脑卒中后抑郁大鼠海马和丘脑神经生长因子及其高亲和力受体TrkA mRNA和蛋白的表达变化

目的探讨脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马和丘脑神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体TrkA mRNA和蛋白的表达变化。方法52只清洁级健康成年雌性SD大鼠,随机分为PSD组、脑卒中组、抑郁组及对照组,每组各13只,分析4组大鼠的丘脑和海马NG玖TrkA mRNA表达、免疫阳性细胞数。结果PSD组大鼠海马NGF及TrkA mRNA表达低于对照组(P<0.05),但PSD组、脑卒中组、抑郁组大鼠海马NGF及TrkA mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。PSD组大鼠海马NGF阳性细胞数少于对照组(P<0.05),但PSD组、脑卒中组、抑郁组大鼠海马NGF阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论PSD大鼠海马NGF及其TrkA mRNA蛋白表达降低。

神经生长因子高亲和力受体(TrkA)cDNA片段的克隆

目的 :克隆大鼠背根神经节中 NGF高亲和力受体基因。方法 :从出生 1周大鼠背根神经节中抽提总RNA,设计 Trk A引物 ,进行 RT- PCR扩增。扩增产物直接与 T载体连接后转化 E.coli DH5 α,用蓝 /白斑试验筛选阳性克隆 ,抽提质粒进行酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 :经 RT- PCR获得预期 416bp的目的片段 ,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实 ,克隆片段与 Genbank中 Trk A基因序列 10 0 %同源。结论 :成功地构建了含 Trk A基因 c D-NA的 T载体克隆 。

儿童哮喘IgE高亲和力受体β链基因多态性分析

目的研究儿童哮喘IgE高亲和力受体β链(FcεRI-β)基因多态性.方法采用扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(ARMS-PCR)技术对151例哮喘儿童和105例健康对照儿童进行Fc ε RI-β基因第6外显子区I181L、V183L和第7外显子区E237G位点的多态性检测,分析其与儿童哮喘易感性的关系,并用酶免法检测血清总IgE水平及过敏原表型,研究上述3个编码区的基因型与表型的关系.结果 I181L突变与儿童哮喘有显著相关性(OR=2.00,95%CI=1.10～3.11),哮喘儿童及健康对照儿童均不存在V183L突变或突变率极低,E237G突变与儿童哮喘无显著相关性;I181L及E237G突变均与过敏原或血清总IgE水平增高无关.结论 FcεRI-β I181L基因突变是我国长春地区儿童哮喘的易感基因,但无足够证据证明FcεRI-β基因是儿童哮喘特应性的决定性基因.

高亲和力IgE受体介导的信号传导及其相关的抑制性受体

作者介绍了高亲和力IgE受体介导I型超敏反应,其活化后的信号传导通路,及其相关的抑制性受体方面的研究进展,包括FcγRIIβ、PIR B、SIRPα、CD81及MAFA。对高亲和力IgE受体介导的信号通路和其相关的抑制性受体的研究将有可能发现对抗Ⅰ型超敏反应的新靶点,从而有助于过敏相关疾病的治疗。

IgE及其可溶性高亲和力受体α链与慢性荨麻疹的相关性分析

目的测定慢性荨麻疹(CU)患者血清IgE及其可溶性高亲和力受体α链(sFcεRIα)的水平,了解CU与IgE及其受体的相关性。方法分别采用酶联免疫吸附试验、免疫散射比浊法和免疫印迹法测定99例门诊CU患者(CU组)和88名无过敏史的健康者(对照组)的血清sFcεRIα和IgE水平、过敏原、皮肤划痕试验结果,比较两组间的差异,分析CU患者血清sFcεRIα水平与临床资料之间的相关性。结果 CU组的血清sFcεRIα和IgE水平均显著高于对照组(P值分别<0.01、0.05)。CU患者的血清sFcεRIα与IgE水平呈负相关(r=-0.29,P=0.03)。过敏原与血清sFcεRIα和IgE水平均相关(r=0.624、0.332,P=3.74×10-8、0.043)。CU患者的血清sFcεRIα和IgE水平与皮肤瘙痒、风团数量和大小的评分总和,以及与病程、年龄和性别均不相关(P值均>0.05)。高水平sFcεRIα(>4.974μg/mL)患者皮肤划痕试验的阳性率达95.2%(20/21)。结论血清sFcεRIα和IgE水平与CU相关,CU患者的血清sFcεRIα与IgE水平呈负相关。

高亲和力IgE受体α链cDNA的克隆及序列测定

目的 :为获得编码高亲和力IgE受体(FcεR1)α链的cDNA序列。方法 :从正常人外周血中富集嗜碱性粒细胞 ,提总RNA进行RT PCR ,分子克隆 ,用自动测序及放射自显影测序。结果 :分离并鉴定了该cDNA重组子 ,在159密码子及185密码子分别发现了CAC→CGC与TAT→CAT置换。结论 :建立了一个编码FcεR1膜外区α链的cDNA重组子克隆 ,它不含引导肽序列 ,可能是一个来自中国人的该基因的变异体。

