环形泰勒虫裂殖体表面蛋白基因高免疫原性区片段的克隆及其表达

根据环形泰勒虫TaA12 72 1株裂殖体表面抗原 (TaSP)基因的序列设计了 1对引物 ,用PCR扩增出该基因长为 393bp的高免疫原性区片段 (SBxp)。将扩增产物连接到 pGEM TEasy载体上 ,转化入大肠埃希氏菌JM 10 9中进行克隆。随后将重组质粒 pGEM SBxp和表达载体 pGEX 4T 1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后 ,将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体 pGEX 4T 1 SBxp ,并将其转化到BL2 1宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后 ,阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS PAGE电泳和Westernblotting检测。结果 ,SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 4 3ku的融合蛋白 ,该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。

高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定

目的重组及表达高免疫原性骨桥蛋白（OPN）的融合蛋白。方法使用Lasergene软件分析OPN基因，选取出免疫原性高的区域作为目的片段。提取总RNA，应用逆转录、PCR等技术扩增OPN基因目的片段，将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接。构建表达载体，诱导表达OPN融合蛋白（分别含有His，GST—Tag），并进行SDS—PAGE及Western blotting鉴定。结果扩增后获得一条351bp的DNA片段，经测序鉴定为目的片段序列，并实现了可溶性高表达，经Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白。结论采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫原性的OPN融合蛋白，为进一步开发OPN诊断试剂打下基础。