HPLC测定广西牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量

目的：建立牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定方法。方法：采用HPLC测定药材中芒柄花素和高丽槐素含量，色谱柱C18。（4．6mm×250mm，5μm），流动相乙腈-0．1％冰醋酸溶液（38：62），检测波长248，310nm，流速1．0mL·min^-1，柱温35℃。结果：芒柄花素进样量在0．0023。0．0600μg与峰面积值呈现良好的线性关系（r=0．9999），平均回收率100．0％，RSD为2．0％（n=6）；高丽槐素进样量在0．0391～1．0156μg与峰面积值呈现良好的线性关系（r=0．9999），平均回收率为100．6％，RSD为0．7％（n=6）。结论：该方法可用于牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定。

反相高效液相色谱法测定金雀根中高丽槐素的含量

建立金雀根中高丽槐素含量测定的反相高效液相色谱分析方法，对6个不同产地的金雀根中高丽槐素的含量进行测定，同时给出金雀根中9种异黄酮类化合物在相同色谱条件下的分析图谱。结果表明在此色谱条件下，10 ～250 μg/mL浓度范围内，高丽槐素的峰面积与浓度具有良好的线性相关性（r^2=0.9999），该方法精密度较高，重现性和稳定性良好，平均回收率为97.31%。

HPLC法测定牛大力中高丽槐素的含量

目的建立HPLC法测定牛大力中高丽槐素含量的方法。方法采用依利特YWG C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液(40∶60),检测波长为310nm,流速为1.0mL.min-1,柱温为27℃。结果高丽槐素进样量在0.06047～0.9675μg范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率为99.5%,RSD为1.80%(n=9)。结论该方法可用于牛大力中高丽槐素的含量测定。

高效液相色谱法测定山豆根中高丽槐素的含量

目的建立测定山豆根药材中高丽槐素的含量测定方法。方法色谱柱为KromasilODS-1(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为310nm,柱温为25℃。结果高丽槐素在0.1908～5.724μg线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.4%,RSD=1.6%。结论该方法简便、准确、重复性好,提供了更好的控制山豆根药材质量的方法。

HPLC测定苦牛大力根部和甜牛大力不同部位中芒柄花素和高丽槐素的含量

目的:建立HPLC同时测定芒柄花素和高丽槐素含量的方法,对比苦牛大力根部和甜牛大力不同部位中芒柄花素和高丽槐素的含量。方法:Welchrom-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(37.5∶62.5),流速1.0mL/min,柱温28℃,芒柄花素和高丽槐素的检测波长分别为248nm、309nm,进样量为15μL。结果:芒柄花素进样量为0.006 8~0.1428μg,高丽槐素进样量为0.152~3.800μg,与峰面积值呈良好的线性关系(r=0.999 9),芒柄花素和高丽槐素的平均回收率分别为97.06%、104.62%。芒柄花素和高丽槐素分布趋势:苦牛大力根部>甜牛大力根部;甜牛大力根部>根茎部>茎>叶。结论:该HPLC条件可用于苦牛大力中芒柄花素和高丽槐素的含量测定;苦牛大力根部芒柄花素和高丽槐素的含量高于甜牛大力根部,提示苦牛大力具有较大的药用开发价值;甜牛大力各部位均含有芒柄花素和高丽槐素且含量不同,本研究结果可为甜牛大力的综合利用提供一定的理论依据。

高效液相色谱法测定槐枝中高丽槐素的含量

为建立槐枝中高丽槐素含量的检测方法,以自制高丽槐素为对照品,采用Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）为固定相,以乙腈-0.1%冰醋酸水溶液（40∶60）为流动相,流速1.0mL/min,检测波长310nm,柱温30℃,进样量为20μL,外标法定量检测贵州6个不同产地（贵州省贵阳市观山湖区、南明区龙洞堡、云岩区东山、白云区都拉营、花溪区小河、贵州省遵义市）槐枝的高丽槐素含量。结果表明：在该色谱条件下,高丽槐素进样浓度为1.328-39.8μg/mL时与峰面积呈良好的线性关系（R2=0.999 6）,平均回收率为102.37%,RSD为1.59%。建立的高效液相色谱法（HPLC）测定槐枝中高丽槐素含量,其方法操作简便、准确,重复性和稳定性好。南明区龙洞堡槐枝的高丽槐素含量最高,达100.56μg/g;其他几个产地的含量差异不大,在57.56-79.9μg/g。

初加工对牛大力中高丽槐素质量分数的影响

药材初加工在中药生产环节中起着关键作用.为筛选牛大力块根的最佳初加工方法,该文采用RP-HPLC法测定了不同初加工方法处理的牛大力块根中高丽槐素的质量分数,并观察记录了牛大力外观性状和干燥时间.研究结果显示,60℃烘干牛大力横断面呈灰黄色,质地也较密实且硬,高丽槐素质量分数最高,为0.100 4mg/g,其次为30℃烘干和晒干处理的,烘干温度高于60℃时随温度升高高丽槐素质量分数降低;蒸煮处理中以蒸45min处理的牛大力中高丽槐素质量分数最高,但其质量分数仅为0.007 1mg/g,煮处理的质量分数显著低于蒸处理.牛大力最适宜的初加工方法为趁鲜切片60℃烘干.