IgE与其高亲和力受体FcεRⅠ的相互作用

IgE在I型变态反应中起着及其重要的作用,其与效应细胞上的IgE高亲和力受体(FcεRI)结合,从而触发细胞内一系列信号转导,使肥大细胞发生脱颗粒并释放大量炎性介质是哮喘等过敏性疾病的重要发病机制。本文主要针对IgE及其受体FcεRI的生物学特点以及它们相互结合这一重要步骤的结构研究进行综述。

高亲和力IgE受体β链基因与儿童哮喘的相关性研究

目的研究FcεRⅠ-β的I181L、V183L和E237G突变在四川地区11岁以下汉族儿童中的存在和频率,判断这些突变与儿童哮喘的相关性。方法利用扩增阻滞突变系统聚合酶链技术(ARMS-PCR)对四川地区的48例汉族哮喘儿童进行FcεRⅠ-β的1811、83、237三个位点的突变进行检测和分析,并与40例健康儿童进行对照。结果在哮喘组中检测到I 181L突变5例(10.4%),V 183L突变2例(4.2%),E 237G突变6例(12.5%),在对照组中未发现I 181L、V 183L、E 237G突变子。结论四川地区汉族儿童中存在I 181L、E 237G突变,不存在V 183L突变或突变率极低。I 181L突变与哮喘存在相关性(P<0.05),E 237G突变和哮喘有相关性(P<0.025),而V 183L与哮喘不存在相关性(P>0.05)。

神经营养素高亲和力受体在脊髓损伤大鼠运动神经末梢的分布

为了探讨脊髓损伤对运动神经末梢中神经营养素受体TrkA、TrkB和TrkC分布密度的影响,本实验采用改良的Allen氏重击法损伤成年SD大鼠T12节段脊髓,应用免疫组织化学方法分别观察T12脊髓损伤4、12、48 h后,下肢肌肉中运动神经末梢内TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应强度的变化。结果显示:大鼠脊髓T12段损伤48 h后运动终板处即有TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应产物分布,其中以TrkA免疫反应最强。而正常成年大鼠下肢肌肉中未见其免疫阳性反应产物。本研究结果提示脊髓损伤可刺激运动神经元表达神经营养素受体,并将受体输送至运动终板处的神经末梢,以摄取靶源性神经营养素。本结果为临床上肌肉注射外源性神经营养素治疗脊髓损伤提供了形态学资料。

原发性肾病综合征患者外周血淋巴细胞亚群、白介素2及其高亲和力受体表达的研究

目的 探讨原发性肾病综合征 ( PNS)患者发病期及缓解期的细胞免疫状态。方法 分别采用单克隆抗体致敏红细胞检测法、白介素 2 ( IL - 2 )生物活性检测法和受体的放射性配体结合法 ,对 39例 PNS患者及 2 5例正常对照的外周血淋巴细胞亚群、IL - 2活性及高亲和力白介素 2受体 ( IL - 2 R)的表达进行检测。结果 PNS组2 2例发病期患者的 T淋巴细胞 ( CD3 )、辅助淋巴细胞 ( CD4)、抑制淋巴细胞 ( CD8)以及 IL - 2、IL - 2 R均显著低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;17例缓解期患者的 CD3 、CD4、IL - 2、IL - 2 R高于发病期组 ,但低于对照组 ,且与后两组的上述各项指标均有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 PNS患者发病期细胞免疫功能低下 ,缓解期有所恢复 ,但仍未达正常水平。缓解期细胞免疫功能低下可能是 PNS易于复发的原因之一。

龙牡汤对特应性皮炎小鼠树突状细胞IgE高亲和力受体γ亚基启动子甲基化水平及Th分化的影响

目的探讨自拟方龙牡汤对特应性皮炎(AD)小鼠树突状细胞(BMDC)IgE高亲和力受体(high affinity IgE receptor,FcERI)γ亚基启动子甲基化水平以及对Th2型免疫反应的影响。方法将30只BALB/c小鼠分成模型组、中药组、空白组,各10只。将模型组、中药组共20只小鼠制作AD模型,中药组给予龙牡汤灌胃,模型组、空白组给予浓度0.9%生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃3周。将各组小鼠常规脱颈椎处死,取股骨和胫骨,分离并培养BMDC;中药组、模型组小鼠处死后,立刻经腹主动脉采血,分离血清,分别配成10%含龙牡汤血清和10%非含药血清。将BMDC随机分为对照组与给药组,对照组加入10%非含药血清,给药组加入10%含龙牡汤血清继续培养48 h。用流式细胞术检测BMDC的CD11c阳性率,用Western blotting法检测BMDC细胞FCER1γ蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测,ELISA法检测BMDC细胞培养液上清中MCP-1、IL-12水平;流式细胞术检测BMDC细胞培养液CD4、IL-4双阳性率。结果与对照组比较,中药组BMDC细胞FCER1γ蛋白表达低(P<0.05);含药血清组FCER1γ亚基启动子甲基化水平高于对照组(P<0.05);中药组比对照组MPC-1水平低,IL-12水平高(P<0.05);与空白组比较,中药组的CD4和IL-4双阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论龙牡汤能够提高AD小鼠突状细胞FcERⅠγ亚基基因调节序列甲基化水平,进而抑制FcERⅠγ亚基与FcERⅠ在细胞表面过度表达,促进了Th1分化,抑制了Th2型免疫反应。

