基于克隆测序技术的人类白细胞抗原基因高分辨率分型方法的建立

运用优化的扩增和克隆测序技术,建立了人类白细胞抗原(HLA-B)基因的高分辨率分型方法。针对HLA-B基因保守区序列设计引物进行等位基因扩增,基于质粒不相容原理将杂合型等位基因有效克隆入质粒DNA中,经细菌培养后进行Sanger测序,根据测序结果经ClustalX2软件分析和IMTG/HLA数据库的BLAST比对即可完成HLA-B基因的高分辨率分型。利用建立的方法对7例临床样本进行了HLA-B基因分型,并且与第三方直接碱基序列分析基因分型技术(PCR-SBT)进行比对,结果完全一致。本方法无需专业分型软件,准确度高,成本低;采用通用引物进行等位基因的扩增和测序,无需传统方法中繁琐的引物设计和过程优化,实现了HLA-B基因的高分辨率分型。

高分辨分型方法分析福建地区HLA-B15组的基因多态性

目的研究福建地区HLA-B15组等位基因的分布特点,探讨其可能对临床供者选择的影响。方法用聚合酶链反应序列特异引物(PCR-SSP)方法,从已分型的300例供者中选出低分辨率结果为B*15的样本进行高分辨率分型。结果共检出6种HLA-B15的等位基因,分属于4种血清学特异性。结论福建人群B*15基因组中B*1501占优势,其次为B*1502。为选择最适供者,建议临床配型中采用高分辨率基因分型。

慢性阻塞性肺疾病高分辨率CT分型与气道炎症之间的关系

研究慢性阻塞性肺疾病患者的高分辨率CT分型与临床特征和气道炎症之间的关系。方法:选择2018年6月到2020年6月在我院住院治疗的87位慢性阻塞性肺疾病患者,按照高分辨率CT影像的特点分为三大类,A型特点是,没有或有轻微的肺气肿,有或者没有支气管管壁的厚度增加;E型的特点是肺气肿大于等于2级,支气管的管壁不增厚;M型的特点是肺气肿大于等于2级并且支气管的管壁有增加。对比3种类型之间的肺功能、一年内疾病加重的次数、吸烟指数、超敏c反应蛋白、血清肺泡表面活性蛋白,和血浆纤维蛋白原的水平。结果:A型慢阻肺患者的吸烟指数是(21.42±23.27)包年,显著低于M型的(38.06±33.83)包年与E型的(38.71±41.29)包年(P<0.05)。A型所有患者里一年内疾病急性加重≥2次的患者占比21.2%,与M型的89.4%和E型的42.8%相比明显更低,差异在统计学上有意义(P<0.05)。A型慢阻肺患者的FEV1/FVC为(58.92±11.16)%,显然优于M型的(51.74±8.86)%和E型的(50.64±9.25)%(P<0.05);A型慢阻肺患者的RV/TLC是(50.65±9.7)%,显然低于M型的(77.21±10.55)%和E型的(74.72±13.76)%(P<0.05)。M型患者的血清hs-CRP水平与血浆Fig分别为(37.21±40.6)mg/L和(5.32±1.66)g/L,显著高于A型的[(9.?57±13.?68)?mg/L、(4.?26±1.?36)?g/L]和E型的[(6.27±4.34)mg/L、(3.?85±1.?58)?g/L](P?<0.?05),但3组之间的血清SP-D的水平相当。LAA≥2级患者的血清hs-CRP水平、吸烟指数和RV/TLC显然高于小于2级的患者(P<0.05);支气管管壁增厚≥2级的患者在血清hs-CRP水平和血浆Fig和RV/TLC上都比小于2级的患者高(P<0.05)。结论:高分辨率CT影像不同表型的慢阻肺患者的气道炎症水平与临床症状有差别,其中的M型患者的炎症指标和吸烟指数更高,急性加重的频率更高。

中国汉族人群HLA-B^＊40组的多态性研究

为了研究中国汉族人群HLA-B*40等位基因的分布特点,探讨其可能对临床供者选择的影响,从中华骨 髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者,用PCR-SSO方法进行HLA-B基因分型;另从已分型的1 270例供者中 选出低分辨率结果为B*40纯合子的样本。所有B*40阳性标本采用PCR-SBT及PCR-SSP方法进行高分辨率分 型。结果表明:随机抽取的381例样本通过Hardy-Weinberg平衡检验,HLA-B*40的基因频率为0.1692。在实验 中仅检测到B*4001,B*4002,B*4003,B*4006,其血清学特异性分属B60,B61。各等位基因相对频率B*4001为 0.1192.B*4002为0.0154,B*4003为0.0038,B*4006为0.0308。B*40纯合子在高分辨水平上检测,其等位基因 表现出一定的规律性,低分辨结果为B*40XX(B*4001组),-,高分辨都是B*4001;低分辨为B*40XX(B*4002 组),一,高分辨则为B*4002或B*4006或二者杂合子。结论:中国汉族人群B*40基因家族中B*4001占绝对优 势。为了选择最适供者,建议临床配型中使用高分辨率基因分型。