高丽槐素的细胞毒性作用及其相关机制研究

目的探讨高丽槐素对L-02、HEK293、VSMC和H9C2细胞的毒性作用,并初步研究其相关机制。方法采用MTT法检测,凋亡影响用HOE33342和TUNEL法,考察细胞生长抑制率及酶活性。结果高丽槐素对H9C2和L-02细胞增殖和凋亡无影响,L-02细胞对谷草转氨酶(AST)活性降低,对乳酸脱氢酶(LDH)和谷丙转氨酶(ALT)无活性;H9C2细胞无酶活性;对HEK293和VSMC细胞抑制增殖,促进凋亡,LDH活性升高。结论初步确定了高丽槐素对心肌和肝细胞的生长无影响,对人肾上皮细胞和血管平滑肌细胞生长有影响。

高效液相色谱法测定山豆根中红车轴草苷和高丽槐素的含量

目的建立测定山豆根药材中红车轴草苷和高丽槐素含量的HPLC方法。方法色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×200 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为310nm,柱温为25℃。结果红车轴草苷在0.200 6-3.009μg与峰面积线性关系良好,相关系数r=0.999 6,平均回收率为99.6%,RSD=1.2%;高丽槐素在0.305~4.575μg与峰面积线性关系良好,相关系数r=0.999 9,平均回收率为99.2%,RSD=1.1%。结论所用方法简便、准确、重复性好,提供了更好的控制山豆根药材质量的方法。

超高效液相色谱-串联质谱法测定药材牛大力中刺桐碱、芒柄花素和高丽槐素

采用超高效液相色谱-串联质谱联用技术,建立了同时测定中药材牛大力中刺桐碱、芒柄花素和高丽槐素的分析方法。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;质谱采用电喷雾电离,负离子源,以多反应监测模式检测,外标法定量。这3种分析物在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数(R^(2))均大于0.9985,刺桐碱、芒柄花素和高丽槐素的检出限分别为2μg/g、0.02μg/g和30μg/g。在3个添加水平下,考察了该方法的准确度和重复性(n=6),且3种分析物的加标回收率在86.0%~104%之间,相对标准偏差为2.12%~5.57%。采用该方法分别对生长周期为3年、7年、10年和15年的牛大力中3种指标成分进行了检测,比较了3种指标成分含量的差异,并据此确定了7年是最佳栽培年限。该方法具有简单、快速、分离效果好的优点,可用于不同生长周期中药材牛大力中刺桐碱、芒柄花素和高丽槐素的同时分析检测。

高丽槐素对鼻咽癌CNE1细胞增殖、迁移、凋亡的影响及机制

目的:探讨高丽槐素对鼻咽癌(NPC)细胞CNE1增殖、单克隆、迁移和凋亡的影响及潜在的作用靶点。方法:将培养的CNE1细胞随机分为空白对照组和高丽槐素给药组。采用CCK8法检测不同浓度的高丽槐素作用24 h、48 h、72 h后的增殖抑制率,单克隆试验检测各组细胞的克隆形成能力,细胞划痕试验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术试验检测细胞的凋亡情况,利用高通量测序技术,分析CNE1细胞转录组的变化,得到差异表达基因,筛选潜在基因靶点,采用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行验证。结果:CCK8结果显示,高丽槐素能显著抑制CNE1细胞的增殖,且具有时间和浓度依赖性(P<0.05);与对照组比较,高丽槐素能抑制CNE1细胞的克隆能力和迁移能力(P<0.05),且CNE1细胞克隆形成能力与迁移能力随着高丽槐素浓度的增加而减弱;Annexin V-FITC/PI染色结果显示,高丽槐素可使CNE1细胞凋亡率升高(P<0.05);高通量测序结果显示,共有4 232个差异表达基因,表达程度显著升高的基因数有1 060个,表达程度显著降低的基因数有3 172个,高丽槐素可使抑癌基因(P53)、细胞周期依赖激酶抑制剂(P21)、成纤维细胞生长因子(Fgf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(Pi3k)、丝裂原活化蛋白激酶8(Mapk8)等基因下调(P<0.05);RT-qPCR显示高丽槐素能下调P53、P21、Fgf2、Pi3k、Mapk8 mRNA表达水平(P<0.05),检测结果显示与测序结果相一致。结论:高丽槐素可抑制CNE1细胞的增殖、克隆与迁移能力并促进细胞凋亡,其作用机制可能与P53、P21、Fgf2、pi3k、Mapk8等多组基因的转录变化有关。