人高亲和力IgE受体α链基因克隆及表达

目的:克隆人高亲和力IgE受体α链基因,并进行原核表达,制备出可溶性FcεRIα蛋白。方法:应用RT-PCR技术,从皮肤组织的总RNA中扩增人高亲和力IgE受体α链基因,连接至PUCm-T载体,重组克隆进行DNA测序。将测序证实的目的片段与高效表达载体pET30a连接,构建重组质粒并转入表达宿主菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化。结果:RT-PCR扩增出一个约950bp的DNA片段,测序结果显示该片段与GenBank上登录的FcεRIα基因序列完全一致;经原核表达后,获得相对分子质量37000的FcεRIα融合蛋白。结论:本实验成功克隆、表达了人FcεRIα基因,制备出可溶性FcεRIα蛋白,为抗FcεRIα抗体的检测及自身免疫性慢性荨麻疹发病机制的研究提供了条件。

中国人群IgE高亲和力受体β链(FcεRIβ)基因-6843G/A多态性位点与哮喘易感性关系的Meta分析

目的探讨中国人群IgE高亲和力受体β链（FcεRIβ）基因-6843G/A多态性与哮喘易感性的关系。方法检索PubMed、Embase、中国学术期刊网全文数据库（CNKI）、万方数据检索系统及维普数据库,收集研究中国人群FcεRIβ基因-6843G/A多态性与哮喘易感性关系的文献进行Meta分析,末次检索时间为2009年10月1日。病例组和对照组基因型分布的比值比（OR）及95%CI为效应指标,应用RevMan 4.2.8软件对各研究原始数据进行统计学分析并检验异质性,采用STATA10.0软件检验发表偏倚。结果根据纳入排除标准,共有9篇文献研究-6843G/A多态性位点,G携带者（GG＋GA）的哮喘发病风险较AA野生型纯合子（AA）增加49%（OR=1.49,95%CI1.01~2.22）。亚组分析显示,G携带者成年发病的风险明显增高（OR=1.83,95%CI1.32~2.52）,而儿童发病风险无显著性差异（OR=1.19,95%CI0.68~2.08）。结论中国人群FcεRIβ基因-6843G/A多态性与哮喘易感性密切相关,突变子G携带者的哮喘发病风险较高。

牛1gG高亲和力受体的分子克隆及序列分析

报道编码牛 Ig G高亲和力受体 ( bovine Ig G Fc receptor I,bo FcγR )的全长序列 .从牛肺巨噬细胞 c DNA文库中克隆的该片段全长 1 .4kb,其中的 ORF为 1 0 50 bp,共编码包括信号肽、胞外域、穿膜区和胞内区在内的 349个氨基酸 ,含有 5个潜在的 N-连接糖基化位点 .与人和鼠的 Ig G高亲和力受体 ( hu FcγR 和 mo FcγR )相比 ,其核苷酸同源性分别为 80 %和 69% ,氨基酸同源性分别为 66%和 55% .研究表明 ,人、牛和鼠的 3种 Ig G高亲和力受体的单体 Ig

高亲和力IgE受体、β亚单位与特应性体质

高亲和力ＩｇＥ受体具有抗寄生虫感染、介导过敏反应及抗原提呈的生物学功能。高亲和力ＩｇＥ受体β链是一个结构上的信号放大器，所以有众多β基因上的多态位点被发现与特应性体质相关。现代分子生物学技术和理论的应用为解开特应性体质这个谜向前迈了一步。

变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测

目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最佳诱导条件表达出s FcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定。ELISA检测人s FcεR1α与血清中Ig E的结合力及血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E及抗FcεR1α自身抗体的含量。结果扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右。p ET-s FcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确。诱导表达、纯化出人s FcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42 000。Western blot法鉴定为人s FcεR1α。人s FcεR1α可以与人血清中Ig E结合。变应性鼻炎(AR)患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。结论获得人s FcεR1α,s FcεR1α与人血清中Ig E有较强的结合力,AR患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。

树鼩IgE高亲和力受体α亚基单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεRIα)的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行检测。方法:采用大肠杆菌原核表达树鼩IgE FcεRIα蛋白,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;通过ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;利用Protein A纯化单克隆抗体,Western印迹检测其特异性,间接免疫荧光及免疫组化对单克隆抗体进行分析。结果:用纯化的树鼩IgE FCεRIα蛋白免疫小鼠,选取效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3轮亚克隆筛选,筛选出5株抗树鼩IgE FCεRIα单克隆抗体,分别命名为HC020、HC021、HC022、HC023和HC024,细胞间接免疫荧光表明5株单克隆抗体均能检测到293T细胞中表达的IgE FCεRIα,其中HC020、HC022、HC024能够通过免疫组化检测组织切片中的IgE FCεRIα。结论:制备了5株IgE FCεRIα单克隆抗体,为今后研究树鼩IgE FCεRIα奠定了基础。