牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E2基因不同高可变区缺失型核酸疫苗的构建

为了构建牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)囊膜蛋白E2基因高可变区(hyper variable region,HVR)缺失型核酸疫苗,为BVDV防控提供新的方法,试验依据GenBank中BVDV基因组序列设计引物,以BVDV新疆分离株TC cDNA为模板,扩增E2基因并测序,使用生物信息学软件分析E2蛋白的跨膜区和HVR区域等;采用常规PCR和搭桥PCR等方法扩增E2基因的不同缺失型HVR区域,并将其插入到真核表达载体pVAX1中,构建成真核表达质粒;分别于0,2,4周时免疫Balb/c小鼠,并在首次免疫后0,14,28,42天采集血清,通过ELISA法测定IgG水平。结果表明:成功扩增出BVDV TC株E2基因,大小为1122 bp;E2基因与BVDV 1b毒株HP-KY-PK13(登录号KT355592.1)及BVDV 1b毒株3156(登录号JN704144.1)的E2基因具有较高的同源性,E2 HVR1区域位于E2基因N端,HVR2区域位于E2基因中间部位;成功构建了E2基因不同的HVR缺失型真核表达质粒pVAX1-E2 HVR1△1-20、△1-64、△21-40、△41-64和pVAX1-E2 HVR2△140-216;与免疫pVAX1相比,E2基因不同HVR缺失质粒及野生型E2质粒诱导的IgG抗体水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);而在首次免疫42天时,用pVAX1-E2 HVR1△41-64免疫诱导的IgG抗体水平最高,约为pVAX1-E2的3.9倍。说明用pVAX1-E2 HVR1△41-64制备的核酸疫苗能诱导动物产生较高水平的IgG。