HPLC同时测定牛大力中刺桐碱和高丽槐素的含量

目的:建立牛大力中刺桐碱和高丽槐素含量的测定方法。方法:采用超声法提取药材,通过对提取工艺及色谱条件进行优化建立测定方法,同时测定牛大力中刺桐碱、高丽槐素的含量。HPLC色谱条件为色谱柱C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%冰醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长为280 nm和310 nm,流速为1.0 m L·min^(-1),柱温为30℃。结果:刺桐碱进样量在0.284 4~1.422 0μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.6%,RSD为1.57%(n=6);高丽槐素进样量在0.087 0~0.435 2μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为100.9%,RSD=2.18%(n=6)。结论:该方法准确、简便、重复性好,可用于牛大力药材中刺桐碱和高丽槐素的含量测定。

RP-HPLC法测定牛大力药材中高丽槐素的含量

目的:建立牛大力药材中高丽槐素的RP-HPLC含量测定方法。方法:采用Cosmosil5 C18-ms-Ⅱ色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温30℃;流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液(43∶57),流速1.0mL.min-1;检测波长为312nm;进样体积为20μL。结果:高丽槐素进样量与峰面积呈现良好的线性关系(r=0.9999),线性范围为0.13～2.0μg;平均加样回收率(n=6)为99.3%,RSD=1.5%。结论:该方法准确、快速、简便,重复性好,可用于牛大力药材的质量控制。

高丽槐素的密度泛函理论研究

从分子结构的层面探讨高丽槐素的构效关系,深化对高丽槐素性质的了解和认识,利用ADF的GGA-B3LYP-3D方法,在TZP基组下对藏药高丽槐素进行了量化计算,得到了高丽槐素的分子几何结构参数,包括键长、键角和二面角的详细数据,在高丽槐素的结构中,碳氧键的键长在(1.385~1.51)?之间,这与氧原子的孤对电子参与了p-π共轭有关。基于对高丽槐素红外光谱的活性分析,IR显示高丽槐素分子化合物存在羟基、环醚、苯环结构。振动频率高表明高丽槐素分子的部分化学键强高,可见高丽槐素酚羟基的化学键不易断开,与其相关的反应活性较小。这与C(1)位置的C-O中的氧原子的p轨道与芳环形成p-π共轭体系,增强了C-O键的稳定性一致,但是,这也造成O-H中的氢原子较易脱除。通过计算得到Log P为-1.56,水合能为-80.766 k J?mol^(-1)。依据计算结果对高丽槐素的分子构型、偶极矩、疏水参数和前线轨道结构进行了详细分析,结果表明,在高丽槐素中B、D、E环是发生反应的主要活性点,与抗真菌作用有较大的关联性。

HPLC法测定多叶越南槐中红车轴草苷及高丽槐素的含量

目的：建立测定多叶越南槐药材中红车轴草苷及高丽槐素2个黄酮类成分含量的高效液相色谱法。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,柱温25℃,以乙腈-0.1%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^-1,检测波长310 nm,进样量10μL,外标法定量。结果：红车轴草苷进样量在0.025 1-2.51μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 0）,平均回收率为97.0%（RSD=1.5%）;高丽槐素进样量在0.025 2-2.52μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 0）,平均回收率为101.3%（RSD=2.2%）。结论：建立的含量测定方法符合方法验证要求。

HPLC测定不同品种牛大力中刺桐碱、芒柄花素和高丽槐素的含量

【目的】比较不同品种牛大力中刺桐碱、芒柄花素及高丽槐素的含量差异,为选育牛大力优良品种提供参考依据。【方法】采用HPLC法测定牛大力不同药用部位中刺桐碱、芒柄花素及高丽槐素的含量,并根据各药用部位的占比,还原牛大力的整体含量。【结果】不同品种牛大力的刺桐碱含量由高到低依次为大叶牛大力(3.889 mg·g^(-1))>中叶牛大力(3.579 mg·g^(-1))>小叶牛大力(1.357 mg·g^(-1)),高丽槐素量的大小依次为大叶牛大力(0.295 mg·g^(-1))>小叶牛大力(0.213 mg·g^(-1))>中叶牛大力(0.181 mg·g^(-1)),而芒柄花素的含量基本一致,且均低于0.02 mg·g^(-1)。【结论】不同品种牛大力刺桐碱、芒柄花素及高丽槐素的含量存在较大差异,大叶牛大力的品质最优,其次为中叶牛大力。

