAE症状 ,发病率为 10 0 % ,并在光镜下可见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘病理改变。结论 :用MBP +CFA成功地诱导了豚鼠的EAE模型 ,具有模型稳定、发病率高、动物价廉易得的优点 ,是研究多发性硬化 (MS)

阿托伐他汀对老年自身免疫性脑脊髓膜炎大鼠脑白质的保护作用

目的探讨阿托伐他汀对老年自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)和少突胶质细胞转录因子(OLIG)1蛋白表达的影响。方法取老年Wistar雄性大鼠80只,随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀大剂量组(8 mg/kg组)和阿托伐他汀小剂量组(2 mg/kg组),每组20只。采用新鲜豚鼠50%全脊髓匀浆液和完全弗氏佐剂(CFA)免疫制备EAE模型,免疫后第2天开始,模型组给予生理盐水灌胃,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀不同剂量灌胃,持续灌胃21 d,于第22天处死,取脑干和脊髓待测。采用实时荧光定量和免疫组织化学染色检测各组脑干、脊髓中MBP和OLIG1的mRNA水平和蛋白阳性表达强度。结果与对照组比较,模型组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度明显升高、OLIG1明显降低(P<0.01);阿托伐他汀小剂量组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度升高、OLIG1降低(P<0.01);阿托伐他汀大剂量组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度略升高、OLIG1略降低,无显著差异(P>0.05),模型组、阿托伐他汀大、小剂量组差异显著(P<0.01)。结论阿托伐他汀能够通过下调MBP、上调OLIG1 mRNA水平和蛋白阳性表达强度,对EAE大鼠的脑白质髓鞘损伤具有保护作用,且大剂量作用优于小剂量。

雷公藤内酯醇对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的:探讨雷公藤内酯醇对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和福氏完全佐剂及左旋咪唑诱发大鼠EAE;治疗组在模型组的基础上予以不同剂量雷公藤内酯醇。观察各组的发病情况;HE染色观察病理变化;Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果:低剂量组EAE临床症状较模型组轻;高剂量组未出现临床症状;脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论:雷公藤内酯醇对EAE有治疗作用并与剂量相关。

雌激素对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用

目的探讨雌激素对大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法去卵巢模型组采用豚鼠髓鞘蛋白和完全福氏佐剂诱发去卵巢大鼠;治疗组在去卵巢模型组的基础上予以不同剂量雌激素观察各组的发病情况;HE染色观察病理变化。结果低剂量组EAE临床症状较去卵巢模型组轻;高剂量组未出现临床症状;脑和脊髓炎症细胞浸润明显减少。结论雌激素对EAE有治疗作用并与剂量相关。

牛脊髓髓鞘碱性蛋白的提取及初步鉴定

目的探索一条从牛脊髓中提取牛髓鞘碱性蛋白(M BP)的行之有效的方法,为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型的建立及研究工作奠定基础。方法组织匀浆器将新鲜的牛脊髓捣碎,用London法抽提,考马司亮蓝法鉴定粗提品的含量,SDS-PAGE观测其分子量,M BP免疫W istar大鼠,以鉴定其抗原性。结果粗提品蛋白含量达10m g/m l,粗提品诱导EAE症状典型,发病率高。结论采用London法可从牛脊髓中获取大量的M BP,与其它方法比较产量高,诱导EAE效果好,且本法简便,所以有一定的推广价值。

梓醇配伍大黄酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠大脑内髓鞘碱性蛋白的影响

目的:探讨梓醇配伍大黄酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠神经保护作用及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法:C57BL/6j小鼠随机分为正常组、模型组、激素组、梓醇大黄酸组,以MOG35-55多肽免疫诱导产生EAE。HE染色观察炎性浸润情况,透射电镜观察髓鞘脱失及轴突损伤情况,免疫组化检测MBP的表达情况。结果:梓醇配伍大黄酸能够减少EAE小鼠外观行为改变率、降低死亡率,延长外观行为改变潜伏期;改善其临床症状和神经功能评分,在第20天和第40天,梓醇大黄酸组评分与模型组同期比较具有显著差异(P<0.05)。脑组织病理学检查结果显示:HE染色下各治疗组急性期和缓解期的炎性反应程度有所减轻;透射电镜下各治疗组髓鞘环形层状结构松散变形程度较模型组减轻;正常组MBP平均光密度值显著高于其他各组(P<0.05);急性期与缓解期,激素组、梓醇大黄酸组MBP平均光密度值显著高于模型组同期(P<0.05)。结论:梓醇配伍大黄酸能减轻EAE小鼠炎性反应,减轻EAE小鼠病理改变,缓解EAE小鼠髓鞘损伤。

髓鞘碱性蛋白的提取鉴定及其诱导口服耐受

目的：提取并纯化豚鼠脑、脊髓髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ），对其理化特征和致实验性自身免疫性脑脊髓炎（ＥＡＥ）的活性进行鉴定，并初步探讨口服ＭＢＰ诱导免疫耐受防治ＥＡＥ的作用。方法：以豚鼠脑、脊髓为原料，通过去脂、抽洗、酸溶解、高速离心等步骤提取ＭＢＰ，并在Ｗｉｓｔａｒ大鼠中诱导ＥＡＥ和口服耐受。结果：所提取的ＭＢＰ具有与文献报告结果类似的理化特征和诱发ＥＡＥ的活性；通过口服ＭＢＰ，成功诱导出对ＥＡＥ的免疫耐受。结论：ＭＢＰ对研究ＥＡＥ的发病机制和病理变化及通过口服ＭＢＰ诱导免疫耐受对ＥＡＥ和多发性硬化症的防治具有重要意义。

滋阴固本颗粒对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠视神经MBP表达的影响

目的:探讨滋阴固本颗粒对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠视神经碱性髓鞘蛋白(MBP)表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、激素组及滋阴固本颗粒(中药)低、中、高剂量组。除正常组外,均用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)+完全福氏佐剂(CFA)+百日咳疫苗(PV)致敏雌性Wistar大鼠,建立EAE模型。造模后次日即给予相应干预,激素组给予醋酸地塞米松6.25 mg·kg^(-1)·d^(-1),中药低、中、高剂量组分别给予中药液13.33 g·kg^(-1)·d^(-1)、26.67 g·kg^(-1)·d^(-1)、53.33 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组给予等容量0.9%Na Cl溶液,1次/d,连续灌胃14 d。干预结束后对大鼠进行神经功能评分,免疫组化法检测视神经组织内MBP表达情况。结果:与正常组比较,模型组神经功能评分明显升高(P<0.01);与模型组比较,激素组与中药中、高剂量组大鼠的神经功能评分均明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组视神经MBP表达明显降低(P<0.01),激素组和中药低、中、高剂量组MBP表达水平均明显高于模型组(P<0.01);激素组与中药高剂量组MBP表达差异无统计学意义(P>0.05),中药中、高剂量组MBP表达高于中药低剂量组(P<0.01)。结论:滋阴固本颗粒对EAE大鼠具有防治作用,其作用可能与其增强视神经组织内MBP的表达有关。