高产淀粉酶细菌的分离鉴定及产酶条件优化

从赊店老酒大曲中分离筛选产淀粉酶的细菌,通过碘熏蒸产生透明圈法进行初筛,淀粉酶活力测定进行复筛,结合菌落形态观察和16SrDNA同源序列分析以及生理生化对筛选获得的高产淀粉酶细菌进行鉴定,研究影响细菌产淀粉酶能力的单因素:碳源、发酵时间、初始pH、接种量,采用响应面优化确定最佳产酶条件。结果表明,6-10菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),通过响应面优化确定产酶工艺条件最佳为:发酵时间4d,初始pH 5,接种量10%。优化后产酶能力达到(164.37±3.25)U/mL,是优化前产酶能力的4.43倍,具有较强的产淀粉酶能力。

高产淀粉酶菌株的筛选及其培养条件的优化

为筛选淀粉酶高产菌株,通过比较水解圈与菌落的直径比及3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法所测酶活性高低,筛选得到高产淀粉酶能力的菌株WB-4。通过单因素试验,得到该菌株的最优碳源为可溶性淀粉,最优氮源为蛋白胨。利用Plackett-Burman进行显著因素筛选,发现可溶性淀粉含量、蛋白胨含量、温度为显著因素。利用响应面法对显著因素进行优化,得到菌株的最优培养条件为可溶性淀粉含量18.81 g/L,蛋白胨含量10.02 g/L,温度31.12℃,淀粉酶活性365.12 U/mL,酶活性提高了1.33倍。

淀粉酶高产菌的筛选、鉴定、诱变及生产优化

从多种土壤中筛选高产淀粉酶菌,进而进行诱变育种和产酶条件优化,以便提高淀粉酶产量和丰富产淀粉酶菌株资源.经初筛和复筛,用耦合碘比色法观察菌落直径和水解圈比值的大小,获得了淀粉酶活为140 U·mL^-1的SG3菌株.利用形态学观察、16S rDNA序列和BLAST在线软件进行分析,将SG3菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis).经紫外诱变,获得酶活为234 U·mL^-1的正突变体UV-5,与SG3菌株相比,酶活提高了1.6倍.通过单因素和正交设计实验,获得40℃、pH值为6、48 h、2.5%玉米粉、0.5%酵母膏和转速160 r·min^-1的最优产酶条件,发酵上清液酶活为264 U·mL^-1,与SG3菌株相比,酶活提高了1.9倍.