高丽槐素与羟丙基-β-环糊精包合行为及其分子模拟研究

目的:制备高丽槐素(MAA)与羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的包合物,并对其进行表征和分子对接模拟。方法:通过饱和溶液法制备MAA与HP-β-CD的包合物,以载药量为指标,通过正交实验优选最佳的包合工艺。采用核磁共振氢谱(1H NMR和2D NMR)、X-射线粉末衍射(XRD)、差示扫描量热法(DSC)、扫描电镜(SEM)、紫外-可见光谱法(UV)和Job曲线法对包合物进行表征;运用分子对接计算,模拟MAA与HP-β-CD包合物的包合模式。结果:最优制备工艺条件为:包合温度30℃,HP-β-CD与MAA摩尔比为1∶1,包合时间3 h,乙醇和蒸馏水体积比为1∶2;1H NMR和2D NMR,XRD,DSC,SEM,UV和Job曲线法均验证了MAA与HP-β-CD以1∶1的摩尔比形成包合物;分子对接模拟显示包合物最优构象为MAA从HP-β-CD的小口端进入,并贯穿在HP-β-CD的空腔中;对接结果与核磁共振研究结果相一致。结论:包合物形成后MAA的溶解度从0. 35 mg·mL-1提高到3. 2 mg·mL-1,其稳定性也有显著提高。

牛大力的化学成分研究

目的研究牛大力Millettia speciosa的化学成分。方法应用多种色谱技术对牛大力进行分离纯化，并通过光谱方法鉴定化合物的结构。结果从牛大力乙醇提取物的醋酸乙酯部位中分离得到13个化合物，分别鉴定为（-）-高丽槐素（Ⅰ）、芒柄花素（Ⅱ）、3，4，2＇，4＇-四羟基查尔酮（Ⅲ）、圆齿火棘酸（pyracrenie acid，Ⅳ）、（-）-丁香脂素（Ⅴ）、dihydrodehydrodiconiferyl alcohol（Ⅵ）、5-羟甲基糠醛（Ⅶ）、α-甲氧基-2，5-呋喃二甲醇（Ⅶ）、2，5-二羟基苯甲酸（Ⅸ）、豆甾醇（Ⅹ）、豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅺ）、β-谷甾醇（Ⅻ）及胡萝卜苷（ⅩⅢ）。结论化合物Ⅱ～ⅩⅢ均为首次从该植物中分离得到。

蔓生和攀援灌木牛大力的品质研究

目的:评价蔓生和攀援灌木牛大力两个品种的品质。方法:采用HPLC法测定蔓生和攀援灌木牛大力中多糖、高丽槐素、芒柄花素等主要成分的含量,测定块根的淀粉和纤维百分比,以比较二者的品质。结果:蔓生牛大力的多糖含量、高丽槐素和芒柄花素含量均比攀援灌木牛大力高,且纤维含量低。多糖含量随着生长时间的增加而升高,而高丽槐素和芒柄花素含量则随着生长时间的增加而降低。结论:蔓生牛大力品质比攀援灌木牛大力好,同时,蔓生牛大力更适合食用。

不同产地牛大力块根的营养品质与药用品质分析

目的:了解海南和广西两地产牛大力的营养品质差异和主要成分高丽槐素的含量差异,比较两地产牛大力的品质优劣。方法:采用常规的食品营养成分分析方法测定多个营养指标含量及总灰分含量;采用高效液相色谱法测定牛大力中高丽槐素的含量。结果:海南和广西两地产牛大力中多种营养成分的含量分别为:糖,24.12%和7.83%;淀粉,4.93%和26.96%;纤维素,14.54%和60.49%;蛋白质,2.58%和0.031%;氨基酸,0.067%和0.011%;总膳食纤维,0.67%和0.82%;粗脂肪,0.315%和0.59%;维生素B2,0.166、0.156 mg·g-1;维生素C:1.67、1.02 mg·g-1。海南和广西两地产牛大力中含高丽槐素分别为0.064、0.012 4 mg·g-1。海南产牛大力中糖、淀粉、蛋白质、总氨基酸、维生素C和高丽槐素的含量显著高于广西产牛大力(P<0.05),而广西产牛大力中纤维素、总膳食纤维和脂肪含量显著高于海南产牛大力(P<0.05),总灰分与维生素B2含量在两地样品间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:海南与广西两地产牛大力的营养品质及药用品质有明显差异。